专利名称：酒竹的组培快繁技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体涉及植物的组织培养和快速繁殖技术。
背景技术：
酒竹(Oxytenanthera braunii)是竹亚科锐药属竹种，原产非洲东部中高山地区 (Liese, 1992)。秆丛生，高6 10m，直径4 9cm，地下茎为复轴型，不具鞭；秆圆筒形，着 枝一侧不具纵沟；节间长25 45cm，秆每节分枝5 9枚或更多枚，具次级枝；秆同一节上 具明显区别于其他分枝的主枝1 2枚。酒竹在新竹(笋的高生长)形成过程中，新竹杆 在砍梢后的前几天就开始在砍梢伤口分泌出酒精含量较高的伤流液，作为重要的生活和经 济竹种，这种自然分泌和发酵的液体(未有任何人工添加成分)，其口感甜酸可口，分泌时 间可持续一个月左右(28d)，每棵竹子合计可产酒30kg，按每亩每年50棵竹子用于产酒计 算，亩产酒量可达1500kg/a，这种竹子分泌的天然酒，经2-3d的自然发酵，酒精度可达二十 度，是一种上等饮料，应用前景十分广阔。虽然原产地农民把酒竹当作一种固定生活收入而进行劳作，但是，由于该竹种分 布在非洲东部山区，分布地原始、偏僻，交通不便利，且分布面积小，生产、经营几乎都处于 原始状态，因此，世界上目前对酒竹研究、开发和利用尚处于起始阶段。同时，由于人们多年 滥挖乱采及其生殖机制和微生境需求的某些限制，酒竹适生的分布地区和数量不多，难以 满足工业领域的需要。因此，为了保护酒竹种质资源，同时满足对其日益增大的需求量，通 过现代生物技术，用植物组织培养方法来进行无性繁殖，是大量繁殖酒竹的最可行的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种酒竹的组培快速繁殖方法。方法的步骤如下1)外植体的选取与处理选1-2年生的幼枝，将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选 完整的、刚要萌发新芽的竹节或顶芽作为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗 30分钟后，置于75%酒精中处理30秒，然后在经0. 的升汞(Hgcl)消毒8分钟后用无菌 水冲洗5次，切去外植体变色的部分，接种于培养基中。2)诱导培养选择0. 5MS+4BA+NAA为诱导培养基，将所选取的芽接种于上述培养基中。3)增殖培养诱导培养7天后，将生长于诱导培养基上外植体转接于 0. 5MS+4BA+KT 上进行培养；7 天后转入 0. 5MS+2NAA+1. 5IBA 或 0. 5MS+2NAA+3IBA+3BA 中继 续培养7天。4)生根培养选择0. 5MS+IBA为生根培养基；5)移栽将已生根的植株取出，移栽到珍珠岩泥炭土(1 1)混合的基质上。本发明的优点(1)酒竹的快繁和生产可以在人为控制条件下进行，不受季节、气 候条件与土壤等因素的制约，可排除病虫害的侵袭和农药残留量的困扰，严格控制酒竹的质量；(2)个体差异小，生产周期短，设备简单，占地面积少，能节省人力、物力等，便于工厂 化生产；(3)利用组织培养过程中出现的芽变或人工诱变，或进行脱毒，培育新品种，提高 酒竹品质；(4)保存酒竹种质资源；(5)通过组织培养酒竹快速获得新生植株，以减少对自 然资源的破坏。该技术解决了酒竹快速繁殖及其稳定生根的重要技术环节，达到了繁殖系 数高速度快，技术稳定，实现工业化生产的目的。具体实现方式酒竹的组培快繁技术，包括外植体的选取与处理，诱导培养，增殖培养，生根 培养，移栽等步骤，具体地，选取完整的、刚要萌发新芽的竹节或顶芽为培养材料，选择 0. 5MS+4BA+NAA为诱导培养基，选择1/2MS+IBA为生根培养基。诱导培养，在0. 5MS+4BA+NAA的培养基中，培养7天后有新芽发出，无愈伤组织，把 新芽接种于不同的诱导培养基(1)0. 5MS+4BA+KT(2)0. 5MS+2NAA+1. 5IBA(3)0. 5MS+2NAA+3I BA+3BA。半个月后结果如下三种培养基中均有芽冒出；(1)植株叶片普遍偏黄，芽的生长速 度缓慢；(2)、(3)植株健壮，色绿；(2)中叶柄基部膨大，有数个颗粒状突起；(3)中叶柄基 部有2-5个小芽，小芽淡黄或绿色。由此可见，诱导培养以(2)、(3)为宜。采用上述措施的本发明，用于酒竹丛生芽诱导和生长，壮苗生根两个关键阶段的 组织培养，可适用于酒竹的组培快繁。使酒竹这一濒危植物实现工厂化快速育苗，更有效 地保护和开发利用成为可能，在使用中将酒竹的芽接种在本发明上，30-45天大部分可诱导 形成丛生芽，一般诱导率可达75-90 %。在此基础上继续继代培养，丛生芽可大量增殖，25 天继代一次的增殖倍数平均为3. 3。把继代后的丛生芽转移到本发明提供的生根培养基中 25-45天可大量发根，出根率在80%左右，45天可出瓶炼苗。上述技术中，可优选完整的芽为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗 30分钟后，置于75%酒精中处理30秒，然后在经0. 的升汞(HgCl)消毒8分钟后用无菌 水冲洗，切去外植体变色的部分，接种于培养基中。上述技术中诱导、增殖和生根步骤的PH值均为5. 8，培养温度25°C，每天光照16 小时，光照强度2300LX。本发明的优异性体现在提供了酒竹的植物组织培养和快速繁殖技术，摸索出了 快速繁殖及其稳定生根等重要环节的关键性技术，一个外植体一年就可克隆繁殖出数万株 后代，为该植物的商品化生产提供了一套切实可行的生产技术路线，实现了酒竹的工业化 生产目的。实施例1选2年生的幼枝，将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选完整的、刚要萌发新芽作为 培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗30分钟后，置于75%酒精中处理30秒，然 后在经0. 的升汞(Hgcl)消毒8分钟后用无菌水冲洗5次，切去外植体变色的部分，接种 于培养基中。选择0.5MS+4BA+NAA为诱导培养基，将所选取的芽接种于上述培养基中。诱 导培养7天后，将生长于诱导培养基上外植体转接于0. 5MS+4BA+KT上进行培养；再过7天后转入0. 5MS+2NAA+1. 5IBA中，继续培养7天。再转入0. 5MS+IBA培养基 中，进行生根培养，在3-4星期内可得到新根。然后，将已生根的植株取出，移栽到珍珠岩 泥炭土(1 1)混合的基质上，进行育苗。
权利要求
一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于方法的步骤如下1)外植体的选取与处理选1 2年生的幼枝，将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选完整、刚要萌发新芽的竹节或顶芽作为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗30分钟后，置于75％酒精中处理30秒，然后再经0.1％的升汞(Hgcl)消毒8分钟后用无菌水冲洗5次，切去外植体变色部分，接种于培养基中。2)诱导培养选择0.5MS+4BA+NAA为诱导培养基，将所选取的芽接种于上述培养基中。3)增殖培养诱导培养7天后，将生长于诱导培养基上外植体转接于0.5MS+4BA+KT上进行继代培养；7天后转入0.5MS+2NAA+1.5IBA或0.5MS+2NAA+3IBA+3BA中继续培养7天。4)生根培养选择0.5MS+IBA为生根培养基；5)移栽将已生根的植株取出，移栽到珍珠岩∶泥炭土(1∶1)混合的基质上。
2.根据权利要求1所述的一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于所说的选择 0. 5MS+4BA+NAA为诱导培养基，培养7天后有新芽发出。将所选取的芽接种于上述培养基 中诱导、增殖、生根步骤培养基的PH值均为5.8，培养温度251 士 1，每天光照时间16时， 光照强度2300LX。
3.根据权利要求1所述的一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于所说的将生长于 诱导培养基上外植体转接于0. 5MS+4BA+KT上进行培养7天后新芽数量增加为2_3个一周 后，转入0. 5MS+2NAA+1. 5IBA或0. 5MS+2NAA+3IBA+3BA中继续培养7天，新芽数目进一步增 加，可见外植体上有2-5个新芽出现，随培养时间增加，芽的数目增加。将长有数个芽的外 植体在无菌条件下取出，按芽的个数用解剖刀分开，分置于上述连续培养基不同的培养容 器中培养，在10-20天内，各培养容器内的芽可再生出一至数个新芽，达到了增殖的目的。
4.根据权利要求1所述的一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于所说的选择 0. 5MS+IBA为生根培养基，并在培养基中加入0. 5%的活性炭将连续培养中的植株转入 生根培养基中。转入后在黑暗条件下培养1-2天后转到光下培养10-15天可诱导形成根。 30-45天可形成发达的根系。
5.根据权利要求1所述的一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于所说的将已生根 的植株取出，移栽到珍珠岩泥炭土(1 1)混合的基质上将已经生根的植株置于自然环 境下4-5天后，打开瓶盖，置放4-5天后取出，用清水洗净根部的琼脂。栽培于珍珠岩泥 炭土(1 1)混合的基质中。一个月后可栽培于大田。
全文摘要
本发明提供一种酒竹的组织培养和快速繁殖技术。包括外植体的选取与处理，诱导培养，增殖培养，生根培养，移栽等步骤。本发明以MS培养基为基础，加入了辅助剂活性炭、6-苄基腺嘌呤、6-糠氨基嘌呤、萘乙酸，用于酒竹丛生芽诱导生长，壮苗生根两个关键阶段的组织培养。该技术解决了酒竹快速繁殖及其稳定生根的重要技术环节，达到了繁殖系数高、技术稳定、可实现工业化生产的目的。
文档编号A01H4/00GK101933457SQ20091009996
公开日2011年1月5日 申请日期2009年6月29日 优先权日2009年6月29日
发明者吴良如, 李伟成, 王树东, 钟哲科 申请人:国家林业局竹子研究开发中心