或释放作用的条件，例如持续时间、温度、pH和培养基中释放剂 的浓度取决于例如所述分析物的性质、所述内源性结合物质的性质、所述样品的性质以及 所述释放剂的性质。通常，条件足以实现所需的效果或功能。在根据本文描述的原理的一 些实例中，释放剂的有效浓度为约〇. 01至约20 mg/mL，或约0. 01至约10 mg/mL，或约0. 01 至约5 mg/mL，或约0· 1至约20 mg/mL，或约0· 1至约10 mg/mL，或约0· 1至约5 mg/mL，或 约0.1至约I mg/mL。预处理样品以从内源性结合物质释放所述分析物可以在进行测定之 前作为单独的步骤或在测定中作为第一步骤进行。在这两者任一种的情况下，可能需要一 种或多种试剂来停止消化剂和/或释放剂的作用。
[0049] 用于根据本文所述的原理在样品的部分上进行测定的条件包括在通常提供最佳 的测定灵敏度的适度的PH下在水性缓冲培养基中进行所述测定。水性培养基可以仅仅为 水，或可以包含〇. 1至约40体积％的助溶剂。所述培养基的pH将为例如约4至约11，或约 5至约10,或约6. 5至约9. 5。所述pH将通常是任何特异性结合对的结合成员的最佳结合， 所述测定的其它试剂，例如信号产生系统成员的最佳PH等之间的折衷。各种缓冲剂可以用 于获得所需的PH和在所述测定期间维持pH。通过说明而非限制的方式，说明性的缓冲剂 包括例如硼酸盐、磷酸盐、碳酸盐、TRIS、巴比妥、PIPES、HEPES、MES、ACES、MOPS和BICINE。 所使用的具体缓冲剂并非关键，但在单独的测定中可以优选一种或另一种缓冲剂。
[0050] 可以在所述测定方法中使用各种辅助材料。例如，除了缓冲剂之外，所述培养基还 可以包含所用培养基和试剂的稳定剂。在一些实施方案中，除了这些添加剂之外，还可以包 含蛋白质，例如白蛋白；有机溶剂，例如，甲酰胺；季铵盐；聚阴离子，例如硫酸葡聚糖；结合 增强剂，例如聚亚烷基二醇；多糖，例如葡聚糖或海藻糖。所述培养基还可以包含用于防止 形成血块的试剂。这样的试剂是本领域中公知的，并且包括但不限于例如H)TA、EGTA、柠檬 酸盐、肝磷脂。所述培养基还可以包含一种或多种防腐剂，例如，但不限于例如叠氮化钠、硫 酸新霉素、PR〇CLIN?300、链霉素。所述培养基还可以包含一种或多种表面活性剂。如果使 用，任何上述材料以足以获得所需的效果或功能的浓度或量存在。
[0051] 可以以一个或多个时间间隔（包括在包含上述的那些试剂的测定中加入使用的 各种试剂之间的任何时间间隔）将一个或多个培养周期施加于所述培养基。通常在足以发 生所述试剂的各种组分的结合以及所述样品中分析物的结合的温度和时间下培养所述培 养基。通常使用适度的温度进行所述方法，并且测量期间通常为恒温，优选室温。在一些实 例中，培养温度例如为约5°C至约99°C，或约15°C至约70°C，或约20°C至约45°C。在一些 实例中，所述培养的时间周期例如为约〇. 2秒至约24小时，或约1秒至约6小时，或约2秒 至约1小时，或约1分钟至约15分钟。所述时间周期取决于所述培养基的温度和各种试剂 的结合速率，所述结合速率由缔合速率常数、浓度、结合常数和离解速率常数决定。
[0052] 本文所讨论的许多测定使用信号产生系统，所述系统可具有一种或多种组分，至 少一种组分是标记物。所述信号产生系统产生与样品中分析物的存在有关的信号。所述信 号产生系统包含产生可测量的信号所需的所有试剂。所述信号产生系统的其它组分可以 包含在显影液中，并且可以包括但不限于例如底物、增强剂、活化剂、化学发光化合物、辅因 子、抑制剂、清除剂、金属离子以及结合信号产生物质所需的特异性结合物质。所述信号产 生系统的其它组分可以是例如辅酶、与酶产物反应的物质、其它酶和催化剂。所述信号产生 系统提供可通过外部手段，通过使用电磁辐射，理想地通过目测检测的信号。示例性的信号 产生系统在美国专利号5, 508, 178中描述，其相关公开内容通过引用并入本文中。
[0053] 术语"标记物"包括聚（氨基酸）标记物和非聚（氨基酸）标记物。术语"聚（氨基 酸）标记物部分"包括属于蛋白质的标记物，例如但不限于例如酶、抗体、肽和免疫原。对于 标记物蛋白质，例如酶，分子量范围将为约10, 〇〇〇至约600, 000,或约10, 000至约300, 000 分子量。例如，每约200, 000分子量的蛋白质通常存在至少一种根据本文描述的原理的化 合物（类似物基团），或每约150, 000分子量至少约1种化合物，或每约100, 000分子量至 少约1种化合物，或每约50, 000的分子量至少约1种化合物。在酶的情况下，类似物基团 的数目通常为1至约20,约2至约15,约3至约12,或约6至约10。
[0054] 通过说明而不是限制的方式，酶包括氧化还原酶，例如脱氢酶，例如葡萄糖-6-磷 酸脱氢酶和乳酸脱氢酶；涉及过氧化氢的产生和过氧化氢的使用以将染料前体氧化为染 料的酶，例如辣根过氧化物酶、乳过氧化物酶和微过氧化物酶；水解酶，例如碱性磷酸酶和 β -半乳糖苷酶；萤光素酶，例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶；转移酶；酶的组合，例如 但不限于糖氧化酶，例如葡萄糖和半乳糖氧化酶，或杂环氧化酶，例如尿酸酶和黄嘌呤氧化 酶，其与使用过氧化氢氧化染料前体的酶，即例如辣根过氧化物酶、乳过氧化物酶或微过氧 化物酶的过氧化物酶偶合。
[0055] 术语"非-聚（氨基酸）标记物"包括非蛋白质的那些标记物。所述非聚（氨基 酸）标记物能够直接被检测或可通过产生可检测信号的反应检测。所述非聚（氨基酸）标 记物可以是同位素的或非同位素的，并且通过说明而非限制的方式，可以是例如放射性同 位素、发光化合物（其包括但不限于例如荧光化合物和化学发光化合物）、催化剂、促进剂、 染料、辅酶、酶底物、放射性基团和可扩增的多核苷酸序列的多核苷酸编码。
[0056] 在一些实例中，所述信号产生系统的一个成员是有机小分子，其表不具有约200 至约2, 000,或约200至约1，500,或约200至约1，000,或约200至约500分子量的分子。这 样的有机小分子包括但不限于例如生物素、荧光分子（例如荧光素和罗丹明）、化学发光分 子和二硝基苯酚。有机小分子的结合配偶体是特异性地识别并结合至所述小分子的分子。 小分子的结合配偶体由所述小分子的性质限定，并且包括但不限于，例如抗生物素蛋白、抗 生蛋白链菌素、有机小分子的抗体（其包括但不限于荧光分子的抗体（例如荧光素抗体和 罗丹明抗体）、化学发光分子的抗体、二硝基苯酚的抗体）。
[0057] 在一些测定的实例中，使用载体。所述载体可以由有机或无机的、固体或液体的水 不溶性材料组成，并且其可以是透明的或部分透明的。所述载体可具有若干形状的任一种， 例如但不限于颗粒（颗粒状载体），其包括珠粒、薄膜、膜、管、井、条、棒、纤维或平坦表面， 例如板或纸。所述载体可以或可以不在其中使用它的培养基中悬浮。可悬浮载体的实例是 聚合物材料，例如胶乳、脂双层或脂质体、油滴、细胞和水凝胶以及磁性颗粒。其它载体组合 物包括聚合物，通过说明而非限制的方式，例如硝化纤维素、醋酸纤维素、聚（氯乙烯）、聚 丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚（4-甲基丁烯）、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚 (对苯二甲酸乙二醇酯）、尼龙、聚（丁酸乙烯酯），例如每种可以单独使用或与其它材料结 合使用。所述载体可以用或可以不用例如染料、催化剂或其它可检测基团进一步标记。
[0058] 在一些实例中，所述载体可以是颗粒。所述颗粒具有至少约0. 02微米且不大于约 100微米的平均直径。在一些实例中，所述颗粒具有约〇. 05微米至约20微米，或约0. 3微 米至约10微米的平均直径。所述颗粒可以是有机的或无机的、可溶胀的或非溶胀的、多孔 的或非多孔的，优选具有通常为约0.7 g/mL至约1.5 g/mL的接近于水的密度，并且可以由 可以是透明的、部分透明的或不透明的材料组成。所述颗粒可以是生物材料，例如细胞和微 生物，例如红血球，白血球，淋巴细胞，杂交瘤，链球菌，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，病毒。 所述颗粒也可以是由有机和无机聚合物、脂质体、胶乳颗粒、磁性或非磁性颗粒、磷脂囊泡、 乳糜微粒、脂蛋白等组成的颗粒。在一些实例中，所述颗粒是二氧化铬（chrome)颗粒或胶 乳颗粒。
[0059] 化学发光颗粒是已经与化学发光化合物缔合的颗粒。如本文所使用的，短语"与… 缔合"表示化合物，例如化学发光化合物和颗粒可以通过例如直接或间接键合、吸附、吸 收、并入或溶解来缔合。可以使用的化学发光化合物的实例是美国专利号5, 340, 716和 6, 251，581中阐述的那些，其相关的公开内容通过引用并入本文中。在根据本文描述的原 理的一些实例中，化学发光化合物是可光活化物质，其直接或由光敏化激发时，或与单线态 氧反应时，经过化学反应以形成能够在光（通常在250-1200 nm的波长范围内）发射的同 时或随后分解的亚稳态反应产物。术语"可光活化的"包括"可光化学活化的"。在一些 实例中，所述化学发光化合物是与单线态氧反应以形成二氧杂环丁烷或二氧杂环丁酮的那 些。后者通常是富电子烯烃。这样的富电子烯烃的示例是烯醇醚、烯胺、9-亚烷基-N-烷 基-9, 10-二氢化吖啶（alkylacridan)、芳基乙烯基醚、二噁烯、芳基咪唑、9-亚烷基-苍耳 烷和光泽精。其它化合物包括鲁米诺（Iuminol)和其它邻苯二甲酰肼，以及受到保护免于 经历化学发光反应的化学发光化合物，其借助于通过光化学不稳定保护基团来保护，这样 的化合物包括，例如，萤火虫萤光素、水通道蛋白（aquaphorin)和鲁米诺。可以使用的这样 的化学发光化合物的实例是美国专利号5, 709, 994中阐述的那些，其相关公开内容通过引 用并入本文中。
[0060] 敏化剂颗粒是已经与敏化剂化合物缔合的颗粒，其包括但不限于光敏剂化合物。 可以使用的敏化剂化合物的实例是美国专利号5, 340, 716和6, 251，581中阐述的那些，其 相关公开内容通过引用并入本文中。
[0061] 光敏剂是通常通过用光激发产生单线态氧的敏化剂。在一些实例中，所述光敏剂 比所述化学发光化合物吸收更长的波长且具有比所述化学发光化合物较低的能量三重态。 所述光敏剂可以是可光活化的（例如染料和芳族化合物）。所述光敏剂通常是由共价键合 的原子组成的化合物，通常具有多个共辄双键或三键。所述化合物应当吸收在200-1100 nm，通常300-1000 nm，优选450-950 nm的波长范围内的光。典型的光敏剂包括但不限于例 如丙酮、二苯甲酮、9-噻吨酮、曙红、9, 10-二溴蒽、亚甲基蓝、金属卟啉（例如血卟啉）、酞 菁、叶绿素、玫瑰红、勃克明斯特富勒稀（buckminsterfullerene)，以及这些化合物的衍生 物。其它光敏剂的实例列举在N.J. Turro，〃Molecular Photochemistry〃，第 132 页，W. A. Benjamin Inc.，N.Y. 1965中。所述光敏剂有助于其中通过单线态氧活化的光活化。通常， 所述光敏剂吸收光并由此形成激发的光敏剂使氧活化以产生与化学发光化合物反应，产生 亚稳定发光中间体的单线态氧。
[0062] -些已知的测定使用信号产生系统（sps)，其使用第一和第二sps成员。所述sps 成员可以是关联的，因为一个sps成员的活化产生产物，例如光或活化产物，其导致另一个 sps成员的活化。
[0063] 在这样的测定的实例中，所述sps成员包括敏化剂，例如光敏剂，以及包括化学发 光化合物的化学发光组合物，其中所述敏化剂的活化产生使所述化学发光组合物活化的产 物。所述第二sps成员通常产生与结合和/或未结合的sps成员的量，即结合或未结合至 正在检测的分析物的sps成员的量有关的可检测信号。在根据本文描述的原理的一些实例 中，所述敏化剂试剂或所述化学发光试剂的一种包含根据本文描述的原理的抗体试剂。
[0064] 枏据本f描沭的原理的方法的实例 如以上所讨论的，根据本文描述的原理的方法涉及确定样品中第一同分异构分析物与 第二同分异构分析物的量。在所述方法中，确定第一测量值和第二测量值。为了确定所述 第一测量值，通过使用第一抗体在所述样品的第一部分上进行测定来测量所述第一同分异 构分析物和第二同分异构分析物的总量，所述第一抗体对所述第一同分异构分析物和所述 第二同分异构分析物的每种都展示出足够的测定结合亲合力。在所述实例中，所述第一抗 体是通过上述过程之一制备的单克隆抗体。
[0065] 所述样品部分可以在不干扰测定的任何适宜的培养基中制备；通常使用水性培养 基。所述样品部分的规模取决于例如同分异构分析物的性质、所述测定的性质、用于进行测 定的各种试剂的性质和包含所述分析物的复合物的性质的一个或多个。对测定中所涉及 的两种测量，所述样品部分的规模应该基本相同。在一些实例中，所述样品部分的体积为 例如约1 μ L至约100 μ L，或约2 μ L至约100 μ L，或约5 μ L至约100 μ L，或约10 μ L至约 100 μ L，或约1 μ L至约80 μ L，或约1 μ L至约60 μ L，或约1 μ L至约40 μ L，或约1 μ L至约 20 μ L，或约5 μ L至约50 μ L，或约10 μ L至约50 μ L。
[0066] 在第一样品部分上进行所选择的确定第一测量值的测定，可以如上文讨论的对所 述第一样品部分进行预处理以从内源性结合物质中释放分析物