用于联合检测心肌肌钙蛋白i-肌红蛋白-肌酸激酶同工酶的试纸条的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种用于定量检测心肌肌钙蛋白1-肌红蛋白-肌酸激酶同工酶的三项联检的层析试纸条。
【背景技术】
[0002]心肌肌妈蛋白I (Cardiac Troponin I，简称cTnl)是心肌细胞死亡的特异及敏感的标志物，其可在心肌损伤时进入血液中，而未发现在健康的或者受损伤的骨骼肌或者其他组织中表达。目前，心肌肌钙蛋白I作为心肌细胞死亡的标记物已经在临床诊断中广泛应用，如:对心肌损伤的诊断、AMI后溶栓治疗的指示、对围术期心肌梗死的诊断、对心肌炎的诊断以及与骨骼肌损伤的鉴别诊断等。
[0003]肌红蛋白(Myoglobin，简称Myo)作为心肌损伤的标记物，肌红蛋白作为已经被应用了三十多年。由于肌红蛋白大量存在于骨骼肌组织中，即使轻度的骨骼肌损伤都能导致血液中肌红蛋白浓度的显著升高。因此，肌红蛋白与cTnl—起被用于临床实践中以提高急性心肌梗死诊断的特异性。
[0004]肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase_MB，简称CK-MB)是临床诊断急性心肌梗死常用的酶学指标，并利用其增高的时间与梯度观察患者的病情变化、治疗效果及愈后。一般情况下，肌酸激酶同工酶在急性心肌梗死发病后4-8小时内增高，24小时达到峰值，2-3天后恢复正常。肌酸激酶同工酶作为常用的心肌损伤标志物在临床检测中广泛应用。
[0005]临床诊断常用的检测方法包括:酶联免疫法、化学发光法、胶乳增强免疫比浊法、胶体金免疫层析法、荧光免疫层析法等。酶联免疫法及化学发光法检测灵敏度高，但其耗时过长。胶乳增强免疫比浊法虽可实现高通量筛选，但由于方法学本身的限制，其检测灵敏度较低。胶体金免疫层析法操作简单，但只能实现半定量。荧光免疫层析法虽本身具有高灵敏度，但是其易受到高浓度的共存杂质产生的背景荧光的影响，因此在临床检测中实际的灵敏度会大打折扣。
[0006]量子点尺寸介于几个nm至几十nm之间。它通常是由无机核以及包覆在核表面的有机分子所构成。对于量子点来说，当其尺寸达到一定的临界值时，材料的行为将呈现出量子特性，材料的结构和性质也将会发生从宏观到微观的改变。量子点的发光原理在于，当量子点的尺寸小到一定值时，由于受到量子尺寸效应的影响，原来连续的能级结构变成类似原子的不连续结构。当光照射到量子点上时，量子点吸收光子，价带上的电子吸收能量后受到激发，跃迀至导带，而在价带上则会产生与被激发电子对应的空穴，跃迀到导带上的电子可以再以辐射跃迀的方式重新回到价带，与价带上的空穴复合并发射出光子。
[0007]量子点独特的光学性质主要体现在以下几个方面:
[0008]1、通过改变量子点的尺寸和组成可以实现对量子点发射光谱的调控，从而得到多种不同发光颜色的量子点，并可以使量子点的荧光发射光谱覆盖整个可见光区。以CdSe/ZnS量子点为例，随着其尺寸的增大(从2nm增大到7nm)，量子点的发光颜色可以从蓝光(433nm)到红光(610nm)甚至近红外光(655nm)，覆盖了整个可见光范围。
[0009]2、宽的激发光谱:同一个激发波长的光可以激发不同大小的量子点，不同尺寸的量子点发射出的荧光不同，有利于在同步检测中的应用。而同一激发光源却难以同时激发多种有机染料。
[0010]3、大的Stokes位移(可达几百nm)以及窄且对称的发射光谱，这一特性使在使用量子点时可以有效地避免光谱重叠。
[0011]4、量子点具有良好的光稳定性，其荧光可以保持很长时间而不会发生褪色；而有机染料易发生光漂白，其自身的荧光容易随着照射时间的延长而逐渐褪色。
[0012]稀土荧光材料是指镧系元素(元素周期表中原子序数从57-71号的15种元素)加上同属III B族中原子序数21的钪Sc、39的钇Y，一共17种元素。当这些元素的离子受到光激发时，离子吸收的能量可使4f电子从能量较低的能级激发跃迀至能量较高的能级，而当4f电子从较高能级以辐射弛豫的方式跃迀回到较低能级时，由于各种镧系元素离子的4f电子能级不同，所以不同镧系元素离子的发光波长也不相同(两个能级间的能量差越大，发射的波长越短)。由于镧系元素离子具有丰富的4f能级和跃迀特性，从而产生大量的吸收光谱信息和荧光光谱信息。稀土荧光材料具有吸收能力强、转换率高、可发射宽范围的光谱，且物理性能稳定等优点。
[0013]基于量子点开发的试纸条具备了很高的检测灵敏度，特别是适用于低浓度水平(如pg/ml-ng/ml)待检物含量的准确测定，但是其检测的线性范围不够宽，在相同的一套检测体系范围内，无法实现高值样品的准确定量。因此，单独使用量子点时，无法兼顾到低端的检测灵敏度以及宽线性范围。而通过联合应用其他与量子点具有相似的激发波长和发射波长的荧光元素或者荧光材料，将有望获得更宽的线性范围，并且可以实现在同一套荧光检测系统中进行荧光信号结果的读取，也更有利于在临床的推广及应用。
【实用新型内容】
[0014]抟术问题
[0015]心肌肌钙蛋白1-肌红蛋白-肌酸激酶同工酶三项联检对于急性心肌梗死的判断具有重要的临床意义，因此亟待需要开发出一种定量检测心肌肌钙蛋白1-肌红蛋白-肌酸激酶同工酶，且能够满足高灵敏度和宽线性范围要求的三项联检试纸条。
_6] 技术方案
[0017]本实用新型提供了一种用于联合检测心肌肌钙蛋白1-肌红蛋白-肌酸激酶同工酶的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括依次搭接粘贴的以下部件:
[0018]I)用于接受来自全血、血浆或血清样品的样品垫；
[0019]2)同时包被有由量子点和稀土荧光材料分别单独标记的抗心肌肌钙蛋白I的第一抗体以及由生物素标记的抗心肌肌钙蛋白I的第二抗体的抗体结合垫I，其中所述第一抗体和第二抗体分别特异性识别心肌肌钙蛋白I的不同表位；
[0020]3)同时包被有由量子点和稀土荧光材料分别单独标记的抗肌红蛋白的第一抗体的抗体结合垫II;
[0021]4)同时包被有由量子点和稀土荧光材料分别单独标记的抗肌酸激酶同工酶的第一抗体的抗体结合垫III;
[0022]5)同时包被有相间隔的三条检测线和一条质控线的包被垫，其中所述三条检测线依次固定有亲和素、识别肌红蛋白不同表位的抗肌红蛋白的第二抗体及识别肌酸激酶同工酶不同表位的抗肌酸激酶同工酶的第二抗体，所述质控线固定有抗鼠IgG的抗体；和
[0023]6)用于提供检测所需的毛细作用力的吸水纸。
[0024]在一个实施方式中，所述试纸条进一步包括底板，其中所述底板上粘贴有依次搭接的样品垫、抗体结合垫1、抗体结合垫I1、抗体结合垫II1、包被垫和吸水纸。
[0025]在一个实施方式中，所述量子点为微球形式且具有2nm-30nm的粒径范围，且所述量子点选自以下组中:CdTe、CdSe, PbSe, InP和GaN。
[0026]在一个实施方式中，所述抗体结合垫1、II和/或III上进一步包被有微球，其中所述微球负载有所述稀土荧光材料和相应的抗体。
[0027]在一个实施方式中，所述微球的粒径大小为50nm-400nm。
[0028]在一个实施方式中，所述微球的粒径大小为100nm-300nm。
[0029]在一个实施方式中，所述微球的粒径大小为10nm或300nm。
[0030]在一个实施方式中，所述试纸条的宽度在0.2cm至0.5cm之间。
[0031]有益效果
[0032]本实用新型的三项联检试纸条兼顾了心肌肌钙蛋白1-肌红蛋白-肌酸激酶同工酶中低值灵敏度和检测的线性范围的要求。而且，该试剂条制备方法简单，可以实现批量生产，具备广阔的市场前景。
【附图说明】
[0033]图1是本实用新型的试纸条的侧视示意图；和
[0034]图2是本实用新型的试纸条的俯视示意图。
[0035]附图标记表示为:
[0036]1-底板、2-样品垫、3-抗体结合垫1、4-抗体结合垫11、5_抗体结合垫111、6_包被垫、7-吸水纸、8-量子点标记的抗心肌肌钙蛋白I的第一抗体、9-量子点标记的抗肌红蛋白的第一抗体、10-量子点标记的抗肌酸激酶同工酶的第一抗体、11-检测线(心肌肌钙蛋白1)、12_检测线(肌红蛋白)、13_检测线(肌酸激酶同工酶)和14-质控线。
【具体实施方式】
[0037]以下将参照在附图中说明并描述于以下的说明书中的实施方案。应理解由此不意图限制本实用新型的范围。
[0038]图1为一种定量检测心肌肌钙蛋白1-肌红蛋白-肌酸激酶同工酶的三项联检试纸条的侧视示意图。
[0039]如图1所示，本实用新型的三项联检荧光层析试纸条包括底板I和在底板I上顺序搭接粘结的样品垫2、抗体结合垫I 3、抗体结合垫II 4、抗体结合垫III 5、