计算A A。
[0020] 本实施例所使用的校准品为久峰润达生物技术有限公司生产的APOAl校准品。
[0021] 实施例2 一种载脂蛋白Al免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂RU试剂R2、校准品。
[0022] 其中试剂Rl组成为： pH 7.5 Tris缓冲液 100 mmol/L 叠氮钢 0.1%(w/v) 聚乙二醇6000 0.5%(v/v) 二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒 0. l%(w/v) 试剂R2组成为： pH7.5 Tris缓冲液 100 mmol/L 羊抗人APOAl抗体 30ml/L 牛血清白蛋白 20g/L Kathon-CG 0.05%(v/v) 具体测定方法同实施例1。
[0023] 实施例3 一种载脂蛋白Al免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂RU试剂R2、校准品。
[0024] 其中试剂Rl组成为： pH 7.5 Tris缓冲液 100 mmol/L 叠氮钢 0.1%(w/v) 聚乙二醇6000 0.5%(v/v) 二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒 l%(w/v) 试剂R2组成为： pH7.5 Tris缓冲液 100 mmol/L 羊抗人APOAl抗体 30ml/L 牛血清白蛋白 30g/L Kathon-CG 0.05%(v/v) 具体测定方法同实施例1。
[002引 实施例4 一种载脂蛋白Al免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂RU试剂R2、校准品。
[0026] 其中试剂Rl组成为： pH 7.5 Tris缓冲液 100 mmol/L 叠氮钢 0.1%(w/v) 聚乙二醇6000 0.5%(v/v) 二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒 2%(w/v) 试剂R2组成为： pH7.5 Tris缓冲液 100 mmol/L 羊抗人APOAl抗体 30ml/L 牛血清白蛋白 40g/L Kathon-CG 0.05%(v/v) 具体测定方法同实施例1。
[0027]对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
[002引准确度验证实验： 将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组，市场上获得认可的一种准确度优异的载脂蛋白 Al试剂盒(长春某公司生产)作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的结果 如图1-图3。
[0029] 通过图1-图3的检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检测 结果相关性分别为0.9945、0.9949、0.9952，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上 获得认可的具有优异准确度的载脂蛋白Al检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添 加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
[0030] 线性相关性验证实验： 找到载脂蛋白Al高值样本为2.50g/L，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的 样本，依次为2.5g/L、2. Og/L、1.5g/L、1.0g/L、0.5g/L、0g/L浓度的样本，每个浓度水平各样 本分别测定=次，分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如 表1所示。
[0031 ] 表1实施例1-4线性相关验证实验检测结果
上述检测结果显示，实施例1-4检测结果相关性均大于0.999,运说明本发明试剂具有 更好的线性相关性。
[0032] 稳定性验证实验： 在2°C~8°C、无腐蚀性气体的避光环境中胆存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。四 种试剂每月选取同一样本测定其吸光度=次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结果进 行对比，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如表2。
[0033] 表2稳定性验证实验检测结果
实验结果显示，实施例1试剂在2°C~8°C、无腐蚀'生气体的避光环境中胆存15个月稳 定，而实施例2、3、4试剂在2°C~8°C、无腐蚀性气体的避光环境中胆存24个月稳定，说明在 试剂中加入牛血清白蛋白和Kathon-CG,二者共同作用有效的提高了载脂蛋白Al检测试剂 盒的稳定性。
[0034] 分析灵敏度验证实验： 用本发明载脂蛋白Al试剂盒测试已知浓度在1.6g/L的样本，记录吸光度差值。分别利 用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如表3所示。
[0035] 表3分析灵敏度实验结果
通过检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒的吸光度差值均比实施例1的高，说明在 试剂中加入二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒在静电吸附的作用下与羊抗人APOAl抗体结合， 从而使抗体在磁性纳米颗粒上形成凝集，扩大了响应信号，大大的提高了试剂的分析灵敏 度。
[0036] 综合W上分析，本发明提供的载脂蛋白Al免疫比浊法检测试剂盒，在试剂Rl中通 过加入一定量的二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒和在试剂R2中加入一定量的牛血清白蛋白 和Kathon-CG能够有效的提高试剂盒的稳定性和分析灵敏度，线性范围较好，试剂的准确 度也较好。因此，本发明提供的载脂蛋白Al免疫比浊法检测试剂盒有利于在市场中进一步 的推广使用。
【主权项】
1. 一种载脂蛋白A1免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、试剂R2和校准 品，其中试剂R1组成为：l〇〇mmol/L pH7.5 Tris缓冲液、0.1%叠氮钠(w/v)、0.1%-2%二氧化 娃包覆的磁性纳米颗粒(w/v);试剂R2组成为：100mmol/L pH7.5Tris缓冲液、30ml/L羊抗人 ApoAl抗体、20_40g/L 牛血清白蛋白、0.05% Kathon_CG(v/v)。2. 根据权利要求1所述的一种载脂蛋白A1免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述二 氧化娃包覆的磁性纳米颗粒为Fe3〇4/Si〇2复合纳米粒子，粒径为20-50nm。3. 根据权利要求1所述的一种载脂蛋白A1免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述试 剂R1和试剂R2在使用时的体积比例为R1 :R2=3:1。
【专利摘要】本发明公开了一种载脂蛋白A1免疫比浊法检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂R1中加入一定量的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒和在试剂R2中加入一定量的牛血清白蛋白和Kathon-CG，有效的提高了试剂盒的稳定性和分析灵敏度，其线性范围也较好，试剂的准确度高，有利于在市场中进一步的推广使用。
【IPC分类】G01N33/536, G01N33/92
【公开号】CN105527449
【申请号】CN201510979774
【发明人】李静, 董雯, 谭柏清
【申请人】山东博科生物产业有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2015年12月24日