所述磁微粒试剂具有超顺磁性。所述抗 Bevacizumab抗体校准品是由抗Bevacizumab抗体配制而成，用于得到校准曲线，所述抗 Bevacizumab抗体质控品是由抗Bevacizumab抗体配制而成。所述化学发光底物中包括有3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐AMPPD，主要成分 为金刚烷(AMPH))，在碱性磷酸酶的催化下释放光子。
[0027]所述检测试剂盒是基于磁微粒化学发光检测原理来实现ADA免疫含量检测的，其 检测原理如图2所示：将抗药物抗体ADA样本与磁微粒试剂M、生物素化BevacizumabR1混 合，得到样本-M-R1复合物，进行洗涤，再加入AP-抗ADA抗体R2，得到样本-M-R1-R2复合物， 进行洗涤，再加入化学发光底物，测定发光结果。
[0028]实施例三： 试剂盒的性能评估： 1、本发明的贝伐单抗Bevacizumab试剂盒 (1)样本比对 本发明试剂盒对200例临床血清检测Bevac i zumab的含量，并与国外知名公司同类产品 进行临床比对。结果表明，本发明Be vac i zumab试剂盒检测浓度值与国外知名公司同类产品 检测浓度值具有良好的相关性，结果如图3所示。
[0029] (2)灵敏度:本发明Bevacizumab检测试剂盒L0D为2ng/mL，而酶联免疫法的灵敏度 为30ng/mL。
[0030] (3)线性:将一份高值血清按照1/4、1/16、1/64、1/256,用本发明Bevacizumab试剂 盒检测稀释样本，将理论浓度与实际检测浓度做线性回归，结果见图4。
[0031] (4)准确度:通过加样回收评估其准确度。以一份高值血清、一份中值血清、一份低 值血清一共三份血清(样本A)，按照1:9体积比分别添加到两份基础血清中（样本B)，混匀后 形成六份新样本，分别检测并计算其浓度。血清加样回收率在85%-115%之间。
[0032]添加回收实验(加样回收率=添加后样本值八0.1*样本A+0.9样本B)*100%。
[0033] (5)精密度:对三种不同浓度的质控品进行检测，每天两次，分上下午检测，每次进 行4个重复，共检测10天，每种浓度共测定80次，计算变异系数，结果表明变异系数在15%以 内。
[0034] (6)稳定性:将本发明Be vac i zumab试剂盒37°C下放置7天后，测定高、中、低3个浓 度的质控，结果表明3种质控的检测浓度均在质控的浓度范围内。表明Bevacizumab试剂盒 稳定好，符合临床要求。
[0035] (7)特异性:对高、中、低不同浓度值的血清添加不同浓度的胆红素、血红蛋白、类 风湿因子、脂、RF、HAMA检测结果显示，添加物质对本发明Bevacizumab试剂盒检测结果没有 影响。
[0036] 2、本发明的Anti-Bevacizumab抗药抗体检测试剂盒 (1)样本比对 阴、阳性符合率:本发明试剂盒对200例临床血清检测Anti-Bevacizumab的含量，并与 国外知名公司同类产品进行临床比对，比对结果见下表。结果表明，本发明Anti-Bevacizumab试剂盒阴性符合率99%(99/100)，阳性符合率100%(100/100)，说明本试剂盒临 床符合率高。
[0037] (2)灵敏度:本发明Anti-Bevacizumab试剂盒L0D为5ng/mL，而酶联免疫法的灵敏度为 30ng/mL〇
[0038] (3)线性：将一份高值血清按照 1/4、1/16、1/64、1/256，用411衍-86￥&(^211111&13试剂 盒检测稀释样本，将理论浓度与实际检测浓度做线性回归，结果见图5。
[0039] (4 )准确度:通过加样回收评估其准确度。以一份高值血清、一份中值血清、一份低 值血清一共三份血清(样本A)，按照1:9体积比分别添加到两份基础血清中（样本B)，混匀后 形成六份新样本，分别检测并计算其浓度。血清加样回收率在85%-115%之间。
[0040] 添加回收实验(加样回收率=添加后样本值八0.1*样本A+0.9样本B)*100% (5)精密度:对三种不同浓度的质控品进行检测，每天两次，分上下午检测，每次进行4 个重复，共检测10天，每种浓度共测定80次，计算变异系数，结果表明变异系数在15%以内。 [0041 ] (6)稳定性:将本发明六111:;[-136￥3(^2111]^13试剂盒37°〇放置7天后，测定高、中、低3个 浓度的质控，结果表明3种质控的检测浓度均在质控的浓度范围内。表明Anti-Bevacizumab试剂盒稳定好，符合临床要求。
[0042] (7)特异性：对高、中、低不同浓度值的血清添加不同浓度的胆红素、血红蛋白、类 风湿因子、脂、RF、HAMA检测结果显示，添加物质对本发明Anti-Bevacizumab试剂盒检测结 果没有影响。
[0043]本发明的有益效果是： 一、 采用此试剂盒进行检查的总反应时间为50min，相比ELISA法极大的节约了时间； 二、 此试剂盒采用的是碱性磷酸酶系统，相比辣根过氧化物酶系统的灵敏度高10倍； 三、 此试剂盒采用的是全自动磁微粒化学发光法，结果准确，相比免疫荧光不会出现结 果误读现象。
[0044] 四、采用的全自动磁微粒化学发光的反应步骤相比ELISA法的反应步骤要精简，而 且实现了全自动化。
[0045] 以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发 明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领 域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1 . 一种贝伐单抗1^￥3(^2111]^13试剂盒，其特征在于，包括生物素化抗1^￥3(^2111]^13抗体、Bevacizumab校准品、Bevacizumab质控品、AP-抗人IgGl抗体、磁微粒试剂、化学发光底物和 清洗液，所述生物素化抗Bevacizumab抗体为偶联有生物素的抗Bevacizumab抗体，所述AP-抗人IgGl抗体为AP标记的抗人IgGl抗体，所述磁微粒试剂为表面有亲和素的纳米磁微粒悬 浮液。2. 根据权利要求1所述的贝伐单抗Bevacizumab试剂盒，其特征在于，所述生物素化抗 1^￥3(^2111]^13抗体为生物素与抗136￥3(^2111]^13抗体分子表面的-册12基团反应得到。3. 根据权利要求1所述的贝伐单抗Bevacizumab试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂 中磁微粒的直径为〇. 1-0.5μηι，所述磁微粒试剂具有超顺磁性。 4 ·根据权利要求1所述的贝伐单抗Bevacizumab试剂盒，其特征在于，所述Bevacizumab校准品是由含有Bevacizumab的人血清配制而成，用于得到校准曲线，所述Bevacizumab质 控品是由含有Bevacizumab的人血清配制而成。5. 根据权利要求1所述的贝伐单抗Bevacizumab试剂盒，其特征在于，所述化学发光底 物中包括有3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐 AMPPD〇6. 一种Anti-Bevacizumab抗药抗体试剂盒，其特征在于，包括生物素化Bevacizumab、 抗Bevacizumab抗体校准品、抗Bevacizumab抗体质控品、AP-抗ADA抗体、磁微粒试剂和清洗 液，所述生物素化Bevacizumab为偶联有生物素的Bevacizumab，所述AP-抗ADA抗体为AP标 记的抗ADA抗体，所述磁微粒试剂为表面有亲和素的纳米磁微粒悬浮液。7. 根据权利要求6所述的Anti-Bevacizumab抗药抗体试剂盒，其特征在于，所述生物素 化Bevacizumab为生物素与Bevacizumab表面的-NH2基团反应得到。8. 根据权利要求6所述的Anti-Bevacizumab抗药抗体试剂盒，其特征在于，所述磁微粒 试剂中磁微粒的直径为0.1 -0.5μπι，所述磁微粒试剂具有超顺磁性。9. 根据权利要求6所述的Anti-Bevacizumab抗药抗体试剂盒，其特征在于，所述抗 Bevacizumab抗体校准品是由抗Bevacizumab抗体配制而成，用于得到校准曲线，所述抗 Bevacizumab抗体质控品是由抗Bevacizumab抗体配制而成。10. 根据权利要求6所述的Anti-Bevacizumab抗药抗体试剂盒，其特征在于，所述化学 发光底物中包括有3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧环乙烷二 钠盐AMPPD。
【专利摘要】本发明公开了一种贝伐单抗试剂盒及其抗药抗体试剂盒，包括生物素化抗Bevacizumab抗体或Bevacizumab、校准品、质控品、AP-抗人IgG1抗体或AP-抗ADA抗体、磁微粒试剂、化学发光底物和清洗液。通过上述方式，本发明采用全自动磁微粒化学发光检测方法，选取碱性磷酸酶AP-金刚烷AMPPD体系，具有稳定性好，灵敏度高，重复性好等优点，同时大大缩短了检测时间，完成一个测试所需的总时间在50分钟以内，而且操作简易方便，真正实现了检测全自动化。
【IPC分类】G01N21/76
【公开号】CN105424682
【申请号】CN201510788467
【发明人】秦枫, 马竹凤, 王静, 张伟, 柳乐, 徐娟, 李庆春
【申请人】苏州浩欧博生物医药有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月17日