专利名称：：一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法
技术领域：
：本发明涉及一种活性组分的提取方法。
背景技术：
：曰本花禾白[C7K附aecypan's/&(/^ra(Sieb.EtZucc.)Endl.]原产曰本，在曰本分布于北纬30。40。，具有适应性较广、抗性强、生长较快、病虫害少和繁殖容易等优良性状，可广泛应用于生产机械浆和造纸、建材、工艺品用材、家具、香料及食品添加剂等领域，文献资料表明日本花柏的心材提取物具有防腐性能，我国1936年最先引种日本花柏，主要研究集中在生长发育、繁殖、生长规律、晚材率和木材密度等性状的变异等方面。目前，采用正己烷或二氯甲烷从日本花柏中提取抑菌活性组分，但这些提取方法存在提取物中抑菌物质含量低(仅为22.369%35.235%)，以及不适用于工业化生产的问题。
发明内容本发明为了解决现有从日本花柏中提取抑菌活性组分的方法，存在提取物中抑菌物质含量低，以及不适用于工业化生产的问题，而提供一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法。曰本花柏中抑菌活性组分的提取方法按以下步骤实现一、将日本花柏心材粉碎后过2mm的筛子，气干1周后用滤纸包裹放入索氏提取器，然后置于恒温水浴中用正己垸提取溶剂连续回流提取24h，再用旋转薄膜蒸发器蒸除正己烷提取溶剂，得到浸膏状提取物；二、采用湿法装层析柱并对浸膏状提取物进行分离，经气相色谱质谱(GC/MS)联机检测，选择7-甲基-4-亚甲基-l-(l-异丙基)-(1.01，43.01,83.00-1,2，3,4,43，5,6，83-八氢化萘含量最高的分离组分收集，然后利用旋转薄膜蒸发器蒸去除洗脱剂，55i:下真空干燥分离组分至恒重，即得日本花柏中抑菌活性组分；其中步骤一中恒温水浴温度为7080°C;步骤二中采用湿法装层析柱并对浸膏状提取物进行分离的步骤为将层析柱洗净、干燥；先将洗脱剂装入柱内1/3高度，然后将事先用洗脱剂浸泡后气泡除尽的吸附剂转移加入柱内，同时将层析柱下端活塞打开，使洗脱剂流出，带动吸附剂缓慢沉于柱的下端；待加完吸附剂后，继续使洗脱剂流出至吸附剂不再沉降，此时在吸附剂上面加少许棉花，将多余洗脱剂放出至液面与层析柱上端保持lcm距离；移入浸膏状提取物于层析柱，将洗脱剂放在层析柱上端的分液漏斗中，打开活塞连续不断地滴加在层析柱中，同时打开层析柱下端活塞，对浸膏状提取物进行分离，洗脱流速控制在0.02ml/s;步骤二中采用湿法装层析柱所用洗脱剂为正己垸和乙酸乙酯按体积比9:1的混合溶剂；步骤二中采用湿法装层析柱所用吸附剂为60100目的层析用硅胶；步骤二中采用湿法装层析柱中浸膏状提取物与吸附剂按质量比1:20200投加。本发明日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，利用柱层析优化分离条件，以及采用正己垸和乙酸乙酯的混合溶剂为洗脱剂，提高了分离效率，最终获得一组纯度较高的抑菌组分；本发明对设备条件要求低，易于实施，步骤简洁，生产周期短，生产成本低，生产日程可以灵活安排，适合工业化生产，提取物组分中7-甲基-4-亚甲基-l-(l-异丙基)-(l.a，4a.a，8a.a)-l,2，3,4,4a,5,6,8a-八氢化萘的含量高达73.15%，该组分具有抑菌效果；本发明日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，为拓宽日本花柏的全面利用提供了科学依据。图1是本发明中日本花柏抑菌活性组分的总离子流色谱图，其中1号峰为7國甲基-4-亚甲基-l-(l-异丙基)-(l.a,4a.p，8a.a)-l,2,3，4，4a,5,6，8a-八氢化萘，2号峰为a-杜松醇，3号峰为可巴烯，4号峰为7-甲基-4-亚甲基-l-(l-异丙基)-(l.ot，4a.a，8a.a)-l，2，3，4,4a，5,6，8a-八氢化萘，5号峰为ot-白菖考烯。具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一本实施方式日本花柏中抑菌活性组分的提取方法按以下步骤实现一、将日本花柏心材粉碎后过2mm的筛子，气干l周后用滤纸包裹放入索氏提取器，然后置于恒温水浴中用正己烷提取溶剂连续回流提取24h，再用旋转薄膜蒸发器蒸除正己垸提取溶剂，得到浸膏状提取物；二、采用湿法装层析柱并对浸膏状提取物进行分离，经气相色谱质谱联机检测，选择7画甲基-4-亚甲基-l-(l-异丙基Hl.a,4a.a,8a.a)-l，2,3,4，4a,5,6，8a-八氢化萘含量最高的分离组分收集，然后利用旋转薄膜蒸发器蒸除洗脱剂，55'C下真空干燥分离组分至恒重，即得日本花柏中抑菌活性组分；其中步骤一中恒温水浴温度为7080°C;步骤二中采用湿法装层析柱并对浸膏状提取物进行分离的步骤为将层析柱洗净、干燥；先将洗脱剂装入柱内1/3高度，然后将事先用洗脱剂浸泡后气泡除尽的吸附剂转移加入柱内，同时将层析柱下端活塞打开，使洗脱剂流出，带动吸附剂缓慢沉于柱的下端；待加完吸附剂后，继续使洗脱剂流出至吸附剂不再沉降，此时在吸附剂上面加少许棉花，将多余洗脱剂放出至液面与层析柱上端保持lcm距离；移入浸膏状提取物于层析柱，将洗脱剂放在层析柱上端的分液漏斗中，打开活塞连续不断地滴加在层析柱中，同时打开层析柱下端活塞，对浸膏状提取物进行分离，洗脱流速控制在0.02ml/s;步骤二中采用湿法装层析柱所用洗脱剂为正己垸和乙酸乙酯按体积比9:1的混合溶剂；步骤二中采用湿法装层析柱所用吸附剂为60i00目的层析用硅胶；步骤二中采用湿法装层析柱中浸膏状提取物与吸附剂按质量比1:20200投加。本实施方式步骤一中所得浸膏状提取物，经气相色谱质谱联机检测，其主要成分为7-甲基-4-亚甲基-1-(1-异丙基)-(1.01,4&.01,8&.00-1,2,3,4，4&,5，6,8&-八氢化萘，4，7-二甲基-l-(l-异丙基)-l,2,4a，5，6,8a-六氢化萘和oc-杜松醇；其相对百分含量分别为22.40%、13.47%和12.06%。本实施方式从加浸膏状提取物且洗脱剂流出后开始计时，收集1号样用时30min，然后依次换接2号样到6号样，全部洗脱后共收集6个分离组分；其中2号样到6号样收集时间间隔均为20min。本实施方式中收集5070min流出的组分(3号样)经气相色谱质谱(GC/MS)联机检测，组分中7-甲基-4-亚甲基异丙基Hl.oc,4a.oc，8a.oc)-l,2,3,4，4a,5，6，8a-八氢化萘的含量最高，且由于萘类化合物具有抑菌作用，因此可知3号样中日本花柏抑菌活性组分最高，结合图l和表l所示，其相对百分含量为73.2%;检测条件DB-17MS毛细管柱，柱长30m，内径0.251111，膜厚0.25^1111，FID检测器；初始温度60。C，停留4min后，升温速率2(TC/min，至160°C，以5°C/min的升温速率升温到180°C，保持5min，以5X7min的升温速率升温到22(TC，保持2min，进样口温度26(TC，进样量l.O^L,分流比1:20，氦气载气，流速lmL/min;质谱连接口温度280°C，离子源温度230°C，轰击电压70eV，扫描检测范围15260原子质量。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>本实施方式中3号样经抑菌测试表明分离组分对白腐菌[黄孢原毛平革菌(尸/z鍵rac/7"欲]具有较好的抑菌效果；其中3号样对白腐菌的抑菌性能表现为7天抑菌圈直径达42.2mm，14天抑菌圈直径达40.3mm。具体实施方式二本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中恒温水浴温度为75X:。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式二不同的是步骤二中吸附剂为80目的层析用硅胶。其它步骤及参数与具体实施方式二相同。具体实施方式四本实施方式与具体实施方式二不同的是步骤二中吸附剂为90目的层析用硅胶。其它步骤及参数与具体实施方式二相同。具体实施方式五本实施方式与具体实施方式三或四不同的是步骤二中浸膏状提取物与吸附剂按质量比1:50投加。其它步骤及参数与具体实施方式三或四相同。具体实施方式六本实施方式与具体实施方式五不同的是步骤二中浸膏状提取物与吸附剂按质量比i:ioo投加。其它步骤及参数与具体实施方式五相同。具体实施方式七本实施方式与具体实施方式五不同的是步骤二中浸膏状提取物与吸附剂按质量比i:150投加。其它步骤及参数与具体实施方式五相同。权利要求1、一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，其特征在于日本花柏中抑菌活性组分的提取方法按以下步骤实现一、将日本花柏心材粉碎后过2mm的筛子，气干1周后用滤纸包裹放入索氏提取器，然后置于恒温水浴中用正己烷提取溶剂连续回流提取24h，再用旋转薄膜蒸发器蒸除正己烷提取溶剂，得到浸膏状提取物；二、采用湿法装层析柱并对浸膏状提取物进行分离，经气相色谱质谱联机检测，选择7-甲基-4-亚甲基-1-(1-异丙基)-(1.α，4a.α，8a.α)-1，2，3，4，4a，5，6，8a-八氢化萘含量最高的分离组分收集，然后利用旋转薄膜蒸发器蒸去除洗脱剂，55℃下真空干燥分离组分至恒重，即得日本花柏中抑菌活性组分；其中步骤一中恒温水浴温度为70～80℃；步骤二中采用湿法装层析柱并对浸膏状提取物进行分离的步骤为将层析柱洗净、干燥；先将洗脱剂装入柱内1/3高度，然后将事先用洗脱剂浸泡后气泡除尽的吸附剂转移加入柱内，同时将层析柱下端活塞打开，使洗脱剂流出，带动吸附剂缓慢沉于柱的下端；待加完吸附剂后，继续使洗脱剂流出至吸附剂不再沉降，此时在吸附剂上面加少许棉花，将多余洗脱剂放出至液面与层析柱上端保持1cm距离；移入浸膏状提取物于层析柱，将洗脱剂放在层析柱上端的分液漏斗中，打开活塞连续不断地滴加在层析柱中，同时打开层析柱下端活塞，对浸膏状提取物进行分离，洗脱流速控制在0.02ml/s；步骤二中采用湿法装层析柱所用洗脱剂为正己烷和乙酸乙酯按体积比9∶1的混合溶剂；步骤二中采用湿法装层析柱所用吸附剂为60～100目的层析用硅胶；步骤二中采用湿法装层析柱中浸膏状提取物与吸附剂按质量比1∶20～200投加。2、根据权利要求l所述的一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，其特征在于步骤一中恒温水浴温度为75°C。3、根据权利要求2所述的一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，其特征在于步骤二中吸附剂为80目的层析用硅胶。4、根据权利要求2所述的一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，其特征在于步骤二中吸附剂为90目的层析用硅胶。5、根据权利要求3或4所述的一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，其特征在于步骤二中浸膏状提取物与吸附剂按质量比1:50投加。6、根据权利要求5所述的一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，其特征在于步骤二中浸膏状提取物与吸附剂按质量比i:ioo投加。7、根据权利要求5所述的一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，其特征在于步骤二中浸膏状提取物与吸附剂按质量比i:150投加。全文摘要一种日本花柏中抑菌活性组分的提取方法，它涉及一种活性组分的提取方法。本发明解决了现有从日本花柏中提取抑菌活性组分的方法，存在提取物中抑菌物质含量低，以及不适用于工业化生产的问题。方法一、将日本花柏心材粉碎后过筛，气干后用滤纸包裹放入索氏提取器，然后置于恒温水浴中用正己烷提取溶剂连续回流提取，再用旋转薄膜蒸发器蒸除正己烷提取溶剂，得到浸膏状提取物；二、采用湿法装层析柱并对浸膏状提取物进行分离，即为日本花柏中抑菌活性组分。本发明对设备条件要求低，易于实施，步骤简洁，生产周期短，生产成本低，生产日程可以灵活安排，适合工业化生产，提取的物质含量高达73.15％，具有抑菌效果。文档编号A01P3/00GK101575258SQ20091007226公开日2009年11月11日申请日期2009年6月12日优先权日2009年6月12日发明者刘志明,徐有明,晶牛,王向明,王海英,蒋乃翔,许士玉,魏晋虎申请人:东北林业大学