专利名称：百合三倍体的培育方法
技术领域：
本发明涉及一种植物品种的培育方法，尤其是百合多倍体的培育方法。
背景技术：
百合是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)植物，百合花大，色彩丰富，花姿优美，特别是东方百合(Oriental hybrids)还具有浓郁的芳香，深受人们的喜爱。百合切花是目前世界上发展最快的花卉之一，市场前景广阔。
多倍体是植物进化的途径之一，多倍体因其巨大性、低孕性、抗逆性及克服远源杂交的不育性等特点，特别是三倍体具有特异的品质和强大的营养生长优势而被园艺育种家所青睐。百合多倍体研究已有报道，研究发现四倍体植株高大，具有更多的开花物质。百合育种技术主要是采用种间杂交和品种间杂交技术来培育新品种。采用秋水仙素处理鳞片和试管苗，只能获得同源四倍体，不能获得三倍体。获得三倍体的常规方法是将四倍体与二倍体杂交，但此方法获得百合三倍体所需的时间至少需要5年，采用较短时间获得百合三倍体的培育技术尚未见报道。
发明内容
本发明的目的旨在克服现有技术的不足，提供一种可在短时间获得百合三倍体的培育技术。
本发明所述的百合三倍体的培育方法由以下步骤组成(一)、按百合常规栽培技术，选周径为14～18cm健壮无病的种球，经2～5℃低温春化处理90-120天，打破休眠，完成春化作用，然后栽培在消毒过的基质中；(二)、在温室中栽培，环境条件为温度20～25℃，光照5～6万Lnx，空气湿度控制在50～60％；或者参照常规栽培技术进行田间栽培管理；
(三)、按以上栽培措施栽培30～40天后，株高达到30～40cm，花芽已肉眼可见时，将0.02～0.2％秋水仙素在温度为20～25℃条件下，采用点滴法处理花芽2～3天，用清水清洗处理部位；(四)对以上处理的植株，按常规栽培技术，处理后约50～60天开花，选择柱头变得异常肥大和镜检花粉粒巨大者，将雄蕊去掉即可获得含2n雌配子的雌蕊；(五)、采正常的花粉与上述雌蕊授粉杂交，然后按常规栽培技术栽培，杂交后45～60天，果实已充分膨大，即可采收；(六)、上述果实采收后，采用常规三倍体胚的离体培养方法，即可获得百合三倍体。
本发明所述培育方法可迅速获得百合三倍体，比常规的四倍体与二倍体杂交产生三倍体所需的时间缩短约四年；而且有很强的营养生长优势，具有不育性和重瓣性；采用本技术快速获得三倍体为培育百合重瓣无花粉(或少花粉)品种奠定了基础。
具体实施例方式
选择周径为14～16cm健壮无病的种球，按百合常规栽培技术，经2～5℃低温春化处理90天，打破休眠，完成春化作用，然后栽培在消毒过的基质中；在环境条件为温度20～25℃，光照5～6万Lnx，空气湿度50～60％的温室中栽培30～40天后，株高达到30～40cm，花芽已肉眼可见时，将0.02～0.2％秋水仙素在温度为20～25℃条件下，采用点滴法处理花芽2～3天，每天上午8～10点，下午2～4点各点滴一次，诱导2n雌配子，再用清水清洗处理部位；对以上植株，加强田间管理，保证良好的生长环境，按常规栽培技术，处理后约50～60天开花，处理过的植株并非100％的发生变异，只有9.52～25.8％的变异率，不同品种差异较大。只有发生变异的植株才会产生2n配子，2n配子的鉴定主要通过形态学观察和显微测量花粉粒大小来判别，柱头变得异常肥大和镜检花粉粒巨大者可作为2n配子诱导成功的初步鉴定指标。选择柱头变得异常肥大和镜检花粉粒巨大者，将雄蕊去掉即可获得含2n雌配子的雌蕊；用正常的花粉与上述雌蕊授粉杂交，套袋挂牌，标记杂交组合和日期，然后按常规栽培技术栽培，杂交后45～60天，果实已充分膨大，即可采收；上述果实采收后，采用以下常规三倍体胚的离体培养方法，即可获得百合三倍体。
三倍体胚的离体培养果实采收后放在5～7℃的低温下处理6～8天，然后按照常规消毒处理；75％酒精处理30秒→0.1％HgCl2(升汞)处理10～12分钟→无菌水洗3次→剥种子或胚接种至Ms+0.5～1.0mg/L 6-BA+1.0mg/LGA3+0.1mg/LNAA培养基上，培养温度22～25℃，光照1500～2000Lux，15～16天后约50％以上的胚萌发成苗，约50％左右的胚陆续萌发，前后需要一年时间。
三倍体百合的鉴定以上培育的百合苗并非都是三倍体，要获得三倍体必须通过染色体鉴定，染色体鉴定采用F-BSG法或醋酸洋红压片法进行染色体制片，显微观察染色体数目，本研究结果中多数植株染色体数为36，为三倍体，即2n＝3x＝36，也存在染色体数目为24的植株为二倍体即2n＝2x＝24。同时还发现少数的四倍体植株即2n＝4x＝48。三倍体染色体的鉴定是该技术获得成功的标志。
三倍体百合的繁育按二倍体百合的常规繁育技术进行，剥取三倍体百合的鳞片培养在Ms+1.0～2.0mg/L6-BA+0.05～0.1mg/L NAA培养基上诱导丛生芽，在上述培养基上反复继代培养，最后将芽转接在Ms+1.0mg/L NAA培养基上诱导生根，附加0.05％的活性碳，生根效果更好。试管苗在2～4℃的低温下处理40～56天，一般处理47天左右较好，然后移至腐叶土∶砂土＝1∶1的基质中，发出新芽后在海拔2000～2400m，土壤PH值为5～6的地方种植。加强肥水管理和病虫害防治，叶枯后采收小籽球。小籽球在2～5℃下冷处理70～90天以打破休眠，然后在上述海拔及土壤条件下进行第二次繁球。即有部分籽球可生产出商品开花种球，即可选育三倍体百合新类型。
权利要求
一种百合三倍体的培育方法，由以下步骤组成(一)、按百合常规栽培技术，选周径为14～18cm健壮无病的种球，经2～5℃低温春化处理90-120天，打破休眠，完成春化作用，然后栽培在消毒过的基质中；
(二)、在温室中栽培，环境条件为温度20～25℃，光照5～6万Lnx，空气湿度控制在500～60％；或者参照常规栽培技术进行田间栽培管理；其特征在于；
(三)、按以上栽培措施栽培30～40天后，株高达到30～40cm，花芽已肉眼可见时，将0.02～0.2％秋水仙素在温度为20～25℃条件下，采用点滴法处理花芽2～3天，用清水清洗处理部位；
(四)对以上处理的植株，按常规栽培技术，处理后约50～60天开花，选择柱头变得异常肥大和镜检花粉粒巨大者，将雄蕊去掉即可获得含2n雌配子的雌蕊；
(五)、采正常的花粉与上述雌蕊授粉杂交，然后按常规栽培技术栽培，杂交后45～60天，果实已充分膨大，即可采收；
(六)、上述果实采收后，采用常规三倍体胚的离体培养方法，即可获得百合三倍体。
全文摘要
本发明涉及一种植物品种的培育方法，尤其是百合多倍体的培育方法。由以下步骤组成一、按百合常规栽培技术，选种球，低温春化处理打破休眠，完成春化作用；二、在温室中栽培，或者参照常规栽培技术进行田间栽培管理；三、按以上栽培措施栽培30～40天后，将0.02～0.2％秋水仙素在温度为20℃～25℃条件下点滴处理；四、对以上处理的植株，按常规栽培技术，处理后约50～60天开花，选择柱头变得异常肥大和镜检花粉粒巨大者，将雄蕊去掉即可获得含2n雌配子的雌蕊；五、采正常的花粉与上述雌蕊授粉杂交，然后按常规栽培技术栽培，杂交后45～60天，果实已充分膨大，即可采收；六、上述果实采收后，采用常规三倍体胚的离体培养方法，即可获得百合三倍体。
文档编号A01H1/02GK1579144SQ0315334
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月11日 优先权日2003年8月11日
发明者郑思乡, 黄静, 张力 申请人:云南雷森科技有限公司