一种载脂蛋白a1免疫比浊法检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及临床体外检测试剂技术领域，特别设及一种载脂蛋白Al免疫比浊法检 测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 脂蛋白中的蛋白部分称为载脂蛋白（Apo)。载脂蛋白在脂蛋白代谢中具有重要的 生理功能。Apo是用ABC命名法，目前已经发现很多种类，一般分为5~7类，主要测定其 ApoAI ,ApoB两种。ApoAI主要由肝脏合成，小肠也可合成，它是高密度脂蛋白胆固醇(皿レ C册L)的主要结构蛋白，占皿kOTOL总蛋白的60%~70%，ApoAI的测定可直接反映皿kOTOL 的水平。ApoB也由肝脏合成，是低密度脂蛋白胆固醇化化-C册L)的主要结构蛋白，约占 LDk C册L总蛋白含量的97%，ApoB的测定可直接反映 LDkOlOL的水平。
[0003] 动脉粥样硬化主要损伤动脉内壁膜，严重累及中膜是脉管壁胆固醇醋大量堆积成 粥样硬化斑块，使血管壁纤维增厚和狭窄的一种病理改变。主要侵犯大动脉和中等动脉，如 主动脉、冠状动脉和脑动脉，导致某些脏器的局部供血不足，常出现屯、脑血管疾患，甚至有 致命性损害。近年来，屯、血管疾病患者每年递增，每天全世界大约有5000人死于屯、脏疾患， 其中不少人是由遗传因素决定的。目前，ApoAI和ApoB的测定做为冠屯、病危险指标的研究和 流行病学研究逐渐增加，各医院检验科亦相继开展此项测定。ApoAI ,ApoB分别被认为是动 脉粥样硬化的保护因素和危险因素。测定其含量和比值对动脉粥样硬化，屯、血管疾病的判 断和预测提供有价值的指标，具有重要的诊断和预防意义。
[0004] 人血清或血浆中尿素参考范围为女性：1.20~1.90g/L，男性：1.20~1.76g/L。除 冠屯、病患者ApoAl偏低外，脑血管患者ApoAl也明显低下，ApoAl缺乏症、家簇性低a脂蛋白血 症、鱼眼病等血清中ApoAl和皿L-C极低。家簇性高TG血症患者皿L-C往往偏低，但ApoAl 不一定低，不增加冠屯、病的危险。
[0005] 人血清或血浆中载脂蛋白Al与其相对应的羊抗人ApoAl多克隆抗体在液体中结 合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，浊度高低反映样品中载脂蛋白Al的含量。 后者可由校准品所作的剂量/反应曲线算出。该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要 求不高，而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可W实现自动 化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的载脂蛋白Al免疫比浊法检测试 剂稳定性不好，灵敏度也不高，因而限制了其在临床上的推广应用。
【发明内容】
[0006] 针对于现有技术存在的问题，本发明提供了一种载脂蛋白Al免疫比浊法检测试剂 盒，该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性比常规的检测试剂盒要好，分析灵敏度高，有利 于试剂在临床上的推广应用。
[0007] 本发明是通过W下措施实现的： 一种载脂蛋白Al免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、试剂R2和校准 品，其中试剂Rl组成为：lOOmmol/L pH7.5 his缓冲液、0.1%叠氮钢(w/v)、0.1%-2%二氧化 娃包覆的磁性纳米颗粒(w/v);试剂R2组成为：lOOmmol/L pH7.5化is缓冲液、30ml/L羊抗人 ApoAl抗体、20-40g/L 牛血清白蛋白、0.05% Kathon-CG(v/v)。
[000引所述二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒为化地4/Si02复合纳米粒子，粒径为20-50nm。
[0009] 所述试剂Rl和试剂R2在使用时的体积比例为Rl :R2=3:1。
[0010] 本发明所使用的二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒是采用W下方法制备的： 采用多元醇法制备Fe3〇4纳米粒子，取一定的乙酷丙酬铁和S甘醇加入到回流加热反 应装置中，在磁力揽拌和Ar气保护的条件下，将装置缓慢加热至沸腾，并保持回流一段时 间。冷却后向反应溶液中加入乙酸乙醋使生成的四氧化=铁纳米粒子产生絮凝，磁性分离 黑色产物，清洗数次，分散到乙醇中，即得到稳定的Fe3〇4纳米粒子乙醇胶体溶液。之后将所 得Fe3〇4纳米粒子采用Stober水解法制得Si化包覆的Fes化纳米粒子。所得Fe3〇4/Si化复合纳 米粒子的粒径为20-50nm。
[0011 ]本发明所使用的校准品为久峰润达生物技术郁良公司生产的APOA很准品。
[0012] 本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方法见 图4,加入生理盐水、样本或校准品化1，之后再加入Rl试剂45化1预解育5min后读取吸光度 Al，之后再加入15化1的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2，并计算A A。
[0013] 本发明的有益效果： 本发明提供的载脂蛋白Al免疫比浊法检测试剂盒，通过在试剂Rl中加入二氧化娃包覆 的磁性纳米颗粒，该磁性纳米颗粒在静电吸附的作用下与羊抗人APOAl抗体结合，从而使抗 体在磁性纳米颗粒上形成凝集，大大的提高了试剂的分析灵敏度。同时在试剂R2中加入牛 血清白蛋白，解决了抗体在稀溶液中不稳定运一难题，在试验中它能使抗体稳定，且相对地 中性，但不会影响抗体的性质，而Kathon-CG是一种新型高效环保型广谱杀菌剂、防腐剂，在 该试剂盒中使用Kathon-CG有效解决了BSA长时间保存易发霉的缺点，因此BSA与Ka^on-CG 共同作用有效地增强了试剂盒的稳定性，却不会对试剂的准确度产生影响，有利于该试剂 在市场中进一步的推广。
【附图说明】
[0014] 图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性。
[0015] 图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性。
[0016] 图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性。 图4试剂盒的使用方法。
【具体实施方式】
[0017] 为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
[001引实施例1 一种常规的载脂蛋白Al免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂RU试剂R2、校准品。
[0019] 其中试剂Rl组成为： pH 7.5 Tris缓冲液 100 mmol/L 叠氮钢 0.1%(w/v) 聚乙二醇6000 0.5%(v/v) 试剂R2组成为： pH7.5 Tris缓冲液 100 mmol/L 羊抗人APOAl抗体 30ml/L 本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自动 分析仪，操作如下： 加入生理盐水、样本或校准品钮1，之后再加入Rl试剂45化1预解育5min后读取吸光度 Al，之后再加入15化1的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2，并