特定凝集素组合在制备用以鉴别肺癌类型及分期的测试载体方面的用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种基于血清糖蛋白糖型利用凝集素鉴别肺癌类型及病期的方案，具 体设及特定凝集素组合在制备用W鉴别肺癌类型及分期的测试载体方面的用途。
【背景技术】
[0002] 原发性支气管肺癌，简称肺癌，是起源于支气管粘膜或腺体的恶性肿瘤。目前在全 世界范围内因恶性肿瘤引起的死亡中，肺癌最为常见。而且，它的发生率正在W约5%的速 度逐年增加，预计到2020年，因肺癌而死亡的人数将达到恶性肿瘤引起的总死亡人数的 50%。
[0003] 肺癌已经成为全世界各个国家亟待解决的重大健康问题和社会问题，在发展中国 家尤甚。在2010年进行的全国性抽样调查显示，肺癌的死亡率已升高为30.83/10万，其中， 男性为41.34/10万，女性为19.84/10万，肺癌死亡人数占肿瘤相关的总死亡人数已达到 22.70%，居第1位，值得指出的是，在我国城市人口中，肺癌的死亡率为40.98/10万，居首 位，且明显高于农村地区（26.93/10万）。
[0004] 根据肺癌的分化程度、形态特征和生物学特点，目前将大多数肺癌分成两大类:非 小细胞肺癌（Non-Small-Cell Lung Cancer,NS化C)和小细胞肺癌（Small-Cell Lung Cancer，SCLC)。前者主要包括腺癌和鱗状细胞癌（简称鱗癌）。其中，腺癌发病率最高，约占 肺癌的50 % ;鱗癌，曾经最为常见的肺癌类型，现约占肺癌的1/3。而小细胞肺癌仅占肺癌 的 15%。
[0005] 虽然，近年来肺癌的治疗方面已取得了长足的进步，但从总体上来说，肺癌的预后 情况仍旧很不理想，非小细胞肺癌和小细胞肺癌的5年生存率仅分别为14%和4%。引起运 一情况的主要原因是由于肺癌起病隐匿，早期通常无明显症状，大多数肺癌患者在确诊时 已处于进展期，失去了手术治愈的机会。因此，肺癌的早期筛查和诊断对于提高肺癌患者的 生存率、延长患者的生存期，都是至关重要的。
[0006] 糖基化是最普遍的蛋白质翻译后修饰之一，研究发现约一半W上的哺乳动物蛋白 质都发生了糖基化。糖基化作为一种重要的翻译后修饰，可W影响蛋白质的溶解度、折叠、 定位及构象的维持，调节蛋白质的功能和降解;还可W介导分子与分子之间、分子与细胞之 间、细胞与细胞之间的相互作用。大量研究表明，蛋白质糖基化，作为重要的翻译后修饰，在 肿瘤发生、浸润、转移的过程中会发生改变并有相应的功能性作用。糖基化修饰的改变主要 包括两个方面：1)多肤链上糖基化结合位点的改变;2)寡糖链结构的改变。因此，差异性表 达的蛋白质糖基化亚型可W成为新型肿瘤标记物，用于肿瘤的早期诊断，还可W成为肿瘤 生物祀向治疗的新祀点。
[0007] 70% W上的血清蛋白质是糖基化修饰的。研究发现，在肿瘤细胞中，糖基化的加 工、合成机制发生了改变，运些改变导致了异常糖基化蛋白质的产生和释放。虽然，目前糖 基化改变对肿瘤的发展关系还没有一个完整的了解，但运些改变对早期诊断或作为预后的 指示总是有利无弊的。现在，已经有一些研究者通过检测运些外周血中的异常糖蛋白亚型， W期寻找到更理想的肿瘤标志物。
[000引生物忍片现已成为快速、高效、高通量取得相关信息的重要手段。随着糖生物学及 糖组学研究的进展，糖忍片正发展成为糖生物学及糖组学新兴的检测工具。凝集素忍片检 测样品用量少、高通量、灵敏度极高，并且可W与多种检测手段整合使用，可W快速、准确检 测出待测样本中糖蛋白糖链的差异，因而可大大提生物忍片结果检测、分析的速度和效率， 是一种新型的快速、高效的鉴别病症的手段。
[0009] 凝集素忍片是通过固定于忍片上的凝集素探针与样品中糖蛋白糖链特异性结合， 可W高通量地检测出样品中糖蛋白糖链结构和连接方式的变化，是研究糖蛋白糖链结构变 化最有效的分析工具之一，其有助于发展新的诊断和监测疾病的方法。
【发明内容】
[0010] 本发明通过大量的实验和分析，最终确立了针对血清样本的特定凝集素组合能够 快速鉴别血清中糖蛋白糖链的变化，为快速、有效鉴别肺癌种类(小细胞肺癌、肺腺癌、肺鱗 癌）W及分期提供新的检测方案，从而明确了特定凝集素组合在制备用W鉴别肺癌类型及 分期的测试载体方面的用途。
[0011] 本发明的技术解决方案是：
[001^ 针对血清样本，凝集素 GSk巧日SNA的组合在制备用W鉴别小细胞肺癌的测试载体 方面的用途。
[0013] 其中，测试载体上还可W设置凝集素 SBA和PNA作为内参。
[0014] 另外，针对血清样本，本发明还提出特定凝集素组合在制备用W鉴别小细胞肺癌 分期的测试载体方面的用途，所述特定凝集素组合是W下四种组合之一：
[001引（1)凝集素 WFA和STL的组合；
[0016] (2)凝集素 HHL、LCA、NPA和肥A-I的组合；
[0017] (3)凝集素 LTL、LEL和DBA的组合；
[0018] (4)单独一种凝集素 PHA-E;
[0019] 或者是再对W上（1)至(4)的任意组合。
[0020] 针对血清样本，凝集素皿1^、胖。4、胖64、?￥1、1^巧咖4心1中任意两种^上的组合在制 备用W鉴别肺腺癌的测试载体方面的用途。
[0021 ]其中，测试载体上还可W设置凝集素 SBA和PNA作为内参。
[0022] 另外，针对血清样本，本发明还提出特定凝集素组合在制备用W鉴别肺腺癌分期 的测试载体方面的用途，所述特定凝集素组合是W下四种组合之一：
[0023] (1)凝集素 Ρ?1-Ι、ConA 和 Ρ?1-ΙΙ的组合；
[0024] (2)凝集素 ConA和Ρ?1-ΙΙ的组合；
[002引（3)凝集素14心1巧脂臟的组合；
[0026] (4)凝集素 SNA、WFA和STL的组合；
[0027] 或者是再对W上（1)至(4)的任意组合。
[002引针对血清样本，凝集素14心1、口化-11、8化和嫩心11中任意两种^上的组合在特定 凝集素组合在制备用W鉴别肺鱗癌的测试载体方面的用途。
[0029] 其中，测试载体上还可W设置凝集素 SBA和PM作为内参。
[0030] 另外，针对血清样本，本发明还提出特定凝集素组合在制备用W鉴别肺鱗癌分期 的测试载体方面的用途，所述特定凝集素组合是W下四种组合之一：
[0031] (1)单独一种凝集素 BPL
[0032] (2)凝集素 RCA120、STL 和 BPL 的组合；
[0033] (3)凝集素 SJA和PSA的组合；
[0034] (4)凝集素 SJA和NPA的组合；
[0035] 或者是再对W上（1)至(4)的任意组合。
[0036] 上述测试载体可W是凝集素忍片、酶标板、磁粒、琼脂糖等。
[0037] W凝集素忍片的固定为例：
[0038] 凝集素忍片是将各种不同来源的凝集素固定于醒基化、环氧化或经其他方式修饰 后的玻璃片基上，再与标记后的糖蛋白、菌体、细胞等待检测样品反应，W检测待检测样品 的糖链结构。
[0039] W环氧化磁粒为例：
[0040] 合成Fe3〇4磁性微粒，然后用硅烷化试剂修饰磁性微粒制备得到环氧化磁性微粒。 合成的环氧化磁性微粒被应用于凝集素等蛋白的固定化。
[0041] 基于W上方案，还可上述特定凝集素组合为单元再进行组合，制备包含凝集 素种类更多的测试载体。例如，在一个凝集素忍片上固定W上所提到的所有凝集素，则能够 一次确定肺癌类型及其分期。运类方案自然也是属于本申请的保护范围的。
[0042] 本发明具有W下技术效