用于判定急性移植物抗宿主病风险的方法

用于判定急性移植物抗宿主病风险的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于预测急性移植物抗宿主病风险的方法和相应产品（如试剂盒）， 以及用于选择移植供体和用于调节与这种风险预测相关联的治疗的相应方法。
【背景技术】
[0002] 恶性血液病的一线疗法一般包括化学疗法和/或使用单克隆抗体的化学免疫疗 法。然而，一些患者经历复发或疾病进展，有时为标准治疗所难以治疗。
[0003] 包括同种异体干细胞移植（SCT)的免疫疗法代表对这些难以治愈或者不太可能 使用标准化学治疗治愈的患者的替代治疗方法。造血干细胞移植（HSCT)是这样一种疗法， 其涉及从供体或脐带血取得造血干细胞，并将其静脉输注至经调节以接受移植的受体中。 然而，因为严重的移植后并发症包括移植物抗宿主病（GVHD)，移植后的总体生存率仍然仅 在40%至60%之间。GVHD是由转移或移植的免疫活性细胞（例如，成熟T细胞）针对宿主 组织的免疫反应引起的疾病的总称，并且在某些情况下能诱发严重器官毒性导致死亡。
[0004] 因此，人类白细胞抗原（HLA)匹配是减少移植物排斥和GVHD风险所必不可少的。 然而，非HLA基因也影响到移植结果，甚至在接受来自HLA相同匹配同胞供体（MSD)的移植 的患者中GVHD也可能是致命的。此外，MSD仅可用于大约三分之一患者，因此，替代性供体 是必要的。更广泛的使用HLA匹配不相关供体（MUD)而不是脐带血或不匹配的相关供体， 但在接受来自MUD的移植的患者中，也必须考虑GVHD的风险。
[0005] 因此，仍然需要一种方法用于预测在接受移植的患者中发展为GVHD的风险（或反 之，用于判定候选供体是否具有在受体中诱导GVHD的风险的方法）。
[0006] 最近，两个回顾性研究，通过分析同种异体HSCT(Rubio等人，Blood 2012)或供 体移植物（Chaidos等人，2012年）的受体外周血干细胞（PBSC)中效应物和调节性淋巴 细胞的频率分布，证明了恒定型（invariant)NKT (iNKT)细胞在预测急性移植物抗宿主病 (aGVHD)中的临床相关性。在受体中iNKT细胞的损伤重构或在移植物中低CD4-iNKT细胞 剂量被证明表示独立的参数，其能够显著预测HSCT后aGVHD的发生。
[0007] 然而，医生并不满足于基于在血液或iNKT细胞的移植物样本中直接判定发展 aGVHD的风险的预测方法，因为难以确定在低和高iNKT细胞之间的阈值，例如导致对中间 结果误判的风险。

【发明内容】

[0008] 在第一方面，本发明涉及用于判定候选人类移植供体是否具有在人类移植受体中 诱导急性移植物抗宿主病（aGVHD)风险的方法，包括以下步骤：i)对获自候选人类移植供 体的生物样本的恒定型NKT(iNKT)细胞群体进行扩增；ii)检测在步骤i)中获得的群体 中CD4-iNKT细胞亚群扩增的存在与否；以及iii)当没有从iNKT细胞群体中扩增出亚群 CD4-iNKT细胞时，推断出候选人类移植供体具有在人类移植受体中诱导aGVHD的增加的风 险。
[0009] 在第二方面，本发明涉及用于选择人类移植供体以在人类移植受体中减少诱导 aGVHD风险的方法，包括以下步骤（i)进行根据本发明的用于判定风险的方法，以及（ii)根 据所述风险判定选择所述供体。
[0010] 在第三方面，本发明涉及在人类移植受体进行移植物移植术之后用于调节施用至 人类移植受体的免疫抑制治疗的方法，包括下列步骤（i)进行根据本发明的用于判定风险 的方法，以及（ii)调节免疫抑制治疗。
[0011] 在另一方面，本发明还涉及用于实施根据本发明的上述方法的试剂盒。
【具体实施方式】
[0012] 本发明人已经证明，在分析⑶4-iNKT细胞亚群的扩增能力（expansion capacity)之前，将获自候选供体的PBSC移植物或血液样本的iNKT细胞群体扩增12或15 天的在先步骤，允许安全地判定所述候选供体是否具有在受体中诱导急性GVHD的风险。事 实上，在所述扩增之后，只有两个不同的可能：没有从iNKT细胞群体中扩增出CD4-iNKT细 胞亚群（扩增因子< 1)，因此供体具有在受体中诱导急性GVHD的增加的风险，或者从iNKT 细胞群体中显著地扩增出CD4-iNKT细胞亚群（扩增因子>1)，因此供体几乎没有在受体中 诱导急性GVHD的风险。
[0013] 判定急性移植物抗宿主病（aGVHD)风险的方法：
[0014] 因此，在第一方面，本发明涉及用于判定候选人类移植供体是否具有在人类移植 受体中诱导急性移植物抗宿主病（aGVHD)的风险的方法，包括以下步骤：i)对获自候选人 类移植供体的生物样本的恒定型NKT (iNKT)细胞群体进行扩增；ii)检测在步骤i)中获得 的群体中亚群CD4-iNKT细胞扩增的存在与否；以及iii)当没有从iNKT细胞的群体扩增出 CD4-iNKT细胞亚群时，结论是候选人类移植供体具有在人类移植受体中诱导aGVHD的增加 的风险。
[0015] 如本文所用，术语"风险（risk) "指将在特定时间段发生某事件的可能性，如急性 GVHD(aGVHD)的发作，并且可以指受试者"绝对"风险或"相对"风险。可参照针对相关时间 群（cohort)的实际观察后测量（post-measurement)来测量绝对风险，或者参照针对相关 时间段所遵循的统计学上历史上有效的群所得出的指数值来测量绝对风险。相对风险是指 受试者的绝对风险相较于低风险群的绝对风险或平均群体风险相比的比率，这种比率随着 临床风险因素评估方式的不同而不同。通常使用优势比来进行no-转换（no-corwersion)， 优势比为对给定的测试结果而言阳性事件相对阴性事件的比例（优势比根据式ρΛ?-ρ)， 其中P为事件的概率（probability)，（1-ρ)表示不发生事件的概率）。
[0016] 在本
【发明内容】
中"风险判定"包括预测事件可能发生的概率、优势比或者可能 性。风险判定也可包括预测未来临床参数、传统实验室风险因子值或aGVHD的其它指数 等，如年龄、性别不匹配、HLA-测试等参考预先测量群体的绝对或相对的项（term)。 本发明的方法可以用来分类测量移植受体中诱导aGVHD的风险，继而定义移植供体种类 (category)的风险范围（spectrum)将移植供体定义为是否具有诱导aGVHD的风险，从而用 于选择安全的供体。
[0017] 如本文所用，术语"移植供体"是指提供待移植的器官、组织或细胞的受试者。如本 文所用，术语"移植受体"是指将接受待移植的器官、组织或细胞的受试者。如本文所用，术 语"移植（transplant)"（或"移植物（graft)"）指的是，移植到受试者中之后，游离（未 附着的）细胞、组织或器官整合到组织中。造血干细胞移植（HSCT)的上下文中，移植是多 能造血干细胞，其通常是来自于G-CSF动员（mobilization)之后的外周血、骨髓或脐带血。
[0018] 如本文所用，术语"生物样本"是指分离自受试者（例如，移植供体）的任何样本， 优选含有外周血单核细胞（PBMC)的样本。这类样本的实例包括体液、组织、细胞样本、器 官、活组织检查等。最优选的样本是血液样本、脐带血样本或移植样本（如外周血干细胞 (PBSC)移植物样本或骨髓（BM)移植物样本）。
[0019] 如本文所用的术语"血液样本"指包括全血、血浆和血清的样本。
[0020] 如本文所用，术语"NKT细胞"（自然杀伤T细胞）是指淋巴细胞的亚群，更具体来 说CDld限制的T细胞的唯一子集，其提供先天和适应性免疫应答之间的连接。事实上，共 表达T细胞受体和NK细胞标记物的NKT细胞对于各种免疫疾病（包括自身免疫性疾病、感 染性疾病和癌症）的若干方面是必不可少的。传统的T细胞识别由主要组织相容性复合体 (MHC) MHC 1类或MHC 2类呈递的小肽抗原，与其不同的是NKT细胞识别CDld (MHC 1类样分 子）所呈递的糖脂抗原。
[0021] 如本文所用，术语"iNKT"（恒定型NKT细胞）指的是NKT细胞的主要子集， 也被称为1型NKT细胞，其表达恒定型天然T细胞受体（TCR)，所述TCR在小鼠中由 V[a ]14_J[a ]18链组成（在人中由V [a ]24_J[a ]18组成）。通过配体例如α-半乳糖神 经酰胺刺激TCR，iNKT细胞迅速产生很多细胞因子，包括IL-4、IFN-[ γ ]、IL-12和GM-CSF。 还应当指出的是，iNKT细胞包括两个主要子集（或亚群），即⑶4+和⑶4-细胞，其在人类 中具有不同细胞因子分泌谱（profile)。这种对配体快速和强效应答使得iNKT细胞能够增 强或调节在先天性和获得性免疫中各种免疫细胞的活性。
[0022] 在一个实施方案中，aGVHD是II - IV级的aGVHD。
[0023] 在一个实施方案中，候选人类移植供体是HLA相同匹配的同胞供体（MSD)。在另一 个实施方案中，候选人类移植供体是HLA匹配的无关供体（MUD)。在又一个实施方案中，候 选人类移植供体是无关的不匹配供体。移植物也可以来自单倍同一1性（haploidentical) 的供体或来自4/6至6/6 HLA (A、B、DR)兼容脐带血。
[0024] 在一个实施方案中，⑶4-iNKT细胞的亚群是⑶3+⑶4-TCR Va 24V0 11细胞的群 体。
[0025] 可以通过不同的方法使用本领域技术人员已知的非特异性或抗原特异性刺激来 进行扩增iNKT细胞群体的步骤（i)。通常地，通过使用糖脂抗原（例如，a-半乳糖神