试管中，氮气吹干后用体积比为1/1的丙 酮/正己烷混合溶剂定容至lmL，过0.22μπι滤膜后，待GC-EI-MS测定。
[0033] (2)标准工作溶液的配制 准确称取25±0. lmg标准品于25mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容得1000.Oyg/mL标准储 备液;移取l.OmL标准储备液置于100mL容量瓶中，用用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶 剂定容得到10.〇yg/mL标准中间液;将10yg/mL标准溶液稀释配成5、2、1、0.5、0.2、0. lyg/mL 标准溶液。将不含氟唑菌酰胺的小麦空白样品按上述前处理步骤处理，得样品提取净化残 渣，在此残渣中加入900yL体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂和100yL上述标准溶液，涡 旋混匀，配成10、20、50、100、200、500yg/L基质标准工作溶液。
[0034] (3)气相色谱-电子轰击离子源-质谱法(GC- EI-MS)测定 将不同浓度梯度的标准工作液分别注入GC-EI-MS，以外标法进行氟唑菌酰胺含量的定 量分析，即以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线;在 相同条件下将样品提取液注入GC-EI-MS进行测定，测得样品液中氟唑菌酰胺的色谱峰面 积，代入标准工作曲线，得到样品液中氟唑菌酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量 计算得到样品中氟唑菌酰胺残留量。
[0035]其中色谱条件为：
[0036] 色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μπι。
[0037] 进样口温度:250.0°C，进样模式:不分流进样，进样量:lyL。
[0038] 载气:He，恒流模式，流速1. OmL/min。
[0039] 炉箱升温程序:初温60°C保持2min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每分 钟2°C的速度升至220°C，再以每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin。
[0040] 传输线温度:280°C。
[0041] 其中，质谱参数为：
[0042]电离模式：电子轰击电离，即EI模式，能量70eV。
[0043] 离子源温度：150°C;四极杆温度150°C。
[0044] 扫描方式：选择离子监测（SIM)模式；SIM监测的离子为：159.0、160.0、381.1、 382.1;定量离子为381.1。
[0045] 定性鉴定:在相同的条件下，如果样液中农药色谱峰保留时间与标准溶液中相应 农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且离子 丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在这种农药;若上述两个条件 不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0046] 以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线如表 1〇
[0047] 加标回收率和重复性：
[0048] 在不含氟唑菌酰胺的小麦中加入10、20和200yg/kg3个浓度水平的氟唑菌酰胺标 准溶液，待农药添加30min后按上述处理步骤进行残留量测定。将测定浓度与农药理论添加 浓度进行比较，得到农药添加回收率，每个添加水平平行测定6次，得其相对标准偏差，测定 结果见表2。由表2可以看出，在3个加标水平上，氟唑菌酰胺的平均回收率为93.8%~ 103.1 %，平均相对标准偏差(RSD)为3.2%~6.9 %，说明本发明方法的回收率较高，重复性 好。
[00491 券9儀'II坐苗?除:的同ιΜτ衮知甫有桦 [UU&UJ 粒出限：
[0051 ] 将不同浓度的氟唑菌酰胺基质标准工作溶液注入GC-EI-MS，以最低浓度基质标准 溶液色谱峰的3倍信噪比和样品处理过程的浓缩倍数(小麦的浓缩倍数为2.0倍)计算检出 限，氟唑菌酰胺的检出限为〇.66yg/kg。
[0052]实施例2:猪肉中氟唑菌酰胺残留量的检测 [0053] (1)样品前处理
[0054] 提取 称取经充分混勾的5g猪肉样品于50mL离心管中，加入5mL水混勾，放置30min，准确加入 20mL乙腈，均质提取2min，加入3g无水硫酸镁和2g氯化钠，祸旋lmin后，7000r/min离心 5min。离心后，取8mL乙腈提取液于40°C旋蒸或氮气吹至约lmL，待净化。
[0055] 净化 用5mL乙腈预洗C18/PSA固相萃取柱，当液面到达吸附剂的顶部时，将上述提取溶液转 入柱中，用2mL乙腈洗涤试管，并将洗涤液移入SPE柱中，待溶液达到吸附剂顶部时，加入4mL 乙腈至柱子上进行洗脱，洗脱液全部接收到定量试管中，氮气吹干后用体积比为1/1的丙 酮/正己烷混合溶剂定容至lmL，过0.22μπι滤膜后，待GC-EI-MS测定。
[0056] (2)标准工作溶液的配制 将lOOOyg/mL标准溶液用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂稀释成lOyg/mL标准中 间液，将l〇yg/mL标准溶液稀释配成5、2、1、0.5、0.2、0. lyg/mL标准溶液。将不含氟唑菌酰胺 的猪肉空白样品按上述前处理步骤处理，得样品提取净化残渣，在此残渣中加入900yL体积 比为1 /1的丙酮/正己烷混合溶剂和1 OOyL上述标准溶液，涡旋混匀，配成10、20、50、100、 200、500yg/L基质标准工作溶液。
[0057] (3)气相色谱-电子轰击离子源-质谱法(GC-EI-MS)测定 操作步骤、色谱和质谱条件与上述小麦样品中氟唑菌酰胺的测定一致。
[0058] 定性鉴定:同上述小麦样品中氟挫菌酰胺的测定一致。
[0059]线性关系： 以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线为 Y = 2456 · 6X-1546 · 5，相关系数为 0 · 9999。
[0060] 加标回收率和重复性：
[00611 在不含氟唑菌酰胺的猪肉中加入10、20和200yg/kg 3个浓度水平的氟唑菌酰胺标 准溶液，待农药添加30min后按上述处理步骤进行残留量测定，将测定浓度与农药理论添加 浓度进行比较，得到农药添加回收率，每个添加水平平行测定6次，得其相对标准偏差，测定 结果见表3。由表3可以看出，在3个加标水平上，氟唑菌酰胺的平均回收率为84.6%~ 95.6 %，平均相对标准偏差(RSD)为4.2 %~8.4 %，说明本发明方法的回收率高，重复性好。
[0062] 弄3氟唑苗酰胺的冋收銮和重复件
=
[0063] 检出限：
[0064] 将不同浓度的氟唑菌酰胺基质标准工作溶液注入GC-EI-MS，以最低浓度基质标准 溶液色谱峰的3倍信噪比和样品处理过程的浓缩倍数(猪肉的浓缩倍数为2.0倍)计算检出 限，氟唑菌酰胺的检出限为l.Olyg/kg。
[0065] 以上的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行 限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术对本发明的技术方案作出 的各种变型和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
【主权项】
1. 一种氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1) 提取 称取混匀样品于具塞离心管中，加适量水后，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均质或 振荡超声提取后，加入氯化钠或乙酸钠中的一种和无水硫酸镁，剧烈涡旋lmin后离心； (2) 净化 移取一定体积样品提取液，浓缩至lmL左右，经C18/PSA固相萃取柱净化，乙腈洗脱，收集 洗脱液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂溶解定容，过膜后，待气相色 谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)检测； (3) 标准工作溶液的配制 将不含氟唑菌酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化 残渣，加入适量溶剂和标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的氟唑菌酰胺系列标准工 作液； (4) 测定和结果计算 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-EI-MS测定，以标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化 后的样品液注入GC-EI-MS进行测定，测得样品液中氟唑菌酰胺的色谱峰面积，代入基质标 准工作曲线，得到样品液中氟唑菌酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到 样品中氟唑菌酰胺残留量;若上机溶液中氟唑菌酰胺残留量超过线性范围上限，需用定容 溶剂将上机溶液浓度稀释至线性范围之内。2. 根据权利要求1所述的一种氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于，步 骤(1)中样品若为含水量较少的样品，提取前须加适量水充分浸润。3. 根据权利要求1所述的一种氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于，步 骤（1)中采用乙腈提取时需加入氯化钠盐析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取时需加入乙酸 钠盐析。4. 根据权利要求1所述的一种氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于，步 骤⑵中进行(WPSA固相萃取净化，乙腈洗脱时，洗脱体积为6~8mL。5. 根据权利要求1所述的一种氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于，步 骤(4)中GC-EI-MS分析条件为:色谱柱:HP-5 MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm，膜厚 0. 25μπι;进样口温度250.0°C ;载气：He，不分流模式进样，进样量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升温程序:初温60°C保持2min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每分钟2 °C的速度升至220°C，再以每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin;传输线温度:280°C;电 离模式：电子轰击电离，即EI模式，能量70eV;离子源温度150°C ;扫描方式:选择离子监测 (SHO 模式，监测的离子为：159·0、160·0、381·1、382·1。
【专利摘要】本发明公开了一种氟唑菌酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，该方法主要用于测定粮谷、动物源性食品等复杂基质食品农产品中残留的氟唑菌酰胺含量的方法。用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均质提取样品中残留的氟唑菌酰胺，C18/PSA固相萃取柱净化浓缩后，气相色谱-电子轰击离子源-质谱（GC-EI-MS）检测，采用不含待测农药的空白基质溶液建立校正的标准工作曲线，外标法定量。本方法平均回收率为84.6%～103.1%，平均相对标准偏差（RSD）为3.2%～8.4%，检出限低于1.01？μg/kg，具有操作简便、快速、去杂效果好、灵敏度高、特征性强、重复性好、定性定量准确的优点。能满足美国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105548447
【申请号】CN201610070271
【发明人】崔淑华, 李瑞娟, 于建垒
【申请人】崔淑华
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月30日