POE烷基苯基醚类;POE(IO)壬基苯基醚等POE烷基苯基醚类;Ρ0Ε( 105) P0P(5)二醇、P0E(120)P0P(40)二醇、？(^(160汗0?(30)二醇、？(^(20)?0?(20)二醇、？(? (200)P0P 二醇（70)、P0E(3)P0P(17)二醇、P0E(42)P0P(67)二醇、P0E(54)P0P(39)二醇、POE (196)P0P(67)二醇等POE-POP二醇类等非离子型表面活性剂;烷基二氨基乙基甘氨酸等甘 氨酸型、月桂基二甲基氨基乙酸甜菜碱等乙酸甜菜碱型、咪唑啉型等的两性表面活性剂； POE (10)月桂基醚磷酸钠等POE烷基醚磷酸及其盐、月桂酰基甲基丙氨酸钠等N-酰基氨基酸 盐、烷基醚羧酸盐、N-椰油酰基甲基牛磺酸钠等N-酰基牛磺酸盐、十四烯磺酸钠等磺酸盐、 月桂基硫酸钠等烷基硫酸盐、POE (3)月桂基醚硫酸钠等POE烷基醚硫酸盐、α-烯烃磺酸盐等 阴离子表面活性剂;烷基胺盐、烷基季铵盐(苯扎氯铵、苄索氯铵等）、烷基吡啶鑰盐(十六烷 基氯化吡啶鑰、十六烷基溴化吡啶鑰等)等阳离子表面活性剂等。本发明的水性悬浮剂中， 作为表面活性剂，可含有1种表面活性剂，或者，也可以含有2种以上表面活性剂。作为表面 活性剂，优选为聚氧乙烯氢化蓖麻油60(HC0-60)、聚山梨酯80(吐温80)、聚乙二醇单硬脂酸 酯（MYS-40)、和/或聚氧乙稀化聚丙二醇（求1]才：^>工于。口匕° 一少）。
[0045] 另外，在本说明书中，"抗凝聚剂"是可以防止大环内酯类抗菌剂的凝聚、向人体给 药时不显示毒性的物质，只要是不会妨碍大环内酯类抗菌剂的作用的抗凝聚剂则没有特殊 限制，例如，可列举:烷基硫酸盐、N-烷酰基甲基牛磺酸盐、乙醇、甘油、丙二醇、柠檬酸钠、甘 油磷脂(卵磷脂(磷脂酰胆碱）（例如，精制大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂）、磷脂酰丝氨酸、磷 脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰甘油、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血 磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰肌醇、溶血磷脂酸、及溶血磷脂酰甘油）、及鞘脂质 (sphingophospholipid)(鞘磷脂(sphingomyelin)、神经酰胺、鞘糖脂、或神经节苷脂)等磷 月旨、D-山梨糖醇、乳糖、木糖醇、阿拉伯树胶、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯 脂肪酸酯、聚乙二醇(PEG)、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、烷基苯磺酸盐、磺基琥珀酸酯盐、 聚氧乙烯化聚丙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、羟丙基纤维素(HPC)、甲基纤 维素(MC)、羟乙基纤维素(HEC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲纤维素钠、羧基乙烯基聚合 物(CVP)、N-酰基谷氨酸盐、丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、酪蛋白钠、L-缬氨酸、L-亮氨 酸、L-异亮氨酸、苯扎氯铵、苄索氯铵等。本发明的水性悬浮剂中，作为抗凝聚剂，可含有1 种，或者，也可以含有2种以上抗凝聚剂。作为抗凝聚剂，优选为聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇 (PEG)、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
[0046] 在本说明书中，所述"粘度调整剂"是能够调节本发明的水性悬浮剂的粘度的物 质，是即使作为医药品添加物向人给药也不显示毒性的物质，只要是不会妨碍大环内酯类 抗菌剂的作用的物质则没有特殊限制，例如，可列举多糖类或其衍生物(阿拉伯树胶、刺梧 桐树胶、黄原胶、角豆胶、瓜尔胶、愈疮木脂、榲椁籽、达尔曼胶（夕力'Λ)、黄蓍树胶、 安息香胶、刺槐豆胶、酪蛋白、琼脂、藻酸、糊精、葡聚糖、卡拉胶、明胶、胶原蛋白、果胶、淀 粉、多聚半乳糖醛酸、甲壳素及其衍生物、壳聚糖及其衍生物、弹性蛋白、肝素、类肝素、硫酸 肝素、硫酸乙酰肝素、透明质酸、硫酸软骨素等）、神经酰胺、纤维素衍生物（甲基纤维素、乙 基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧乙基纤维 素、纤维素、硝基纤维素等）、聚乙烯醇(完全或部分皂化物）、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚 甲基丙烯酸乙烯酯、聚丙烯酸、羧乙烯基聚合物、聚乙烯亚胺、聚环氧乙烷、聚乙二醇、核糖 核酸、脱氧核糖核酸、甲基乙烯基醚-马来酸酐共聚物等、及其药理学可接受的盐类(例如， 藻酸钠)等。本发明的水性悬浮剂中，作为粘度调整剂，可含有1种，或者，也可以含有2种以 上粘度调整剂。作为粘度调整剂，优选为甲基纤维素(MC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、和/或 羟乙基纤维素(HEC)。
[0047] 作为本说明书中的分散稳定剂，优选为表面活性剂和/或增稠剂，更优选为聚氧乙 烯氢化蓖麻油、羟丙基甲基纤维素、和/或甲基纤维素，例如，可以是聚氧乙烯氢化蓖麻油和 羟丙基甲基纤维素、或聚氧乙烯氢化蓖麻油和甲基纤维素。
[0048] 在本说明书中，也可作为分散稳定剂使用的表面活性剂、抗凝聚剂和/或粘度调整 剂（以下，在本段中称为"药剂"）可以附着或吸附于大环内酯类抗菌剂的纳米粒子的表面。 这样的药剂在粉碎工序前被添加的情况下，通过附着或吸附于大环内酯类抗菌剂的纳米粒 子的表面，可抑制粉碎工序中的纳米粒子的凝聚。另外，通过附着或吸附于大环内酯类抗菌 剂的纳米粒子的表面，在水性悬浮液中也具有抑制凝聚的效果。需要说明的是，在本说明书 中，作为分散稳定剂的表面活性剂、抗凝聚剂和/或粘度调整剂附着或吸附于大环内酯类抗 菌剂的纳米粒子的表面，是指这些药剂的至少一部分附着或吸附于纳米粒子表面(有利于 表面修饰），而并不是指在水性悬浮剂中不存在既未附着也未吸附的这些药剂。在另一表述 中，由于作为分散稳定剂的表面活性剂、抗凝聚剂和/或粘度调整剂可以对大环内酯类抗菌 剂的纳米粒子的表面进行表面修饰，因此可以称其为大环内酯类抗菌剂的"表面修饰剂"。
[0049] 本发明的水性悬浮剂所含有的大环内酯类抗菌剂为纳米微粒状。该大环内酯类抗 菌剂的平均粒径（Dv)为500nm以下、优选为400nm以下、300nm以下、200nm以下、150nm以下， 最优选为145nm以下。例如，大环内酯类抗菌剂的平均粒径的范围可以为20~500nm、20~ 400nm、20 ~300nm、20 ~200nm、优选为 50 ~400nm、50 ~300nm、50~200nm、50 ~150nm。另外， 该大环内酯类抗菌剂的90%粒径(090)为1500]11]1以下、优选为1200111]1以下、1000111]1以下、 800nm以下、700nm以下、600nm以下、500nm以下、400nm以下、300nm以下、200nm以下，最优选 为197nm以下。例如，大环内酯类抗菌剂的90%粒径(D90)的范围可以为50~1200nm、50~ 1000]1111、50~80011111、50~70011111，优选为80~80011111、80~70011111、80~60011111、80~50011111，进一 步优选为100~600nm、100~500nm、100~400nm、100~300nm。就本发明的水性悬浮剂而言， 由于作为其有效成分的大环内酯类抗菌剂为纳米微粒状，因此能够实现利用过滤器的灭 菌，由此，能够容易地进行对活性成分的物理化学性质的影响小的灭菌。
[0050] 本发明的水性悬浮剂所含有的大环内酯类抗菌剂的纳米微粒优选为通过将大环 内酯类抗菌剂、生理上可接受的盐和/或生理上可接受的糖、生理上可接受的多元醇和/或 水、及分散稳定剂混合而制造的纳米微粒。更优选本发明的大环内酯类抗菌剂的纳米微粒 为通过将大环内酯类抗菌剂、生理上可接受的盐和/或生理上可接受的糖、生理上可接受的 多元醇和/或水、及分散稳定剂混合而制造的、且通过在粉碎中或粉碎后添加卵磷脂而制造 的纳米微粒。
[0051 ]发明的效果
[0052]含有本发明的大环内酯类抗菌剂的纳米微粒(及分散稳定剂）的水性悬浮剂的澄 清性、（长期)分散性、保存稳定性、角膜滞留性及房水转移性优异，刺激性低，灭菌容易，且 经时稳定性及分散稳定性优异，因此可以作为非口服给药用医药组合物使用。
【附图说明】
[0053][图1]示出了血浆中的克拉霉素浓度的经时变化的坐标图。图中，纵轴表示血浆中 的克拉霉素浓度(ng/mL)，横轴表示经过时间（小时）。图中，圆表示0.3 %纳米化制剂、四方 表示1 %纳米化制剂、三角表示1 %原粉制剂。
[0054][图2]示出了眼房水中的克拉霉素浓度的经时变化的坐标图。图中，纵轴表示眼房 水中的克拉霉素浓度(ng/mL)，横轴表示经过时间（小时）。图中，圆表示0.3 %纳米化制剂、 四方表示1 %纳米化制剂、三角表示1 %原粉制剂。
[0055] [图3]示出了结膜中的克拉霉素浓度的经时变化的坐标图。图中，纵轴表示结膜中 的克拉霉素浓度(ng/mL)，横轴表示经过时间（小时）。图中，圆表示0.3 %纳米化制剂、四方 表示1 %纳米化制剂、三角表示1 %原粉制剂。
[0056] [图4]示出了基于秦野等/中村等的评价基准的药效试验的结果的坐标图。纵轴表 示得分、横轴表示菌液摄取后的经过天数。黑圆表示对照组(媒介物(vehicle))、白圆表示 AzaSite给药组、黑三角表示0.3%纳米化克拉霉素制剂给药组、白三角表示1 %纳米化克拉 霉素制剂给药组、黑四方表示1%克拉霉素原粉制剂给药组。值表示平均值，误差棒表示标 准偏差。
[0057][图5]示出了基于Draize等的评价基准的药效试验的结果的坐标图。纵轴表示得 分、横轴表示菌液摄取后的经过天数。黑圆表示对照组(媒介物）、白圆表示AzaSite给药组、 黑三角表示0.3 %纳米化克拉霉素制剂给药组、白三角表示1 %纳米化克拉霉素制剂给药 组、黑四方表示1 %克拉霉素原粉制剂给药组。值表示平均值，误差棒表示标准偏差。
[0058][图6]示出了基于秦野等/中村等的评价基准的药效试验的结果的坐标图。纵轴表 示得分、横轴表示菌液摄取后的经过天数。黑圆表示对照组(媒介物）、白圆表示AzaSite给 药组、黑三角表示〇. 3%纳米化克拉霉素制剂给药组、白三角表示1 %纳米化克拉霉素制剂 给药组、黑四方表示1 %克拉霉素原粉制剂给药组。值表示平均值，误差棒表示标准偏差。 [0059][图7]示出了基于Draize等的评价基准的药效试验的结果的坐标图。纵轴表示得 分、横轴表示菌液摄取后的经过天数。黑圆表示对照组(媒介物）、白圆表示AzaSite给药组、 黑三角表示0.3 %纳米化克拉霉素制剂给药组、白三角表示1 %纳米化克拉霉素制剂给药 组、黑四方表示1 %克拉霉素原粉制剂给药组。值表示平均值，误差棒表示标准偏差。
【具体实施方式】
[0060] 1.含有大环内酯类抗菌剂的微粒的水性悬浮剂
[0061] 大环内酯类抗菌剂的微粒可通过将大环内酯类抗菌剂、生理上可接受的盐和/或 生理上可接受的糖、生理上可接受的多元醇和/或水、及分散稳定剂混合而制造。优选本发 明的大环内酯类抗菌剂的微粒通过在进行粉碎的工序中或该工序后添加卵磷脂而制造。
[0062] 可用于大环内酯类抗菌剂的微粒的制造的多元醇只要是能够在不特别地引起生 理学上的问题的情况下摄取的多元醇则没有特殊限制。作为生理上可接受的多元醇，优选 为相对于盐的溶解性低的多元醇、相对于水的溶解性高的多元醇、凝固点低的多元醇和/或 引火点高的多元醇。另外，在要简便地进行粉碎后的除去的情况下，生理上可接受的多元醇 优选为相对于水的溶解性高的多元醇。
[0063] 作为多元醇，可列举例如甘油、丙二醇、聚乙二醇、二丙二醇、及二乙二醇等，优选 为丙二醇或甘油。作为多元醇的粘度，优选为1~l〇〇,〇〇〇(mPa · s)、更优选为5~10,000 (mPa · s)、进一步优选为 10~2,000(mPa · s)。
[0064] 相对于作为粉碎对象的有机化合物1质量份，多元醇的使用量优选为0.2~50质量 份、更优选为〇. 4~15质量份、进一步优选为0.6~10质量份。另外，所使用的多元醇的种类 可以考虑作为粉碎对象的有机化合物的溶解性而适当确定。进一步，该多元醇可以使用1种 多元醇、也可以将2种以上多元醇混合使用。
[0065]可用于本实施方式涉及的制造方法的盐只要是能够在不特别地引起生理学上的 问题的情况下摄取的盐则没有特殊限定。作为生理学上可接受的盐，优选为相对于多元醇 的溶解性低的盐、相对于水的溶解性高的盐和/或吸湿性少且具有适于有机化合物的微粉 碎化的硬度的盐。作为盐，更优选为具备这些性质中的2种以上的盐。盐在多元醇中的溶解 度优选为1〇(质量/容量）％以下。另外，在要使粉碎后的盐的除去简便的情况下，适宜的盐 是相对于水的溶解性高的盐。
[0066] 作为适宜的盐，可列举例如:氯化钠、氯化钾、氯化铵、硫酸钠、硫酸镁、硫酸钾、硫 酸钙、苹果酸钠、柠檬酸钠、柠檬酸二钠、柠檬酸二氢钠、柠檬酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二 氢钾、磷酸氢二钠、及磷酸氢二钾等。作为更适宜的盐，可列举氯化钠、氯化钾、硫酸镁、硫酸 钙、柠檬酸钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾等，优选为氯化钠。
[0067] 另外，对于盐，也可以在与大环内酯类抗菌剂混合之前进行粉碎等来调整粒径。在 预先调整盐的粒径的情况下，作为粒子的Dv，可以为例如5~300μπι、10~200μπι，优选为0.01 ~300μπι，更优选为0.1~100μπι，进一步优选为0.5~50μπι。另外，相对于有机化合物1质量 份，该盐的使用量优选为0~100质量份、更优选为0.2~50质量份、进一步优选为0.5~30质 量份。进一步，该盐可以使用1种盐、也可以将2种以上盐混合使用。
[0068] 例如，本发明的大环内酯类抗菌剂的微粒可依次经由"粉碎工序"、"卵磷脂的混合 工序"、"过滤/水洗工序"及"干燥工序"而制造。但其中，也可以将"粉碎工序"与"卵磷脂的 混合工序"统合成一个工序，边进行粉碎在粉碎粒子中混合卵磷脂。包含大环内酯类抗菌剂 的微粒的悬浮液的制造可优选如下地进行:在经由各工序而得到的大环内酯类抗菌剂的微 粒中根据需要而加入分散剂并与水混合。例如，包含大环内酯类抗菌剂的微粒的悬浮液也 可以如下地制造:省略"过滤/水洗工序"及"干燥工序"，在经由"粉碎工序"及"卵磷脂混合 工序"而得到的大环内酯类抗菌剂的微粒中根据需要而加入分散剂并与水混合。以下，针对 "粉碎工序"、"卵磷脂的混合工序"、"过滤(分离)/水洗工序"及"干燥工序"进行说明。
[0069] (粉碎工序）
[0070] 在大环内酯类抗菌剂的微粒的制造方法中，用于对大环内酯类抗菌剂进行湿式粉 碎的粉碎装置只要是具有通过机械手段使大环内酯类抗菌剂变得微细的能力的装置则可 以没有特殊限制地使用。作为该粉碎装置，可列举例如:捏合机、双辊磨机、三辊磨机、轮碾 机、哈佛研磨机(Hoover Muller)、叶轮混炼分散机、双螺杆挤压机等通常使用的粉碎装置。
[0071] 在粉碎大环内酯类抗菌剂时，优选将有机化合物、盐及分散稳定剂投入粉碎装置 内，边少量多次地加入多元醇边进行混炼。混炼时的粘度可根据待粉碎的大环内酯类抗菌 剂、盐、多元醇的种类而适当确定。粉碎温度可以考虑到待粉碎的大环内酯类抗菌剂、粉碎 装置等而适当确定。作为粉碎温度，只要是能够减少大环内酯类抗菌剂的熔融或分解的温 度即可，没有特殊限制，优选为-50~50°C、更优选为-20~30°C、最优选为-10~25°C。另外， 粉碎时间可以考虑到待粉碎的大环内酯类抗菌剂、粉碎装置等而适当确定。粉碎时间可以 为例如0.5~50小时左右，优选为1~30小时、更优选为1.5~20小时、最优选为2~10小时。 [0072]相对于作为粉碎对象的大环内酯类抗菌剂1质量份，分散稳定剂的使用量优选为 0.002~10质量份、更优选为0.01~5质量份、进一步优选为0.1~1质量份。另外，所使用的 分散稳定剂的种类可以考虑到作为粉碎对象的有机化合物的种类而适当确定。进一步，分 散稳定剂可以使用1种、也可以将2种以上的不同种类混合使用。
[0073](卵磷脂的混合工序）
[0074]卵磷脂可与粉碎中或粉碎终止后的混炼物混合。需要说明的是，该混炼物中也可 以不含分散稳定剂。混合工序可以如下地进行:在利用粉碎装置进行粉碎之后或在粉碎中 混合卵磷脂，从而在相同的粉碎装置内继续进行混炼。此外，也可以准备混合用的另一装置 (混合装置），将粉碎后的混炼物转移到该混合装置中，并向其中添加卵磷脂来进行混合工 序。相对于作为粉碎对象的大环内酯类抗菌剂1质量份，卵磷脂的使用量优选为0.01~10质 量份、更优选为0.05~2质量份、进一步优选为0.1~1.0质量份。就卵磷脂而言，可以单独添 加，也可以添加多元醇与卵磷脂的混和物。该情况下，就卵磷脂与多元醇的混合比（重量比） 而言，相对于卵磷脂1质量份，多元醇为1~10质量份、更优选为1.5~5质量份、进一步优选 为2~4质量份。
[0075](过滤(分离)/水洗工序）
[0076] 混合卵磷脂之后，可以根据需要进行过滤及水洗从而将盐及多元醇除去。具体而 言，可以通过将混合卵磷脂后的混炼物添加到溶剂中并使用均化器等混合至均一之后进行 过滤及水洗，从而将盐及多元醇除去。作为将该混炼物混合至均一时所使用的溶剂，只要是 容易溶解多元醇及盐、且不易溶解经微粉碎后的大环内酯类抗菌剂的生理学上可接受的溶 剂则没有特殊限定。作为该溶剂，优选水，但也可以使用水以外的溶剂。作为该水以外的溶 剂，包括例如乙酸、甲醇、乙醇等有机溶剂与水的混合液。另外，过滤方法并无特殊限定，可 以利用通常被用于过滤大环内酯类抗菌剂的含有物的公知的方法进行。作为该过滤方法， 包括例如减压过滤法、加压过滤法、超滤膜法。另外，作为与过滤同样地除去盐及多元醇的 方法，包括离心分离法。离心分离的具体方法为:在将混合卵磷脂后的混炼物添加到溶剂中 并使用均化器等混合至均一之后，利用离心分离机使经微粉碎后的有机化合物沉降，从而 除去上清。通过重复该操作，可以除去盐及多元醇。可以通过测定上清液的电导率而求出洗 涤的终点。即，例如在上清液的电导率为lOyS/cm时，则可以预测氯化钠的浓度为约5ppm，因 此只要结合物质的特性而确定终点的电导率即可。
[0077] 经微粉碎后的大环内酯类抗菌剂的粒子通常具有高表面能，因此容易发生凝