一种氟唑菌酰胺残留量的gc-ei-ms测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，更具体地说是采用气相 色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)定性定量测定粮谷、猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等动物 肌肉及制品等复杂基质的动植物源性食品中残留的氟唑菌酰胺含量的方法，属于农药残留 量的测定技术领域。
【背景技术】
[0002] 氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)是由巴斯夫公司开发的琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌 剂。化学名称:3_二氟甲基-1-甲基-N-(3'，4'，5'_三氟联苯-2-基)-1Η-吡唑-4-甲酰胺;分 子式:C18H12F5N30;相对分子质量:381.3;熔点：157°C ;相对密度：1.42。溶剂中的溶解度 (g/L，20°C):丙酮>250、乙腈168、乙酸乙酯123、甲醇53.4、甲苯20.0。氟唑菌酰胺的化学结 构式如下：
[0003] 氟唑菌酰胺具有高效、广谱、持效、优异的内吸传导性、同时具有预防和治疗作用 等优点。它能抑制孢子发芽、芽孢管伸长、菌丝体生长和孢子形成，可有效防治谷物、大豆、 玉米、油菜和特种作物等的主要病害。该产品通过叶面和种子处理来防治一系列真菌病害， 如谷物、大豆、果树和蔬菜上由壳针孢菌（Septoria)、灰葡萄孢菌（Botrytis)、白粉菌 (Erysiphe)、尾抱菌（Cercospora)、柄锈菌（Puccinia)、丝核菌（Rhizoctonia)、核腔菌 (Pyrenophora spp ·)等引起的病害。其特别适用于豆类植物，防治由链格孢菌(Alternaria spp.)引起的灰霉病(Botrytis cinerea)、锈病、白粉病和壳针孢菌引起的病害，大豆锈病 (Phakopsora)，棉花上由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的病害以及向日葵和油籽 菜上由链格孢菌引起的病害等。在所有试验剂量下，对所有作物非常安全。氟唑菌酰胺适配 性强，可与吡唑醚菌酯、三唑类杀菌剂和巴斯夫其他产品复配使用。研究表明，氟唑菌酰胺 比市售的酰胺类杀菌剂具有更好的活性，该产品无论在活性、多功能性，还是在内吸性和耐 雨水冲刷性等方面都为现代杀菌剂建立了新标杆。巴斯夫打算将氟唑菌酰胺引入世界上50 多个国家，用于100多种作物上。2011年，氟唑菌酰胺首先在英国登记和上市，现登记和上市 的国家包括澳大利亚、美国、加拿大、欧盟13国、巴西和中国等。公司预测，该产品的年峰值 销售额可达6亿欧元。这是所有SDHI类杀菌剂中，开发公司寄予的期望值最高的产品。
[0004] 随着氟唑菌酰胺的登记、推广和使用，作为我国主要出口市场的美国、加拿大等国 家制定了其在蔬菜、水果、粮谷和畜产品等食品农产品中的最大允许残留量(MRL)，如美国 规定氟唑菌酰胺在果蔬中的MRL为0.5~30mg/kg，在畜产品及水产品等动物源性食品中MRL 为0 . Olmg/kg，在坚果及粮谷中MRL为0.06~15mg/kg;加拿大规定氟唑菌酰胺在果蔬中的 MRL为0.02~2mg/kg，在畜产品及水产品等动物源性食品中MRL为0.01~0.05mg/kg，在坚果 及粮谷中MRL为0.01~3mg/kg;欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记， 没有制定相应的残留限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品 中残留限量均实行〇.〇lmg/L的"一律标准"。
[0005] 现阶段，对氟唑菌酰胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜 和水果中氟唑菌酰胺残留检测方法，这些检测方法均采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测 定蔬菜和水果中氟唑菌酰胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留 具有快速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所未 配置该仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流动 相或色谱柱，这样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，这一 定程度上制约了 LC-MS/MS的应用。配备电子轰击电离源的气相色谱质谱(GC-EI-MS)分析食 品农产品中农药残留具有很大优势，由于电子轰击电离源质谱为通用性检测器，可实现几 百种农药的多残留分析，可同时定性和定量，价格适中，因此现各种检测机构和企业均配备 气相色谱-电子轰击离子源-质谱仪(GC-EI-MS)对食品农产品中的农药残留进行检测，但迄 今为止未见食品农产品中氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS检测方法的报道，氟唑菌酰胺属电 负性化合物，由于粮谷、动物源性食品等食品农产品基质比较复杂，须建立净化效果良好的 样品前处理方法和仪器分析条件才能满足检测要求，因此，建立气相色谱-电子轰击离子 源-质谱(GC-EI-MS)定性和定量分析粮谷和动物源性食品中氟唑菌酰胺残留量的检测方法 具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，主要用于测定 粮谷、动物源性食品等复杂基质食品农产品中氟唑菌酰胺残留量。
[0007] 为实现以上目的，本发明所采用的技术方案是:一种氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，包括如下步骤：
[0008] (1)提取 称取混匀样品于具塞离心管中，加入适量水复苏后，定量加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈 溶液均质或振荡超声提取，然后加入氯化钠或乙酸钠中的一种和无水硫酸镁，剧烈涡旋 lmin后离心。
[0009] (2)净化 移取一定体积样品提取液，浓缩至lmL左右，经C18/PSA固相萃取柱净化，乙腈洗脱，收 集洗脱液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂溶解定容，过膜后，待气相 色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含氟唑菌酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理时，得样品提取净 化残渣，加入适量溶剂和标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的氟唑菌酰胺系列标准 工作液。
[0011] (4)气相色谱-电子轰击离子源-质谱法(GC-EI-MS)测定 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-EI-MS测定，以标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化后的 样品液注入GC-EI-MS进行测定，测得样品液中氟唑菌酰胺的色谱峰面积，代入标准工作曲 线，得到样品液中氟唑菌酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中氟 唑菌酰胺残留量。若上机溶液中氟唑菌酰胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上 机溶液浓度稀释至线性范围之内。
[0012] 步骤（1)中样品若为粮谷及动物肝脏等含水量较少的样品，提取前须加适量水充 分浸润。
[0013] 步骤（1)中采用乙腈提取时加入氯化钠盐析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取时加 入乙酸钠盐析。
[0014] 步骤(2)中进行C18/PSA固相萃取净化，乙腈洗脱时，洗脱体积为6~8mL。
[0015] 步骤(4)中气相色谱条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm， 膜厚0.25μπι;进样口温度250°C ;载气：He，不分流模式进样，进样量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升温程序:初温60°C保持2min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每分钟2 °C的速度升至220°C，再以每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin;传输线温度:280°C。
[0016] 步骤(4)中质谱条件为:离子源温度150°C;四极杆温度150°C;电离模式：电子轰击 电离，即EI模式，能量70eV;扫描方式：选择离子监测（SIM)模式，监测的离子为：159.0、 160.0、381.1、382.1。
[0017] 步骤(4)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在这种农药;若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0018] 本发明的有益效果在于：
[0019] 本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法，将此前处理方法结合GC-EI-MS应用于粮谷、动物源性食品中氟唑菌酰 胺定性确证和定量检测，平均回收率为84.6%~103.1 %，平均相对标准偏差(RSD)为3.2% ~8.4%，检出限低于l.OUig/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。 能满足美国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全 及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【附图说明】
[0020] 图1为添加在空白猪肉基质中的氟唑菌酰胺的GC-EI-MS选择离子色谱图。
[0021] 图2为不含氟唑菌酰胺的猪肉空白样品的GC-EI-MS选择离子色谱图。
[0022] 图3为以不含氟唑菌酰胺的猪肉空白样品为基质配制的氟唑菌酰胺标准工作曲 线。
【具体实施方式】
[0023]现以以下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。
[0024] 实施例中使用的仪器与试剂
[0025] T18Basic均质器（IKA，Germany) ;CR21GHI离心机（日立，Japan) ;MS3基本型旋祸混 合器（IKA，Germany);TurboVap LV型样品自动浓缩仪（Caliper，USA) ;7890N气相色谱-5977C质谱仪(Agilent，USA);C18/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)购于天津博纳艾杰尔 科技有限公司。
[0026] 试剂
[0027] 乙腈、丙酮、正己烧（HPLC级，Merke，Germany);乙酸（HPLC级，CNW，Germany);无水 硫酸镁、氯化钠和乙酸钠为分析纯，均购自国药集团化学试剂有限公司。
[0028] 标准物质：纯度99.5%，购自德国Dr.Ehrenstorfer公司。
[0029] 实施例1:小麦中氟唑菌酰胺残留量的检测
[0030] (1)样品前处理
[0031] 提取 称取经充分混勾的5g小麦样品（研磨成面粉)于50mL离心管中，加入20mL水复苏30min 后，准确加入20mL含1 %乙酸的乙腈溶液，振荡提取20min，超声提取5min，加入3g无水硫酸 镁和2g乙酸钠，祸旋lmin后，7000r/min离心5min。离心后，取8mL乙腈提取液于40°C旋蒸或 氮气吹至近干，加入lmL乙腈涡旋后，待净化。
[0032] 净化 用5mL乙腈预洗C18/PSA固相萃取柱，当液面到达吸附剂的顶部时，将上述提取溶液转 入柱中，用2mL乙腈洗涤试管，并将洗涤液移入SPE柱中，待溶液达到吸附剂顶部时，加入4mL 乙腈至柱子上进行洗脱，洗脱液全部接收到定量