一种呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡的制作方法
【专利摘要】本发明涉及医学检验领域，涉及一种呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，包括：多个样品垫、多个连有吸水纸的硝酸纤维素膜；每个所述样品垫上包被有多种荧光微球，且每种荧光微球表面均包被有一种呼吸道病原体的抗体；每个连有吸水纸的硝酸纤维素膜上设置有至少两条检测线，且所述检测线设置在硝酸纤维素膜部位；每条检测线上固定包被有一种呼吸道病原体的抗体，且该抗体与所述样品垫上包被的其中一种荧光微球表面包被的呼吸道病原体的抗体为配对关系。本发明操作简便快捷；可通过不同的连有吸水纸的硝酸纤维素膜与样品垫搭配形成不同的特定的试纸条，再根据需要将不同的试纸条混搭装入卡纸，检测的灵活性和定制性强，节约检测成本。
【专利说明】
一种呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡
技术领域
[0001]本发明涉及医学检验领域，具体而言，涉及一种呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡。
【背景技术】
[0002]呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染(acute upperrespir tract infect1n)，指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。常见病因为病毒，少数由细菌引起。患者不分年龄、性别、职业和地区。不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管一一支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
[0003]已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。呼吸道病原体因其临床的非特异性症状，大部分依靠实验室检查方法，目前应用到的检测方法有细菌的病原体分离培养及病毒的培养组织细胞培养法，血清学和直接检测法;间接、直接免疫荧光抗体法(IFA/DFA);酶免疫测定(EIA)、核酸扩增法(PCR)。
[0004]尽管现有的呼吸道病原的检测方法多种多样，但确诊感染病原仍非常困难。细菌的病原体分离培养及病毒的培养组织细胞培养法过去常作为“金标准”，但因其操作复杂、培养时间长、技术难度大、阳性率低等缺点而很难实现，近10年已被分子方法所取代。随着快速诊断技术的迅速发展，分子检测技术愈趋完善，已经被作为呼吸道病原体检测的新标准，但因其对实验室条件要求高而无法普及，而且商品化的产品较少，未形成系列，多数病原尚不能检测。近年来免疫技术的发展，特别是免疫标记技术的广泛应用，如直接、间接免疫荧光法、抗碱性磷酸酶桥联酶标法等标记技术，使得应用免疫荧光技术检测呼吸道病原体的方法得以开发并应用，但该技术仍然存在众多缺点:非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，检测分析技术程序复杂，对操作人员的专业技术水平要求很高，且多种病原体联检时耗时长，操作繁琐。目前间接、直接免疫荧光抗体法(IFA/DFA)可以组合成多联检的形式，国内有代理的进口西班牙VIRCELL公司的免疫荧光法检测试剂，可同时检测9项呼吸道病原体抗体，用以临床辅助诊断，但该方法还存在操作步骤繁琐，操作人员专业水平及临床经验要求高，需要使用精密操作电子显微镜观测等缺陷。
[0005]有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种一种呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，所述的多联检测试剂卡操作简便快速，可用于同时检测多种呼吸道病原体。
[0007]为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案:
[0008]多个样品垫、多个连有吸水纸的硝酸纤维素膜；
[0009]每个所述样品垫上包被有多种焚光微球，且每种焚光微球表面均包被有一种呼吸道病原体的抗体；
[0010]每个连有吸水纸的硝酸纤维素膜上设置有至少两条检测线，且所述检测线设置在硝酸纤维素膜部位；
[0011]每条检测线上固定包被有一种呼吸道病原体的抗体，且该抗体与所述样品垫上包被的其中一种荧光微球表面包被的呼吸道病原体的抗体为配对关系。
[0012]本发明采用免疫层析技术，可以在15分钟内完成呼吸道病原体的多个项目联合检测，操作简便快捷，对操作人员专业技术水平要求低，适合于临床床旁检测，快速获得检测结果。
[0013]通常所述样品垫的数量与所述连有吸水纸的硝酸纤维素膜相同；
[0014]样品垫上包被的荧光微球上的抗体的种类可以相同也可以不同；
[0015]在使用时，将样品垫与对应的连有吸水纸的硝酸纤维素膜组装在一起可得到试纸条。
[0016]优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，所述样品垫和所述连有吸水纸的硝酸纤维素膜的一侧还设置有包被膜和底衬。
[0017]其中，所包被膜位于所述样品垫与所述底衬中间、以及所述连有吸水纸的硝酸纤维素膜与所述底衬中间。
[0018]优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，所述多联检测试剂卡还包括卡壳;所述卡壳上设置有样品加样区及试纸放置卡位。
[0019]所述纸放置卡位即组装样品垫与对应的连有吸水纸的硝酸纤维素膜的卡槽。
[0020]进一步优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，所述试纸放置卡位的近加样区端与加样区之间设置有连接通道。
[0021]进一步优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，所述试纸放置卡位数量为2?4个。
[0022]优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，所述样品垫上包被有2?17种荧光微球。
[0023]优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，所述检测线为2?5条。
[0024]进一步优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，每相邻两条检测线互相平行，且间隔为3?8mm。
[0025]优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述连有吸水纸的硝酸纤维素膜上设置有对照线，所述对照线上固定包被有所述荧光微球表面包被的呼吸道病原体的抗体的二抗。
[0026]设置对照线的目的是为了避免或减少假阴性结果的出现。
[0027]优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述多联检测试剂卡还包括荧光检测仪。
[0028]所述荧光检测仪用来读取检测线上的荧光信号，实现对结果的自动判读，减少主观判读。
[0029]优选的，如上所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，所述呼吸道病原体包括甲型流感病毒，乙型流感病毒，呼吸道合胞病毒，呼吸道腺病毒、副流感病毒、鼻病毒、埃可病毒、麻疹病毒、风疹病毒、腺病毒、流感嗜血杆菌、肺炎球菌、葡萄球菌、嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体。
[0030]与现有技术相比，本发明的有益效果为:
[0031]I)、本发明采用免疫层析技术，可以在15分钟内完成呼吸道病原体的多个项目联合检测，操作简便快捷，对操作人员专业技术水平要求低，适合于临床床旁检测，快速获得检测结果。
[0032]2)、可通过不同的连有吸水纸的硝酸纤维素膜与样品垫搭配形成不同的特定的试纸条，再根据需要将不同的试纸条混搭装入卡纸，检测的灵活性和定制性强，利于有针对性对面对不同的检测情况，节约检测时间和检测成本。
[0033]3)、本发明提供的多联检测试剂卡还包括配套的荧光检测仪，可实现对结果的自动判读，减少操作者带来的主管判断的误差，且还有能够保存历史数据等优点。
【附图说明】
[0034]为了更清楚地说明本发明【具体实施方式】或现有技术中的技术方案，下面将对【具体实施方式】或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0035]图1为本发明实施例1中的甲型流感病毒和乙型流感病毒联合检测试纸条；
[0036]图2为本发明实施例2中的呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒和副流感病毒联合检测试纸条；
[0037]图3为本发明实施例3中呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡。
[0038]附图标记:
[0039]101连有吸水纸的硝酸纤维素膜；
[0040]102 吸水纸；
[0041]103硝酸纤维素膜；
[0042]104 样品垫；
[0043]105A第一检测线；
[0044]105B第二检测线；
[0045]106甲型流感病毒和乙型流感病毒联合检测试纸条；
[0046]107 对照线；
[0047]201连有吸水纸的硝酸纤维素膜；
[0048]202 吸水纸；
[0049]203硝酸纤维素膜；
[0050]204 样品垫；
[0051]205A第一检测线；
[0052]205B第二检测线；
[0053]205C第二检测线；
[0054]206呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒和副流感病毒联合检测试纸条；
[0055]207 对照线；
[0056]301 卡壳；
[0057]302 加样区；
[0058]303连接通道。
【具体实施方式】
[0059]下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0060]实施例1
[0061]本实施例提供了甲型流感病毒和乙型流感病毒联合检测试纸条的组装方法，如图1所示:
[0062]连有吸水纸的硝酸纤维素膜101分为吸水纸102和硝酸纤维素膜103两部分，将样品垫104与硝酸纤维素膜103的一端组合连接在一起得到甲型流感病毒和乙型流感病毒联合检测试纸条106。
[0063]所述样品垫104和所述连有吸水纸的硝酸纤维素膜101的背向检测线的一侧还设置有包被膜和底衬。
[0064]其中硝酸纤维素膜103上设置有第一检测线105A和第二检测线105B;
[0065]所述第一检测线105A和第二检测线105B平行设置，且间隔为8mm。
[0066]样品垫104上包被荧光微球，每个荧光微球表面上标记有甲型流感病毒的第一抗体(小鼠来源)和乙型流感病毒的第一抗体(兔来源)中的一种；
[0067]所述第一检测线105A上固定包被有甲型流感病毒的第二抗体，第二检测线105B上包被有乙型流感病毒的第二抗体；
[0068]所述甲型流感病毒的第一抗体与所述甲型流感病毒的第二抗体结合的为同一甲型流感病毒表面抗原，且均为单克隆抗体，区别在于结合的抗原表位不同，即这两种抗体为配对抗体。
[0069]同样的，所述乙型流感病毒的第一抗体与所述乙型流感病毒的第二抗体结合的为同一乙型流感病毒表面抗原，且均为单克隆抗体，区别在于结合的抗原表位不同，即这两种抗体为配对抗体。
[0070]其中硝酸纤维素膜103上还设置有对照线107;
[0071]所述对照线107上固定包被有山羊抗小鼠的二抗。只要对照线上的二抗还具有活性，则说明该试条的保存条件良好，其余的活性原料均保持活性良好，能够保证试条的有效性。所以对照线可以只设置一条。
[0072]实施例2
[0073]本实施例提供了呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒和副流感病毒联合检测试纸条的组装方法，如图2所示:
[0074]连有吸水纸的硝酸纤维素膜201分为吸水纸202和硝酸纤维素膜203两部分，将样品垫204与硝酸纤维素膜203的一端组合连接在一起得到呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒和副流感病毒联合检测试纸条206。
[0075]所述样品垫204和所述连有吸水纸的硝酸纤维素膜201的背向检测线的一侧还设置有包被膜和底衬。
[0076]其中硝酸纤维素膜203上设置有第一检测线205A、第二检测线205B和第三检测线205C；
[0077]所述第一检测线205A、第二检测线205B和第三检测线205C平行设置，且相邻两条检测线的间隔为5mm。
[0078]样品垫204上包被荧光微球，每个荧光微球表面上标记有呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒和副流感病毒的第一抗体中的一种;且这些抗体均为小鼠来源。
[0079]所述第一检测线205A上固定包被有呼吸道合胞病毒的第二抗体，第二检测线205B上包被有呼吸道腺病毒的第二抗体，第三检测线205C上包被有副流感病毒的第二抗体，；
[0080]所述呼吸道合胞病毒的第一抗体与所述甲型流感病毒的第二抗体结合的为同一呼吸道合胞病毒蛋白抗原，且均为单克隆抗体，区别在于结合的抗原表位不同，即这两种抗体为配对抗体。
[0081]同样的，所述呼吸道腺病毒和副流感病毒的第一抗体与所述呼吸道腺病毒和副流感病毒的第二抗体也为配对抗体。
[0082]其中硝酸纤维素膜203上还设置有对照线207；
[0083]对照线207上固定包被有山羊抗小鼠的二抗。
[0084]实施例3
[0085]本实施例提供了一种呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡的组装及使用方法，所述呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡可用于甲型流感病毒，乙型流感病毒，呼吸道合胞病毒，呼吸道腺病毒和副流感病毒5个项目的联合检测。具体请参照图3所示:
[0086]卡壳301上具有试纸放置卡位、加样区302及连接通道303;优选的，所述连接通道303为亲水性通道，连接试纸放置卡位及加样区302。
[0087]需要说明的是，加样区302的形状可设置为图示的椭圆形，也可设置为长条形或矩形等形状。
[0088]优选的，连接通道303还可设置在卡壳301的内部，仅有两个开后端分别连接加样区302及试纸放置卡位。
[0089]将实施例1中组装的甲型流感病毒和乙型流感病毒联合检测试纸条106和实施例2中组装的呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒和副流感病毒联合检测试纸条206装入卡壳301的试纸放置卡位上，并且使得样品垫104和样品垫204位于加样区302近端，吸水纸102和吸水纸202位于加样区302远端。
[0090]将待测样品滴加入加样区302，在层析作用下，样品经连接通道303流向甲型流感病毒和乙型流感病毒联合检测试纸条106和呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒和副流感病毒联合检测试纸条206，并依次流经两个试纸条的样品垫及硝酸纤维素膜区的检测线。
[0091]若样本中含有待测物，则在流经样品垫时会与其相应的第一抗体结合，形成荧光微球-第一抗体结合-抗原复合物，所述荧光微球-第一抗体结合-抗原复合物随着样本溶液继续流向硝酸纤维素膜区，并与硝酸纤维素膜区上的检测线上固定包被的对应的第二抗体结合，进而固定在相应的检测线上。
[0092]15分钟后，将试剂卡插入配套的免疫荧光检测即可自动实现对结果的判断。
[0093]实施例4
[0094]以实施例2为基础，将实施例2中的样品垫和检测线进行替换。
[0095]样品垫上包被荧光微球，每个荧光微球表面上标记有肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、嗜肺军团菌、葡萄球菌的第一抗体中的一种；
[0096]检测线为五条，依次为:
[0097]第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线和第五检测线，五条检测线上对应的固定包被的抗体为肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、嗜肺军团菌、葡萄球菌的第二抗体，且相应病原体的第二抗体与第一抗体为配对抗体。
[0098]其他实施方式同实施例2，由此得到肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、嗜肺军团菌、葡萄球菌联合检测试纸条。
[0099]实施例5
[0100]以实施例2为基础，将实施例2中的样品垫和检测线进行替换。
[0101]样品垫上包被荧光微球，每个荧光微球表面上标记有鼻病毒、麻疹病毒、风疹病毒、埃可病毒的第一抗体中的一种；
[0102]检测线为四条，依次为:
[0103]第一检测线、第二检测线、第三检测线和第四检测线，五条检测线上对应的固定包被的抗体为鼻病毒、麻疹病毒、风疹病毒、埃可病毒的第二抗体，且相应病原体的第二抗体与第一抗体为配对抗体。
[0104]其他实施方式同实施例2，由此得到鼻病毒、麻疹病毒、风疹病毒、埃可病毒联合检测试纸条。
[0105]实施例6
[0106]以实施例3为基础进行改装，改装方法为，选取具有4个试纸放置卡位的卡壳，将实施例1、实施例2、实施例4、实施例5中组装的试纸条放入其中，其他设置方式同实施例3，即得到可以同时对14中呼吸道病原体进行检测的试剂卡。
[0107]最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
【主权项】
1.一种呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，包括: 多个样品垫、多个连有吸水纸的硝酸纤维素膜； 每个所述样品垫上包被有多种焚光微球，且每种焚光微球表面均包被有一种呼吸道病原体的抗体； 每个连有吸水纸的硝酸纤维素膜上设置有至少两条检测线，且所述检测线设置在硝酸纤维素膜部位； 每条检测线上固定包被有一种呼吸道病原体的抗体，且该抗体与所述样品垫上包被的其中一种荧光微球表面包被的呼吸道病原体的抗体为配对关系。2.如权利要求1所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述样品垫和所述连有吸水纸的硝酸纤维素膜的一侧还设置有包被膜和底衬。3.如权利要求1所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述多联检测试剂卡还包括卡壳;所述卡壳上设置有样品加样区及试纸放置卡位。4.如权利要求3所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述试纸放置卡位的近加样区端与加样区之间设置有连接通道。5.如权利要求4所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述试纸放置卡位数量为2?4个。6.如权利要求1所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述样品垫上包被有2?17种荧光微球。7.如权利要求1所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述检测线为2?5条。8.如权利要求1所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述连有吸水纸的硝酸纤维素膜上设置有对照线，所述对照线上固定包被有所述荧光微球表面包被的呼吸道病原体的抗体的二抗。9.如权利要求1所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述多联检测试剂卡还包括荧光检测仪。10.如权利要求1?9任一项所述的呼吸道病原体免疫层析多联检测试剂卡，其特征在于，所述呼吸道病原体包括甲型流感病毒，乙型流感病毒，呼吸道合胞病毒，呼吸道腺病毒、副流感病毒、鼻病毒、埃可病毒、麻疹病毒、风疹病毒、腺病毒、流感嗜血杆菌、肺炎球菌、葡萄球菌、嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体。
【文档编号】G01N33/569GK106053803SQ201610395679
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月6日
【发明人】肖江群, 江应玲, 钟乾兴, 王保丹, 乐宜萃
【申请人】安邦（厦门）生物科技有限公司