专利名称：一枝蒿的组织培养和快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及药用植物组织培养和快速繁殖领域，具体地说，涉及 菊科蒿属植物一枝蒿的组织培养和快速繁殖方法。
背景技术：
新疆一枝蒿是菊科蒿属植物岩蒿(^rt柳iw'a277pe^2^sL.)的 全草，维吾尔医常用药材，主要分布在天山、阿尔泰山海拔2000-4000 米的沙质高山草甸的松林边开阔地。多年生，高20-50 cm，根茎横生， 黄褐色，通常一至数枝斜上，不分枝，紫红或微绿色；叶互生，侧卵 形；头状花序，俯生，密集于茎的上部，白色；生于林缘、路旁、屋 边及山坡向阳草地，喜凉爽、湿润、土壤疏松的环境；以干燥、完整、 无根、无杂质者最好。气味芳香，味微苦，药用全草，含黄酮甙、树 脂氨基酸、挥发油、生物碱等成分。具有活血、抗过敏、清热解毒、 消食健胃、镇静镇吐等功能。主要用于治疗各种感冒、急慢性扁桃体 炎、荨麻疹、消化不良、胃疼胃胀、跌打红肿、慢性肾炎和钩端螺旋 体病等。其中对感冒和肝炎的疗效更为显著。随着国家对中药材的保 护力度加大，近年来倍受人们的关注。一枝蒿全世界约有400多种，我国约占二分之一，新疆约有70多 种，贮量十分丰富，是新疆哈萨克和蒙古族牧民家庭常备中草药。为 加大一枝蒿的药理和药效研究，使之成为具有地区特色和民族特色的 医药品种，新疆一枝蒿已成为新疆一种重要的中草药及经济创收作 物。因此，为人工种植提供优质的新疆一枝蒿种苗就尤为迫切，为了 避免新疆一枝蒿品种退化问题，加大新疆一枝蒿的品种选育也是当务 之急。发明内容本发明目的在于，提供一种一枝蒿的组织培养和快速繁殖方法， 该方法包括种子的灭菌处理方法、最佳的芽增殖培荞基和诱导芽生根 培养基，通过获得无菌苗、芽的增殖、诱导芽生根和练苗与移栽四个 步骤，在短时间内可以获得大量一枝蒿的种苗，适用于一枝蒿的产业 化栽培，也为一枝蒿的发状根和多倍体研究奠定了基础。发明所述的一枝蒿的组织培养和快速繁殖方法，按下列步骤进行a、 挑取饱满的一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用75% 酒精表面消毒1-3 min， 0. 1%升汞灭菌5-20 min， 15%双氧水处理 10-30 min，无菌水冲洗2-3次；b、 将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基MS中，温度23±1 。C，光照1500-3000 lx，时间16 h/d进行培养；c、 将步骤b中苗龄30-120 d的幼苗切除叶片和根，将茎切成 0. 5-2 cm的茎段接入培养基MS+6-BA 0-3. 0 mg/L + NAA 0. 01-0. 1 mg/L 中，置于温度23土1 °C，光照2000 lx，时间16 h/d进行培养；d、 将步骤c中1.0-2.0 cm的腋芽切下，接入培养基MS+NAAO-0. 1 mg/L中并于置于温度23士1 °C,光照2000 1x，时间16 h/d条件下 诱导生根；e、 将步骤d中的高约10-20cm的幼苗，先打开封口膜于温室中 炼苗2-4d，后洗去苗根部的培养基，移栽至经常规高压灭菌后的蛭 石和营养土的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，注意保湿，10d 后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。步骤c培养时间为30—40天，平均芽增殖率为12。 步骤d诱导生根时间为7-10天。 步骤e中蛭石和营养土的比例为1:1-2:1。 本发明所述一种一枝蒿的组织培养和快速繁殖方法优点在于 本发明采用一枝蒿的茎段为快繁对象，在培养条件温度23土1。C，光照2000 lx，时间16 h/d下，培养基MS+6-BA 0-3. 0 mg/L + NAA 0.01-0. lmg/L上的平均芽增殖率为12 (芽增殖率计算方法)，避免了 用叶片等组织诱导成苗必须要经过的愈伤阶段，保证了周期短，为短 时间获取大量种苗奠定了基础。本发明所采用方法简单实用，对设备 的要求较低，生产出的试管苗遗传稳定性好。
图1为本发明的无菌苗2为本发明诱导腋芽生成'的茎段3为本发明继代30 d后的茎段4为本发明继代一次，约IO d后的苗5为本发明诱导生根12 d时的效果6为本发明移栽存活后的苗图具体实施方式
实施例1:a、 挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用 75%酒精表面消毒3 min， 0. 1%升汞灭菌10 min， 15%双氧水处理 20 min，无菌水冲洗2次；b、 将步骤a中处理后的种子接入固体培养基MS中，温度23土1 。C，光照2000 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄40d的幼苗切除叶片和根，将茎切成1.5cm 的茎段接入固体培养基MS+NAA 0.05 mg/L中，置于温度23士1 °C， 光照2000 1x，时间16h/d进行培养，时间30d，平均芽增殖率12;d、 将步骤c中1 cm的腋芽切下，接入固体培养基MS中并于置 于温度23士1 。C，光照2000 lx，时间16 h/d条件下诱导生根，时 间7 d;e、 将步骤d中的高10 cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗 2 d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和营 养土l:l的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一次，注意保湿，10 d后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。 实施例2:a、 挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用 75%酒精表面消毒1 min， 0. 1%升汞灭菌5 min， 15%双氧水处理 10 min，无菌水冲洗2次；b、 将步骤a中处理后的种子接入固体培养基MS中，温度23±1 °C，光照1500 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄30d的幼苗切除叶片和根，将茎切成0.5cm 的茎段接入固体培养基MS+6-BA 0. 5 mg/L + NAA 0. 05 mg/L中，置 于温度23士1 °C，光照2000 1x,时间16h/d进行培养，时间35天， 平均芽增殖率12;d、 将步骤c中l cm的腋芽切下，接入固体培养基MS+NAA 0.01 mg/L中并于置于温度23士1 °C，光照2000 1x，时间16h/d条件下 诱导生根，时间8 d;e、 将步骤d中的高约10 cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼 苗3d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和 营养土1.5:1的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一 次，注意保湿，10 d后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。实施例3:a、 挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用 750%酒精表面消毒2 min， 0. 1%升汞灭菌15 min， 15%双氧水处理 15 min，无菌水冲洗2次；b、 将步骤a中处理后的种子接入固体培养基MS中，温度23土1 °C，光照2000 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄60d的幼苗切除叶片和根，将茎切成1.5cm 的茎段接入固体培养基MS+6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.05 mg/L中，置 于温度23土1 °C，光照2000 1x，时间16h/d进行培养，时间40天， 平均芽增殖率12;d、 将步骤c中1. 2 cm的腋芽切下，接入固体培养基MS+NAA 0. 05mg/L中并于置于温度23土1 。C，光照2000 1x，时间16 h/d条件下 诱导生根，时间10 d;e、将步骤d中的高约15cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗 2 d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和营 养土2:1的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一次， 注意保湿，10 d后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。实施例4:a、 挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用 75%酒精表面消毒3 min， 0. 1%升汞灭菌20 min， 15%双氧水处理 25 min，无菌水冲洗3次；b、 将步骤a中处理后的种子固体接入培养基MS中，温度23士1 。C，光照3000 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄80d的幼苗切除叶片和根，将茎切成1.5cm 的茎段接入固体培养基MS+6-BA 1.5 mg/L + NAA 0.05 mg/L中，置 于温度23士1 。C，光照2000 1x，时间16h/d进行培养，时间38天， 平均芽增殖率12;d、 将步骤c中1. 5 cm的腋芽切下，接入固体培养基MS+NAA 0. 05 mg/L中并于置于温度23土1 。C，光照2000 1x，时间16 h/d条件下 诱导生根，时间9 d;e、 将步骤d中的高约20 cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼 苗4d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和 营养土 1.8:1的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一 次，注意保湿，10 d后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。实施例5:a、 挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用 75%酒精表面消毒1 min， 0. 1%升汞灭菌5 min， 15%双氧水处理 15 min，无菌水冲洗3次；b、 将步骤a中处理后的种子接入固体培养基MS中，温度23±1 °C，光照1500 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄120 d的幼苗切除叶片和根，将茎切成2. 0 cm 的茎段接入固体培养基MS+6-BA 3.0mg/L + NAA 0.1 mg/L中，置于 温度23士1 °C，光照3000 lx，时间16 h/d进行培养，时间40天，平均芽增殖率12;;d、 将步骤c中1. 5cm的腋芽切下，接入固体培养基MS中并于 置于温度23士1 °C，光照2000 lx，时间16 h/d条件下诱导生根， 时间7天；e、 将步骤d中的高约10 cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼 苗3d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和 营养土 1:1的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一次， 注意保湿，IO天后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。a、 挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用 75%酒精表面消毒2 min， 0. 1%升汞灭菌18 min， 15%双氧水处理 20 min，无菌水冲洗3次；b、 将步骤a中处理后的种子固体接入培养基MS中，温度23士1 °C，光照2000 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄90d的幼苗切除叶片和根，将茎切成L5cm 的茎段接入固体培养基MS + NAA 0.1 mg/L中，置于温度23土1 。C， 光照2000 lx，时间16 h/d进行培养，时间36 d，平均芽增殖率12;d、 将步骤c中1 cm的腋芽切下，接入固体培养基MS+NAAO. 1 mg/L 中并于置于温度23士1 °C，光照2000 lx，时间16 h/d条件下诱导 生根，时间8 d;e、 将步骤d中的高18 cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗 4 d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和营 养土2:1的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一次， 注意保湿，10d后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。实施例7:a、挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用75%酒精表面消毒3 min， 0. 1 %升荥灭菌20 min， 15%双氧水处理 25 min，无菌水冲洗3次；b、 将步骤a中处理后的种子固体接入培养基MS中，温度23士1 °C，光照2500 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄30d的幼苗切除叶片和根，将茎切成2.0cm 的茎段接入固体培养基MS+6-BA 0. 5 mg/L + NAA 0. 1 mg/L中，置于 温度23土1 。C，光照2000 lx，时间16 h/d进行培养，时间32 d， 平均芽增殖率12;d、 将步骤c中1 cm的腋芽切下，接入固体培养基MS+NAA 0.05 mg/L中并于置于温度23土1 °C,光照2000 1x,时间16 h/d条件下 诱导生根，时间9 d;e、 将步骤d中的高约20 cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼 苗4d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和 营养土l:l的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一次， 保湿，10 d后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。实施例8:a、 挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用 75%酒精表面消毒2 min， 0. 1%升汞灭菌15 min， 15%双氧水处理 30 min，无菌水冲洗3次；b、 将步骤a中处理后的种子接入固体培养基MS中，温度23士1 °C，光照1500 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄40d的幼苗切除叶片和根，将茎切成0.5cm 的茎段接入固体培养基MS+6-BA 2. 5 mg/L + NAA 0. 1 mg/L中，置于 温度23士1 °C，光照2000 lx，时间16 h/d进行培养，时间40 d， 平均芽增殖率12;d、 将步骤c中2 cm的腋芽切下，接入固体培养基MS+NAA 0. 1 mg/L 中并于置于温度23士1 。C，光照2000 lx，时间16 h/d条件下诱导 生根，时间10 d;e、 将步骤d中的高约10 cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗3 d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和营养土l:l的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一次， 保湿，10 d后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。 实施例9:a、 挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用 75%酒精表面消毒2 min， 0. 1%升汞灭菌10 min， 15%双氧水处理 25 min，无菌水冲洗3次；b、 将步骤a中处理后的种子接入固体培养基MS中，温度23士1 。C，光照3000 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄50d的幼苗切除叶片和根，将茎切成L0cm 的茎段接入固体培养基MS+6-BA 1. 5mg/L + NAA 0. 1 mg/L中，置于 温度23士1 。C，光照2000 lx，时间16 h/d进行培养，时间30 d， 平均芽增殖率12;d、 将步骤c中1. 5 cm的腋芽切下，接入固体培养基MS+NAA 0. 05 mg/L中并于置于温度23士1 。C，光照2000 1x，时间16 h/d条件下 诱导生根，时间10 d;e、 将步骤d中的高约12 cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼 苗2d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和 营养土1.5:1的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一 次，注意保湿，10 d后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。实施例10:a、 挑取饱满的新疆一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用 750%酒精表面消毒1 min， 0. 1%升汞灭菌5 min， 15%双氧水处理 12 min，无菌水冲洗2次；b、 将步骤a中处理后的种子接入固体培养基MS中，温度23士1 °C，光照2000 lx，时间16 h/d进行萌发培养；c、 将步骤b中苗龄110 d的幼苗切除叶片和根，将茎切成2. 0 cm 的茎段接入固体培养基MS+6-BA 2.0mg/L + NAA 0.1 mg/L中，置于 温度23士1 °C，光照2000 lx，时间16 h/d进行培养，时间39 d，平均芽增殖率12;d、 将步骤c中1. 8 cm的腋芽切下，接入固体培养基MS+NAA 0. 1 mg/L中并于置于温度23士1 。C，光照2000 1x，时间16 h/d条件下 诱导生根，时间7 d;e、 将步骤d中的高约14 cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼 苗4d，后洗去苗根部的培养基，移载至经常规高压灭菌后的蛭石和 营养土1.2:1的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，上下午各一 次，保湿，10 d后抽出嫩稍，存活率为75%-80%。
权利要求
1、一种一枝蒿的组织培养和快速繁殖方法，其特征在于按下列步骤进行a、挑取饱满的一枝蒿种子，然后将种子在超净工作台上用75％酒精表面消毒1-3min，0.1％升汞灭菌5-20min，15％双氧水处理10-30min，无菌水冲洗2-3次；b、将步骤a中处理后的种子接入培养基MS中，温度23±1℃，光照1500-3000lx，时间16h/d进行萌发培养；c、将步骤b中苗龄30-120d的幼苗切除叶片和根，将茎切成0.5-2cm的茎段接入培养基MS+6-BA 0-3.0mg/L+NAA 0.01-0.1mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；d、将步骤c中1.0-2.0cm的腋芽切下，接入培养基MS+NAA0-0.1mg/L中并于置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下诱导生根；e、将步骤d中的高约10-20cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗2-4d，后洗去苗根部的培养基，移栽至经常规高压灭菌后的蛭石和营养土的混合介质中，每天敞开薄膜，通风2次，保湿，10d后抽出嫩稍，存活率为75％-80％。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤c培养时间为 30-40 d，平均芽增殖率为12。
3、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤d诱导生根时 间为7-10 d。
4、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤e中蛭石和营 养土的比例为1:1-2:1。
全文摘要
本发明涉及一种菊科蒿属植物一枝蒿的组织培养和快速繁殖方法，该方法是由种子的消毒处理、最佳的芽增殖培养基和诱导芽生根培养基，通过获得无菌苗、芽的增殖、诱导芽生根和炼苗与移栽四个步骤，在短时间里获得大量一枝蒿的种苗。本发明具有方法简单，繁殖速率快，稳定性强，培育周期短，产率高的优点，在实际生产应用中具有较强的可行性，适用于一枝蒿的产业化栽培，也为一枝蒿的发状根和多倍体研究奠定了基础。
文档编号A01H4/00GK101238796SQ200810072839
公开日2008年8月13日 申请日期2008年3月20日 优先权日2008年3月20日
发明者敏 刘, 努尔波拉提, 唐晓义, 康喜亮, 琴 徐, 王晓军, 胡石开, 郝秀英 申请人:中国科学院新疆理化技术研究所