一种灵敏度高的胶乳增强免疫比浊法肌钙蛋白i检测试剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种灵敏度高的胶乳增强免疫比浊法肌巧蛋白I检测试剂，属于临床 体外检测技术领域。
【背景技术】
[0002] 肌巧蛋白，由ΤΧ、ΙΞ亚基构成，和原肌球蛋白一起通过调节巧离子对横纹肌动 蛋白ΑΤΡ酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用。当屯、肌损伤后，屯、肌肌巧蛋白复合 物释放到血液中，4-6小时后，开始在血液中升高，升高的肌巧蛋白I能在血液中保持很长时 间6-10天。肌巧蛋白I具有高度屯、肌特异性和灵敏度，所W肌巧蛋白Τ已成为目前最理想的 屯、肌梗死标志物。
[0003] 患有各种冠状动脉疾患的病人必然会发生屯、肌细胞损伤.有些病人的临床表现可 能不完全符合Wffi)关于AMI诊断标准(不稳定屯、绞痛就是其中之一），但却伴有某些屯、肌损伤 标志物（如cTnT等)升高，从而导致细胞内的组成成分渗漏入外周血循环.运使得屯、肌细胞 损伤标志物的检测成为可能.C化T和cTnl在AMI后（3~加)血中浓度很快升高，和CK-MB(3~ 她)相当或稍早，它们测定的特异性和灵敏度明显高于CK-MB.C化具有相当长的诊断窗口期 (C化口~9天，C化T更长）.cTn对急性胸痛病人(无论有无骨骼肌损伤）的诊断均优于CK-MB. 研究表明：在对AMI的诊断方面cTnl和cTnT无显著差异，都能鉴别出CK-MB所不能检测出的 屯、肌损伤. 屯、肌肌巧蛋白I测定开始于20世纪80年代中期，最早使用的是多克隆抗体检测的放射 免疫比浊法，随后相继出现了运用单克隆抗体检测的各种不同的免疫法。目前检测的方法 有肌巧蛋白I的测定主要有免疫学方法，检测方法则包括胶乳增强免疫比浊法，夹屯、免疫放 射法、夹屯、酶联免疫法，化学发光W及电化学发光等相关方法，其中普通夹屯、免疫放射法、 夹屯、酶联免疫法两种方法成本相对较低，操作相对较简单，但是若试验中所用的抗体为多 克隆抗体，会交叉反应，且分析灵敏度较低。而化学发光和电化学发光运两种方法，准确度 较好且反应的分析灵敏度高，能够快速准确的检测出结果，但是运两种方法需要特定的化 学发光仪器，并且对实验室操作人员的要求相对较高，因此在临床中无法真正的普及使用， 只有一些相对较大的实验室才具备相应的条件，而后期逐渐研发和使用的胶乳增强免疫比 浊法操作简单，成本较低，能够较好的结合全自动生化分析仪器进行操作，方便快捷，但是 本方法目前同样具有分析灵敏度低的缺陷，在临床使用过程中针对于低浓度的临床样本， 容易出现零值，甚至出现负值，运给临床使用者带来很大不方便，因此根据本问题，作者在 胶乳增强免疫比浊法检测血清肌巧蛋白I的基础之上进行优化，发明一种分析灵敏度高的 胶乳增强免疫比浊法检测血清肌巧蛋白I。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种用于检测血清肌巧蛋白I的试剂。
[000引检测原理： 首先将特异性抗体结合于胶乳颗粒表面，样本与胶乳颗粒在缓冲液中混合，样本中的 ΤηΙ与胶乳颗粒表面的抗体结合，使相邻的胶乳颗粒彼此交联，在505nm波长下检测溶液浊 度变化，变化程度与样本中的化I含量成正比： 一种准确度高的肌巧蛋白I检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组 成如下： 试剂R1中含有 缓冲液.............................................lOOmmol/L， 氯化锋.............................................0. lmmol/L-0.5mmol/L, Thesit.............................................lml/l-3ml/L EMULGEN-A90........................................1ml/1-5 ml/L， 氨基 Ξ 乙酸(NTA)....................................O.lg/L-lg/L， 防腐剂.............................................ml/l; 2)试剂R2的组分为： 缓冲液.............................................lOOmmol/L， 曲拉通-308.........................................ml/L， 牛血清白蛋白（BSA)..................................lg/L-5 g/L， 防腐剂.............................................ml/l; Tn I抗体包被胶乳颗粒................................适量 所述的肌巧蛋白I检测试剂，试剂R1中缓冲液为25°C，PH=7.6的咪挫缓冲液； 所述的肌巧蛋白I检测试剂，试剂R2中缓冲液为25°C，pH=7.6的咪挫缓冲液。
[0006] 所述的肌巧蛋白I检测试剂，所述防腐剂为PC-300。
[0007] 所述的肌巧蛋白I检测试剂，所述化I抗体包被胶乳颗粒为羊抗人单抗体化I抗体， 抗体所包被的胶乳微球颗粒为50-55nm。
[0008] 所述的肌巧蛋白I检测试剂来检测肌巧蛋白I的检测方法，使用全自动生化分析仪 利用终点法进行测定，检测主波长为505nm。
[0009] 所述的检测方法，R1试剂和R2试剂的比例为3:1。
[0010] 本发明的创新处： 1) 在试剂R1和R2中分别使用了咪挫缓冲液，咪挫缓冲液在反应中能够有较大的缓冲能 力，对在保证缓冲能力的同时，且不会对反应体系产生负面影响； 2) 在试剂的R1中加入化esit和EMULGEN-A90两种表面活性剂，运两种表面活性剂的联 合使用能有较好的提高试剂的乳化作用，能够较好的提高单抗体和肌巧蛋白I的结合，且能 保证在反应过程中均衡稳定，保证反应曲线在仪器上的平滑； 3) 在试剂R1中加入了氨基Ξ乙酸(NTA)，能够有效的馨合重金属离子，去除重金属离子 对反应的干扰； 4) 在R2中所选取的胶乳微球的颗粒粒径为直径相对较小的50-55nm胶乳颗粒，能够较 好的增加反映的灵敏度； 5) 在试剂R2中加入了曲拉通-308和牛血清白蛋白两种物质，能够有效的保护单抗体的 活性和效价，且曲拉通-308能特异性的增加抗体和抗原的结合。
【附图说明】
[001。 图巧实施例巧P化学发光相关性曲线图，
[0012 ]图2为实施例巧日化学发光相关性曲线图。 图3为实施例1和化学发光相关性曲线图。
【具体实施方式】
[0013]下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明： 实施例1 一种现有常见的肌巧蛋白I检测试剂，包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1和试剂R2的组 成如下： 试剂UR1): 甘氨酸缓冲液...................................................PH 7.6 氯化钢........................................................150mmol/L 曲拉通-100 .................................................. Iml/L 试剂2(R2): 甘氨酸缓冲液..................................................PH 7.6 Τη I抗体包被胶乳颗粒...........................................适量 实施例2 一种准确度高的肌巧蛋白I检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组 成如下： 试剂R1中含有 试剂R1中含有 缓冲液.................................................lOOmmol/L， 氯化锋.................................................0.1 mmol/L, Thesit.................................................Iml/L， EMULGEN-A90............................................1ml/L， 氨基 Ξ 乙酸(NTA)........................................O.lg/L， 防腐剂.................................................0.5ml/l; 2)试剂R2的组分为： 缓冲液.................................................lOOmmol/L， 曲拉通-308.............................................Iml/L， 牛血清白蛋白（BSA)......................................Ig/L， 防腐剂.................................................0.5ml/l; Τη I抗体包被胶乳颗粒...........