min ;
(2)将混合溶液转移至高压反应釜中，300°C温度下反应14 h ;
(3)所得产物用超纯水和乙醇各离心洗涤3次，80°C下真空干燥15 h，制得多孔二氧化钛纳米颗粒；
(4)将制得的30mg 二氧化钛加入至50 mL、20 mmol硝酸镉溶液中，超声2 min, 50 °C水浴振荡4 h，离心水洗；
将20 mg镉离子功能化的二氧化钛纳米颗粒分散在7.5 mL、4 mg/mL聚丙稀胺盐酸盐溶液中，搅拌1 h ;
(6)加入400PL、质量分数为5%的戊二醛，震荡2 h ;
(7)将所得溶液离心洗涤，用pH7.0的PBS分散，加入100 μ?、200 μ g/mL地塞米松抗体震荡20 h，离心洗去多余抗体，分散在2 mL含质量分数为2% BSA的pH 7.0的PBS溶液里，于4 °C冰箱中储存以备用。
[0022]实施例7地塞米松的检测
(1)在所制备的光电化学传感器电极表面，滴加6 μ?、0.1 mol/L的硫化钠溶液，放置30 min ；
(2 )使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ΙΤ0修饰电极为工作电极，在10 mL、pH 6.0的PBS，0.05 mol/L的抗坏血酸缓冲溶液中进行测试；
(3)用时间-电流法对地塞米松标准溶液进行检测，设置电压为-0.1 V，运行时间100s，光源波长为405 nm ；
(4)背景电流趋于稳定后，每隔20s开灯持续照射10 s，记录光电流，绘制工作曲线； (5 )将待测的地塞米松样品溶液代替地塞米松标准溶液进行检测。
[0023]实施例8地塞米松的检测
(1)在所制备的光电化学传感器电极表面，滴加6 μ?、0.4 mol/L的硫化钠溶液，放置30?50 min ；
(2 )使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ITO修饰电极为工作电极，在10 mL、pH 7.0的PBS，0.1 mol/L的抗坏血酸缓冲溶液中进行测试；
(3)用时间-电流法对地塞米松标准溶液进行检测，设置电压为0V，运行时间100 s，光源波长为430 nm ；
(4)背景电流趋于稳定后，每隔20s开灯持续照射10 s，记录光电流，绘制工作曲线； (5 )将待测的地塞米松样品溶液代替地塞米松标准溶液进行检测。
[0024]实施例9地塞米松的检测
(1)在所制备的光电化学传感器电极表面，滴加6 μ?、0.7 mol/L的硫化钠溶液，放置50 min ；
(2 )使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ΙΤ0修饰电极为工作电极，在10 mL、pH 8.(^^PBS，0.2 mol/L的抗坏血酸缓冲溶液中进行测试；
(3)用时间-电流法对地塞米松标准溶液进行检测，设置电压为0.1 V，运行时间100s，光源波长为450 nm ；
(4)背景电流趋于稳定后，每隔20s开灯持续照射10 s，记录光电流，绘制工作曲线； (5 )将待测的地塞米松样品溶液代替地塞米松标准溶液进行检测。
【主权项】
1.一种基于原位生成硫化镉检测地塞米松光电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)羧基化氮化碳纳米片的制备 在陶瓷坩祸中加入5 g的三聚氰胺于马弗炉中500~600 °C煅烧3~5 h，冷却至室温，取0.5-2.0 g的氮化碳加入50-200 mL、2.5-10 mol/L的硝酸水溶液中于120-130 °C回流.20-28 h，冷却至室温后，回流产物用超纯水离心洗涤，30~40 °(:真空干燥10~14 h ； (2)硫化祕纳米棒的制备 .1.0-3.0 g的硝酸铋溶解于10~50 mL乙二醇中，通氮气15 min，得溶液A，0.7-2.8 g的硫化钠溶解于5~20 mL乙二醇和10~40 mL超纯水混合液中，均匀搅拌15 min后，得溶液B，所得溶液B在磁力搅拌下逐滴加入溶液A中，得溶液C，再将1.0-3.0 g尿素和5~20 mL超纯水加入混合液C中搅拌15~60 min，混合液转入反应釜中160~200 °C下反应20~28 h，降至室温后，抽真空过滤收集，然后依次用无水乙醇和超纯水各离心洗涤3次，真空60 V干燥； (3)光电化学传感器的制备 .1)将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，氮气吹干； .2)分别取6μ?、2~8 mg/mL羧基化氮化碳溶液和6 μ?、2~8 mg/mL硫化铋溶液依次滴加到IT0导电玻璃的导电面，室温下晾干，马弗炉中300~500 °C煅烧15~60 min，冷却至室温; . 3)在修饰电极表面滴加质量分数为0.01%~0.1%的壳聚糖溶液，依次用0.01 mol/L氢氧化钠溶液和超纯水冲洗电极表面，室温下自然晾干成膜； .4)滴加20PL、质量分数为2.5%~10%的戊二醛，超纯水清洗，室温下自然晾干； .5)滴加6μ?、5~20 Pg/mL的地塞米松半抗原于修饰电极表面，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干； .6)滴加3PL、质量分数为1%~3%的牛血清白蛋白溶液，以此封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干； .7)滴加6μ?、5 pg/mL~50 ng/mL地塞米松抗原和镉离子功能化二氧化钛抗体孵化物的混合溶液，超纯水冲洗电极表面，4 °(:冰箱中自然晾干，制得一种检测地塞米松的光电化学传感器。2.如权利要求1所述的一种基于原位生成硫化镉检测地塞米松光电化学传感器的制备方法，所述镉离子功能化二氧化钛抗体孵化物，其特征在于，制备步骤如下: (1)0.01-0.04 mol钛酸四丁酯溶解于15~60 mL乙醇中，加入5~20 mL水，磁力搅拌.100-140 min ； (2)将混合溶液转移至高压反应釜中，100~300°C温度下反应10~14 h ; (3)所得产物用超纯水和乙醇各离心洗涤3次，80°C下真空干燥11~15 h，制得多孔二氧化钛纳米颗粒； (4)将制得的10~30mg 二氧化钛加入至50 mL、5~20 mmol硝酸镉溶液中，超声2 min,.50 °(:水浴振荡1~4 h，离心水洗； (5)将7~20mg镉离子功能化的二氧化钛纳米颗粒分散在7.5 mL、1-4 mg/mL聚丙稀胺盐酸盐溶液中，搅拌1 h ； (6)加入100~400μ?、质量分数为1%~ 5%的戊二醛，震荡2 h ； (7)将所得溶液离心洗涤，用pH7.0的PBS分散，加入100 μ?,50-200 μ g/mL地塞米松抗体震荡20 h，离心洗去多余抗体，分散在2 mL含质量分数为0.5% -2% BSA的pH 7.0的PBS溶液里，于4 °C冰箱中储存以备用。3.如权利要求1所述的一种基于原位生成硫化镉检测地塞米松光电化学传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下: (1)在所制备的光电化学传感器电极表面，滴加6 μ?、0.1-0.7 mol/L的硫化钠溶液，放置 30-50 min ； (2 )使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的IT0修饰电极为工作电极，在10 mL、pH 6.0-8.0的PBS，0.05-0.2 mol/L的抗坏血酸缓冲溶液中进行测试； (3)用时间-电流法对地塞米松标准溶液进行检测，设置电压为-0.1-0.1 V，运行时间.100 S，光源波长为405~450 nm ； (4)背景电流趋于稳定后，每隔20s开灯持续照射10 s，记录光电流，绘制工作曲线； (5 )将待测的地塞米松样品溶液代替地塞米松标准溶液进行检测。
【专利摘要】本发明涉及一种原位生成硫化镉检测地塞米松的光电化学传感器的制备方法。本发明具体是采用羧基化氮化碳和硫化铋作为基底材料，镉离子功能化的二氧化钛标记地塞米松抗体。通过在电极表面直接滴加硫化钠，原位生成高光电转换效率的窄带隙硫化镉半导体纳米材料，在可见光波长的光源照射下产生光电流信号。载体多孔二氧化钛与硫化镉能带匹配良好，从而提高硫化镉的光电转换效率，实现了对地塞米松的高灵敏检测，其检测限为2pg/mL。
【IPC分类】G01N27/327
【公开号】CN105259236
【申请号】CN201510809271
【发明人】魏琴, 王雪萍, 闫涛, 李燕, 马洪敏, 杜斌
【申请人】济南大学
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月22日
【公告号】CN105259236B