曼氏无针乌贼内壳茜素红s标记方法

专利名称：曼氏无针乌贼内壳茜素红s标记方法
技术领域：
本发明涉及一种水生动物的标记方法，特别涉及曼氏无针乌贼内壳茜素红s标记
方法。
背景技术：
曼氏无针乌贼曾是我国渔场的四大渔业之一，对温度的适应性较强，在我国沿海 分布很广，是一种经济价值很高的传统渔业种类。由于过度捕捞和生态恶化，自20世纪70 年代以来，先后出现了衰退现象。上世纪八十年代有报道李星颉等对曼氏无针乌贼资源及 增殖的初步研究，而国外有对商乌贼的生物学及养殖方面的报道。至今，有关科研机构已初 步解决了曼氏无针乌贼生殖调控、人工繁育、苗种培育与养成技术，为曼氏无针乌贼资源养 护提供了重要的基础。为了在人工繁育后对自然种群进行养护，需要一种效果稳定、操作简 单的标记方法，以利于在理论上对放流效果进行评估，进而优化放流增殖方案。目前头足类 的放流工作的特点只注重向海区放流，而忽视放流效果，跟踪示踪等技术的研究却相对滞 后。目前国内外还没有关于曼氏无针乌贼标记技术的公开报道。现有技术如中国发明专利 《一种标志金乌贼的方法》，专利号ZL200610070448. 6，公开了一种标志金乌贼的方法，其特 征是将孵化后的金乌贼暂养5-20天，将染色剂溶于淡水，向盛有乌贼和海水的容器中放入 制得的染色剂的水溶液，使上述海水中染色剂的浓度为60-80卯m，浸泡染色20-28小时。所 述的染色剂为茜素络合指示剂。本发明的方法操作简便，鉴别方法简单，无毒无损伤，并可 一次性进行大量染色处理且不易退色，是一种标志金乌贼的好方法。然而，其标记效果不明 显，并且标记浮色会短期残留于体表，将经过该方法标记的乌贼放流到自然海域影响其本 身的保护色，不利于其自然环境中的存活，并且该方法通过浸染金乌贼的针部而对其内壳 尾端进行染色标记，这种方法对于无针乌贼属的个体将不再适用。

发明内容
本发明的目的是提供曼氏无针乌贼内壳茜素红S标记方法，以此解决曼氏无针乌 贼放流标记的技术问题，并且该方法简单实用、安全快速，并且不应激，标记物的色彩不残 留于体表，对曼氏无针乌贼的本身保护色影响相对较小，有利于自然放流环境下的存活，无 需暂养，可以直接放流。
本发明曼氏无针乌贼内壳茜素红S标记方法，其包括如下步骤①麻醉步骤选取待标记的曼氏无针乌贼放入浓度为40卯m至70ppm的MS-222麻
醉剂溶液中0. 5分钟至4分钟； ②标记步骤用注射器将染色液注入经步骤①处理的曼氏无针乌贼的内壳。
为了优化上述技术方案，还采取的步骤②的染色液为茜素红S的水溶液，浓度为 50ppm至350ppm;茜素红S注射的量控制在注射时布满内壳；注射器的针头与曼氏无针乌 贼内壳表面呈锐角插入；注射器在使用前在90%至95%的酒精中消毒10分钟至15分钟。 标记后，将曼氏无针乌贼放入清洁海水中复苏。
与现有技术相比，本发明的优点在于 本发明使用了 MS-222麻醉剂溶液对曼氏无针乌贼进行了麻醉处理，使其在接受 注射时基本无应激，即便于操作又减少了对其的伤害。并且，采用了染色液注射的方式，锐 角插入注射，有利于染色液均布在内壳上，并且特别适用于无针乌贼属。另外，本发明的方 法在乌贼复苏后，无需暂养除去浮色，可以立即放流。
具体实施例方式
以下结合附实施例对本发明作进一步详细描述。 实施例l :首先将11111注射器置于90%至95%的酒精中消毒10分钟至15分钟。之 后取出并吸取51ppm的茜素红S(ARS， C14H7Na07 H20)溶液0. 5ml 。将一头胴长为1. 1cm的 曼氏无针乌贼个体放入浓度为60ppm的MS-222麻醉剂溶液中约0. 5min后立即取出置于铺 有浸水毛巾的操作台上。将注射器针头从乌贼个体背部下端向头部方向以与水平面约15。 角斜着剌穿表皮，针头进入表皮约0. 3cm，当感觉到针尖与内壳摩擦声音时，即表明已将针 头穿透乌贼个体背部内表皮并与内壳接触。轻轻推动注射器将ARS溶液注入表皮下，随着 ARS的注入并在内壳表面扩散，应当将注射量控制在正好覆盖住内壳为宜，以减少染色液应 多余溢出而污染其他软组织。拔出针头，并立即将标记个体放入清洁海水中复苏。
实施例2 :首先将11111注射器置于90%至95%的酒精中消毒10-15min。之后取 出并吸取350ppm的ARS溶液0. 5ml。将一头胴长为3. 5cm的乌贼个体放入浓度为60ppm 的MS-222麻醉剂溶液中约2.0min后立即取出置于铺有浸水毛巾的操作台上。将注射器 针头从乌贼个体背部前端向尾部方向以与水平面约15°角斜着剌穿表皮，针头进入表皮约 0. 8cm，当感觉到针尖与内壳摩擦声音时，即表明已将针头穿透乌贼个体背部内表皮并与内 壳接触。轻轻推动注射器将ARS溶液注入表皮下。拔出针头，并立即将标记个体放入清洁 海水中复苏。 实施例3 :首先将11111注射器置于90%至95%的酒精中消毒10-15min。之后取 出并吸取150ppm的ARS溶液0. 5ml。将一头胴长为6. 2cm的乌贼个体放入浓度为60ppm 的MS-222麻醉剂溶液中约3.5min后立即取出置于铺有浸水毛巾的操作台上。将注射器 针头从乌贼个体背部前端向尾部方向以与水平面约15°角斜着剌穿表皮，针头进入表皮约 1.2cm，当感觉到针尖与内壳摩擦声音时，即表明已将针头穿透乌贼个体背部内表皮并与内 壳接触。轻轻推动注射器将ARS溶液注入表皮下。拔出针头，并立即将标记个体放入清洁 海水中复苏。 实验结果表明，将120只胴长为2cm至3cm的乌贼个体利用内壳ARS标记方法标 记，48h后解剖发现标记溶液已经与内壳结合，养殖两个月后至成体并开始产卵。期间每 隔10天左右取样测量被标记个体的生物学指标如全长、胴长、胴宽、体重、壳长、壳宽、壳重 等，并与空白组乌贼个体进行比较，结果表明两者并无显著性差异，说明该标记方法对乌贼 的生长发育及繁殖并无影响，染色液停留在最初标记处，新生长出来的内壳部分仍然为自 然的白色。排除养殖过程中的正常死亡及取样个体的影响，该标记方法下乌贼的成活率在 99%以上且标记保持率为100%。 本发明的优点目前国内外关于头足类标记技术的报道仅有郝振林(2007年)利 用荧光染色剂——茜素络合指示剂(ALC)对金乌贼内壳进行标记的研究工作，通过将金乌贼在ALC溶液中浸染其针部而对其内壳尾端进行染色标记，这种方法对于无针乌贼属的个体将不再适用。国内外还没有关于无针乌贼标记技术的公开报道，本标记方法不仅可以弥补国内外关于无针乌贼标记技术的空白，且可以解决所有的头足类的标记难题。该标记方法操作简单方便快捷，且死亡率低，标记色保持率为100 % ， 一般情况下可用肉眼从乌贼个体背部透过表皮看到标记色的存在，通过解剖出内壳来观察，则可观察到内壳末端呈椭圆形的红色标记。 尽管已结合优选的实施例描述了本发明，然其并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，能够对在这里列出的主题实施各种改变、同等物的置换和修改，因此本发明的保护范围当视所提出的权利要求限定的范围为准。
权利要求
曼氏无针乌贼内壳茜素红S标记方法，其特征是包括如下步骤①麻醉步骤选取待标记的曼氏无针乌贼放入浓度为40ppm至70ppm的MS-222麻醉剂溶液中0.5分钟至4分钟；②标记步骤用注射器将染色液注入经步骤①处理的曼氏无针乌贼的内壳；所述的染色液为茜素红S的水溶液。
2. 如权利要求1所述的曼氏无针乌贼内壳茜素红S标记方法，其特征是步骤②，茜素红S的水溶液浓度为50卯m至350卯m。
3. 如权利要求2所述的曼氏无针乌贼内壳茜素红S标记方法，其特征是步骤②中，茜素红S注射的量控制在注射时布满内壳。
4. 如权利要求3所述的曼氏无针乌贼内壳茜素红S标记方法，其特征是步骤②中，注射器的针头与曼氏无针乌贼内壳表面呈锐角插入。
5. 如权利要求4所述的曼氏无针乌贼内壳茜素红S标记方法，其特征是步骤②中，注射器在使用前在90 %至95%的酒精中消毒10分钟至15分钟。
全文摘要
本发明公开了曼氏无针乌贼内壳茜素红S标记方法，其包括①麻醉步骤选取待标记的曼氏无针乌贼放入浓度为40ppm至70ppm的MS-222麻醉剂溶液中0.5分钟至4分钟；②标记步骤用注射器将染色液注入经步骤①处理的曼氏无针乌贼的内壳。由于本发明使用了MS-222麻醉剂溶液对曼氏无针乌贼进行了麻醉处理，使其在接受注射时基本无应激，既便于操作又减少了对其的伤害。并且，采用了染色液注射的方式，锐角插入注射，有利于染色液均布在内壳上，并且特别适用于无针乌贼属。另外，本发明的方法在乌贼复苏后，无需暂养除去浮色，可以立即放流。
文档编号A01K61/00GK101731163SQ200910157169
公开日2010年6月16日 申请日期2009年12月20日 优先权日2009年12月20日
发明者吴常文, 张建设, 董智勇, 郭宝英 申请人:浙江海洋学院