基于液相色谱仪检测莫西克汀中间产物保护物含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及莫西克汀中间产物检测方法的技术领域，特别是涉及一种基于液相色 谱仪检测莫西克汀中间产物之一保护物含量的方法。
【背景技术】
[0002] 众所周知，莫西克汀作为新一代驱虫抗生素，对内寄生虫和外寄生虫有高度驱除 活性，主要用于反刍兽和马的大多数胃肠线虫和费线虫，反刍兽的某些节肢动物寄生虫，以 及犬恶丝虫发育的幼虫;属于大环内酯类抗虫生物制剂，具有高效驱虫活性和长效、安全等 特征；中间产物保护物是莫西克汀的中间产物之一，目的是为更有效地提取得到高含量的 最终产物。莫西克汀结构复杂，官能团较多，经上保护反应得到中间产物保护物的步骤，可 以降低原料的消耗，但保护物含量的检测目前未见报道。
[0003] 目前莫西克汀中间产物保护物含量的检测在中国及EP、USP药典上均未体现。而莫 西克汀中间产物的转化不仅提高了最终产物的含量，也减少了原料的消耗，因而为严格控 制产品质量，莫西克汀中间产物之一保护物含量的检测及其合适有效的检测方法就尤为重 要。
【发明内容】
[0004] 为解决上述技术问题，本发明提供一种能将尼莫克汀及保护物完全分离，准确度 高，重复性好，线性关系数高，精密度< 2.0%，灵敏度高，结果满意的基于液相色谱仪检测 莫西克汀中间产物之一保护物含量的方法。
[0005] 本发明的一种基于液相色谱仪检测莫西克汀中间产物之一保护物含量的方法，包 括以下步骤：
[0006] a、制备供试品储备液:精密量取莫西克汀中间产物之一保护物适量，用95 %乙醇 稀释至效价约为5000ug/mL，制成供试品储备液；
[0007] b、制备供试品溶液:精密量取5mL供试品储备液置50mL容量瓶中，并向容量瓶中 加内标物尼莫克汀25mg，用95%乙醇溶解定容至刻度，盖好瓶塞，用倒转的方式使瓶内的液 体混合均匀，于20-30°(3放置5-1011 ;
[0008] C、制备对照品溶液A:精密称定10mg尼莫克汀置50mL容量瓶中，用95%乙醇溶解定 容至刻度；
[0009] d、制备对照品溶液B:精密称取1 Omg保护物置50mL容量瓶中，用95 %乙醇溶解定容 至刻度；
[0010] e、色谱条件：采用Luna C18 5.0um 4.6*150mm色谱柱，以85%甲醇为流动相，色谱 柱的柱温控制在25-35°C，流速为1.0~1.5mL/min，检测波长为240nm，进样量20yL;
[0011] f、系统适应性试验:打开液相色谱仪，预热5min，将对照品溶液连续进样3针，要求 内标物和中间体保护物分离度满足要求；
[0012] g、测定:分别精密量取供试品溶液、对照品溶液各20yL，注入液相色谱仪，按步骤e 的色谱条件进行测定；
[0013] h、按内标法计算出莫西克汀中间体含量。
[0014] 本发明的一种基于液相色谱仪检测莫西克汀中间产物之一保护物含量的方法，所 述的步骤b中最佳温度为25°C，最佳放置时间为9h。
[0015] 本发明的一种基于液相色谱仪检测莫西克汀中间产物之一保护物含量的方法，所 述的步骤e中色谱柱的最佳柱温为30°C，最佳流速为1. OmL/min。
[0016] 与现有技术相比本发明的有益效果为:通过上述方法的设置，能将尼莫克汀及保 护物完全分离，准确度高，重复性好，线性关系数高，精密度< 2.0%，灵敏度高，结果满意。
【附图说明】
[0017] 图1是保护物浓度与峰面积线性关系曲线。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述。以下实施例用于 说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0019] 本发明的一种基于液相色谱仪检测莫西克汀中间产物之一保护物含量的方法，包 括以下步骤：
[0020] a、制备供试品储备液:精密量取莫西克汀中间产物之一保护物适量，用95 %乙醇 稀释至效价约为5000ug/mL，制成供试品储备液；
[0021 ] b、制备供试品溶液:精密量取5mL供试品储备液置50mL容量瓶中，并向容量瓶中加 内标物尼莫克汀25mg，用95%乙醇溶解定容至刻度，盖好瓶塞，用倒转的方式使瓶内的液体 混合均匀，于20-30°(3(最佳温度为25°〇放置5-1011(最佳放置时间为911) ;
[0022] c、制备对照品溶液A:精密称定10mg尼莫克汀置50mL容量瓶中，用95%乙醇溶解定 容至刻度；
[0023] d、制备对照品溶液B:精密称取10mg保护物置50mL容量瓶中，用95 %乙醇溶解定容 至刻度；
[0024] e、色谱条件:采用Luna C18 5.0um 4.6*150mm色谱柱，以85%甲醇为流动相，色谱 柱的柱温控制在25-35°C (最佳柱温为30°C)，流速为1.0~1.5mL/min(最佳流速为1. OmL/ min)，检测波长为240nm，进样量20yL;
[0025] f、系统适应性试验:打开液相色谱仪，预热5min，将对照品溶液连续进样3针，要求 内标物和中间体保护物分离度满足要求；
[0026] g、测定:分别精密量取供试品溶液、对照品溶液各20yL，注入液相色谱仪，按步骤e 的色谱条件进行测定；
[0027 ] h、按内标法计算出莫西克汀中间体含量。
[0028] 通过上述方法的设置，能将尼莫克汀及保护物完全分离，准确度高，重复性好，线 性关系数高，精密度< 2.0 %，灵敏度高，结果满意。
[0029] 本发明的一种基于液相色谱仪检测莫西克汀中间产物之一保护物含量的方法，步 骤h中内标法的计算公式如下：
[0030] 含量
[0031 ] 式中：f:相对校正因子
[0032] Ax、As :供试品、内标物主峰面积
[0033] Cx、Cs:供试品、内标物浓度(ug/mL)
[0034]本发明的一种基于液相色谱仪检测莫西克汀中间产物之一保护物含量的方法，其 整体试验方法如下：
[0035] 1.仪器与试剂
[0036] 1.1仪器
[0037]
[0040] 2.溶液配制
[0041 ] (1 )、制备供试品储备液:精密量取莫西克汀中间产物之一保护物适量，用95 %乙 醇稀释至效价约为5000ug/mL，制成供试品储备液；
[0042] (2)、制备供试品溶液:精密量取5mL供试品储备液置50mL容量瓶中，并向容量瓶中 加内标物尼莫克汀25mg，用95%乙醇溶解定容至刻度，盖好瓶塞，用倒转的方式使瓶内的液 体混合均匀，于20-30°(3放置5-1011 ;
[0043] (3)、制备对照品溶液A:精密称定10mg尼莫克汀置50mL容量瓶中，用95 %乙醇溶解 定容至刻度；
[0044] (4)、制备对照品溶液B:精密称取10mg保护物置50mL容量瓶中，用95%乙醇溶解定 容至刻度；
[0045] (5)、制备对照品溶液C:精密称定内标物尼莫克汀lOOmg置50mL容量瓶中，用95% 乙醇溶解定容至刻度；
[0046] (6)、制备对照品溶液D:精密称定保护物对照品100mg置50mL容量瓶中，