专利名称：一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法
技术领域：
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种采用低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法。
背景技术：
饼粕类饲料是指油料籽实经过压榨或浸出提取大部分油脂后剩余的产品，压榨提油后剩余的部分叫饼，预榨浸出提油后剩余的部分叫粕。主要包括大豆饼粕、棉籽饼粕、菜籽饼粕、花生饼粕、亚麻饼粕、油茶籽饼粕、葵花籽饼粕等。近年来，在动物源蛋白供应曰趋紧张的形势下，植物蛋白饼粕类饲料在动物饲料中的应用逐渐增加。饼粕类饲料具有蛋白质含量丰富，必需氨基酸组成比较平衡、价格低廉、来源广泛等特点，但其中也含有多种抗营养因子，如胰蛋白酶抑制剂、植酸、棉酚、硫代葡萄糖苷等，若使用不当，会影响动物的生长健康，甚至造成中毒。近年来，用生物技术特别是微生物发酵技术来开发新型饲料资源、 生产蛋白质饲料和新型添加剂越来越受到人们的重视。微生物发酵技术改良油料饼粕的饲用效价具有以下几点优势①微生物的代谢产物可以降低饼粕中的抗营养因子含量；② 提高蛋白质的品质，合成活性肽、寡肽等；③产生动物所需的促生长因子；④降低粗纤维含量。亚麻籽饼粕等油料饼粕物料若添加过多的水分混合易造成结团结块，从而造成后续烘干、粉碎的困难。
发明内容
本发明的目的是提供了一种存活率较高、生产成本较低的低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法。为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于它包括如下步骤1)菌剂制备将菌株接种于液体培养基中培养，收集菌液，离心去上清液，收集得到菌体；将收集到的菌体用无菌生理盐水洗涤，再次离心；重复洗涤、离心三次，得到洗涤和离心后的菌体；按洗涤和离心后的菌体与无菌生理盐水的体积比=Ig (100-500)mL(W/V)，将洗涤和离心后的菌体用无菌生理盐水重新悬浮菌体，得到菌液；按菌液与海藻酸钠溶液的体积比=1 1-1 5 (V/V)，再将菌液加入灭菌的海藻酸钠溶液，充分搅拌，得到混合液；按海藻酸钠溶液与CaCl2溶液的体积比=1 2-1 10，用注射器将混合液注入 CaCl2溶液中，固化30-60min，固化后用无菌生理盐水洗涤三次，得到微胶囊菌剂；2)饼粕基料混合、发酵按微胶囊菌剂的加入量为油料饼粕重量的0. 5%， 水的加入量为油料饼粕和水的总重量的20% 40%，将微胶囊菌剂、油料饼粕和水搅拌混合均勻，在室温(10-40°C)下静置发酵M 96h(进行固态发酵)，得到发酵产物；
3)采用下述2种方法之一①烘干发酵结束后，将发酵产物在50 80°C下烘干(低温烘干)，使干燥成品含水量维持在10% 20% (质量)，得到油料饼粕蛋白饲料；②将发酵结束后的发酵产物不经烘干直接真空包装，得到油料饼粕蛋白饲料。所述步骤1)中的菌株为枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、醋酸杆菌、 乳酸菌、肠球菌、假单胞菌、酿酒酵母、毕赤酵母、红酵母、假丝酵母、米曲霉、黑曲霉、里氏木霉、少孢根霉等中的任意一种或任意二种以上(含二种)的混合，任意二种以上(含二种) 混合时为任意配比；所述步骤1)中的液体培养基如下菌株选用含有枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌、醋酸杆菌或假单胞菌时，液体培养基采用葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基；菌株选用含有乳酸菌时，液体培养基采用MRS液体培养基；菌株选用含有肠球菌时，液体培养基采用营养肉汁培养基；菌株选用含有酿酒酵母、毕赤酵母、红酵母或假丝酵母时，液体培养基采用YPD液体培养基；菌株选用含有米曲霉、黑曲霉、里氏木霉或少孢根霉时，液体培养基采用马铃薯蔗糖液体培养基。葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基的组成蛋白胨5.0g，牛肉膏10g，酵母膏5.0g， 葡萄糖 5. 0g, NaCl 5. Og,琼脂 15. Og,蒸馏水 1. 0L, pH7. 0-7. 2。MRS液体培养基的组成蛋白胨10. 0g，牛肉膏10. 0g，酵母提取物5. 0g，磷酸氢二钾2. 0g，柠檬酸三铵2. Og,乙酸钠5. Og,葡萄糖20. Og,吐温801. 0ml，硫酸镁0. 58g，硫酸锰 0. 25g，碳酸钙 5. Og,蒸馏水 1. 0L, ρΗ6· 2-6. 4。营养肉汁培养基的组成蛋白胨5g，牛肉膏30g，氯化钠5g，蒸馏水1. 0L。YPD液体培养基的组成酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸馏水1. 0L。马铃薯蔗糖液体培养基的组成马铃薯200g，蔗糖20g，蒸馏水1. 0L, pH自然。所述步骤1)中海藻酸钠溶液浓度为1 10% (w/v，表示100ml海藻酸钠溶液中含海藻酸钠1 IOg)，氯化钙溶液浓度为1 10% (w/v，表示100ml氯化钙溶液中含氯化钙1 IOg)。所述步骤2)中的油料饼粕为菜籽粕、脱皮冷榨菜籽粕、棉籽粕、大豆粕、亚麻粕、 茶籽粕、花生粕、芝麻粕、向日葵粕等中的任意一种或任意二种以上(含二种)的混合，任意二种以上(含二种)混合时为任意配比。本发明的有益效果是1)本发明使用的廉价的油料饼粕、麸皮等作为基本原料，制备方法简单，价格低， 可降低生产成本；2)本发明采用低水分固态发酵方法生产蛋白饲料，减少了生产所需的用水和干燥时所需的能量消耗；3)本发明采用低水分固态发酵的方式，菌株在培养中经历了低水分驯化的过程， 从而使菌株在干燥过程中，能保证高存活率(存活率较高)，并减少杂菌污染；4)对如亚麻籽饼粕等易结团结块的油料饼粕进行低水分发酵，可有效消除混合搅拌、烘干及粉碎过程的困难。5)油料饼粕经低水分发酵脱毒效果显著，产品质量稳定。综上所述，本发明低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料在工业化应用生产上有明显优势，适合工业化生产，适合大面积推广和应用。
图1是本发明的工艺流程图。
具体实施例方式为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。实施例1 如图1所示，一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，它包括如下步骤(1)菌剂的制备将枯草芽孢杆菌从斜面上挑取1环菌落转接于盛有IOOml的葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基的250ml三角瓶中，然后将三角瓶置于摇床上37°C，160r/ min摇瓶培养1 (6 24h均可)。将摇瓶菌液离心去上清液，收集得到菌体；收集到的菌体用无菌生理盐水洗涤，再次离心，重复洗涤、离心三次，得到洗涤和离心后的菌体；按洗涤和离心后的菌体与无菌生理盐水的体积比=Ig IOOmL,洗涤和离心后的菌体用无菌生理盐水重新悬浮菌体，得到菌含量达到IO12的菌液；按菌液与海藻酸钠溶液的体积比=1 1，再将菌液加入灭菌的浓度为5% (w/v)海藻酸钠溶液，充分搅拌，得到混合液；按海藻酸钠溶液与CaCl2溶液的体积比=1 2，用注射器将该混合液注入浓度为 4% (w/v)CaCl2溶液中，固化45min，化后用无菌生理盐水洗涤三次，即得枯草芽孢杆菌菌剂 (微胶囊菌剂)。(2)饼粕基料混合、发酵按枯草芽孢杆菌菌剂的加入量为菜籽饼粕(即菜籽粕) 重量的5%，水(蒸馏水)的加入量为菜籽饼粕和水的总重量的40%，取IOOg灭菌的菜籽饼粕；将枯草芽孢杆菌菌剂、菜籽饼粕和水搅拌混合均勻(可先将枯草芽孢杆菌菌剂和水混合，再与油料饼粕混合)，在37°C下静置发酵7 (24 均可，进行固态发酵)，得到发酵产物；(3)干燥将发酵好的发酵产物(低水分固态培养菜粕)铺于烘干设备内直接干燥，保持60°C烘干(低温烘干)，使干燥成品含水量维持在10wt%左右，得到菜籽饼粕益生蛋白饲料(即油料饼粕蛋白饲料)。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC (异硫氰酸酯)含量达到0. 95mg/g (说明硫甙含量得到有效降解，在饲用安全范围内)，粗蛋白含量提高率为6. 37% (蛋白营养品质得到提高)， 益生菌(益生菌能促进动物的肠胃消化，增加动物采食量)含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例2
—种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，它包括如下步骤(1)菌剂的制备将枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母、乳酸菌从斜面上挑取菌落分别转接于对应盛有葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基、葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基、YPD液体培养基、MRS液体培养基的三角瓶中G个三角瓶)，然后将三角瓶置于摇床上37°C，160r/min摇瓶培养1池(6 241!均可)，将各自G个三角瓶)的摇瓶菌液离心去上清液，收集得到菌体(收集4个三角瓶的，即得到混合菌体)；将收集到的菌体用无菌生理盐水洗涤，再次离心；重复洗涤、离心三次，得到洗涤和离心后的菌体；按洗涤和离心后的菌体与无菌生理盐水的体积比=Ig 200mL，将洗涤和离心后的菌体用无菌生理盐水重新悬浮菌体，得到菌含量达到IO12的菌液；按菌液与海藻酸钠溶液的体积比=1 2，再将菌液加入灭菌的海藻酸钠溶液，充分搅拌，得到混合液；按海藻酸钠溶液与CaCl2溶液的体积比=1 5，用注射器将混合液注入冷却的 CaCl2溶液中，固化45min，固化后用无菌生理盐水洗涤三次，得到微胶囊菌剂；所述海藻酸钠溶液浓度为5% (w/v，表示IOOml海藻酸钠溶液中含海藻酸钠5g)， 氯化钙溶液浓度为4% (w/v)；(2)饼粕基料混合、发酵按微胶囊菌剂的加入量为菜籽饼粕(即菜籽粕)重量的 0. 2%，水的加入量为菜籽饼粕和水的总重量的40%，取1吨菜籽饼粕；将微胶囊菌剂、菜籽饼粕和水搅拌混合均勻，在室温(25°C )下静置发酵72h(进行固态发酵)，得到发酵产物；(3)干燥将发酵好的发酵产物铺于烘干设备内直接干燥，保持60°C烘干，使干燥成品含水量维持在10wt%左右，得到菜籽饼粕益生蛋白饲料(即油料饼粕蛋白饲料)。经检测，0ZT+ITC含量达到1. 2%ig/g，粗蛋白含量提高率为9. 56%，益生菌含量达到108cfu/g，说明存活率较高。实施例3 一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，它包括如下步骤(1)菌剂的制备将假丝酵母和酿酒酵母从斜面上挑取1环菌落分别转接于盛有 IOOml的YPD液体培养基(也可采用葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基)的250ml三角瓶中， 然后将三角瓶置于摇床上，160r/min摇瓶培养1 (6 24h均可)，将摇瓶菌液离心去上清液，收集得到菌体；将收集到的菌体用无菌生理盐水洗涤，再次离心；重复洗涤、离心三次，得到洗涤和离心后的菌体；按洗涤和离心后的菌体与无菌生理盐水的体积比=Ig 500mL，将洗涤和离心后的菌体用无菌生理盐水重新悬浮菌体，得到菌含量达到IO12的菌液；按菌液与海藻酸钠溶液的体积比=1 5，再将菌液加入灭菌的海藻酸钠溶液，充分搅拌，得到混合液；按海藻酸钠溶液与CaCl2溶液的体积比=1 10，用注射器将混合液注入冷却的 CaCl2溶液中，固化45min，固化后用无菌生理盐水洗涤三次，得到微胶囊菌剂；所述海藻酸钠溶液浓度为10% (w/v)，氯化钙溶液浓度为8% (w/v)；2)饼粕基料混合、发酵按微胶囊菌剂的加入量为亚麻籽饼粕重量的5%，水的加入量为亚麻籽饼粕和水的总重量的30%，取IOOg灭菌的亚麻籽饼粕(即亚麻粕)；将微胶囊菌剂、亚麻籽饼粕和水搅拌混合均勻，在室温)下静置发酵72h(M 均可，进行固态发酵)，得到发酵产物；(3)干燥将发酵好的发酵产物(低水分固态培养亚麻籽饼粕)铺于烘干设备内直接干燥，保持60°C烘干，使干燥成品含水量维持在10wt%左右，得到亚麻籽饼粕益生蛋白饲料(即油料饼粕蛋白饲料)。经检测，生氰糖苷含量从395mg/kg降解到Mmg/kg，粗蛋白含量提高率为7. 86 %， 益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例4 一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，它包括如下步骤(1)菌剂的制备将纳豆芽孢杆菌从斜面上挑取1环菌落转接于盛有IOOml的葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基的250ml三角瓶中，然后将三角瓶置于摇床上37°C，160r/ min摇瓶培养1 (6 24h均可)；将摇瓶菌液离心去上清液，收集得到菌体；将收集到的菌体用无菌生理盐水洗涤，再次离心；重复洗涤、离心三次，得到洗涤和离心后的菌体；按洗涤和离心后的菌体与无菌生理盐水的体积比=Ig 200mL，将洗涤和离心后的菌体用无菌生理盐水重新悬浮菌体，得到菌含量达到IO12的菌液；按菌液与海藻酸钠溶液的体积比=1 2，再将菌液加入灭菌的海藻酸钠溶液，充分搅拌，得到混合液；按海藻酸钠溶液与CaCl2溶液的体积比=1 8，用注射器将混合液注入冷却的 CaCl2溶液中，固化60min，固化后用无菌生理盐水洗涤三次，得到微胶囊菌剂；所述海藻酸钠溶液浓度为10% (w/v)，氯化钙溶液浓度为10% (w/v)；2)饼粕基料混合、发酵按微胶囊菌剂的加入量为油料饼粕重量的0. 1%，水的加入量为油料饼粕和水的总重量的20%，将微胶囊菌剂、油料饼粕和水搅拌混合均勻，在室温下静置发酵Mh (进行固态发酵)，得到发酵产物；油料饼粕为脱皮冷榨菜籽粕；3)烘干发酵结束后，将发酵产物在50°C下烘干，使干燥成品含水量维持在10% (质量)，得到油料饼粕蛋白饲料；经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC(异硫氰酸酯)含量达到1. 15mg/g，粗蛋白含量提高率为7. 07%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例5 一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，它包括如下步骤(1)菌剂的制备将地衣芽孢杆菌从斜面上挑取1环菌落转接于盛有IOOml的葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基的250ml三角瓶中，然后将三角瓶置于摇床上37°C，160r/ min摇瓶培养1 (6 24h均可)；将摇瓶菌液离心去上清液，收集得到菌体；将收集到的菌体用无菌生理盐水洗涤，再次离心；重复洗涤、离心三次，得到洗涤和离心后的菌体；按洗涤和离心后的菌体与无菌生理盐水的体积比=Ig 200mL，将洗涤和离心后的菌体用无菌生理盐水重新悬浮菌体，得到菌含量达到IO12的菌液；按菌液与海藻酸钠溶液的体积比=1 2，再将菌液加入灭菌的海藻酸钠溶液，充分搅拌，得到混合液；按海藻酸钠溶液与CaCl2溶液的体积比=1 8，用注射器将混合液注入冷却的 CaCl2溶液中，固化50min，固化后用无菌生理盐水洗涤三次，得到微胶囊菌剂；所述海藻酸钠溶液浓度为(w/v)，氯化钙溶液浓度为10% (w/v)；
2)饼粕基料混合、发酵按微胶囊菌剂的加入量为油料饼粕重量的0. 1%，水的加入量为油料饼粕和水的总重量的40%，将微胶囊菌剂、油料饼粕和水搅拌混合均勻，在室温下静置发酵96h(进行固态发酵)，得到发酵产物；油料饼粕为棉籽粕；烘干发酵结束后，将发酵产物在80°C下烘干，使干燥成品含水量维持在20% (质量)，得到油料饼粕蛋白饲料；经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC(异硫氰酸酯)含量达到1. 3;3mg/g，粗蛋白含量提高率为6. 81 %，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例6 一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，它包括如下步骤(1)菌剂的制备将肠球菌从斜面上挑取1环菌落转接于盛有IOOml的营养肉汁培养基的250ml三角瓶中，然后将三角瓶置于摇床上37°C，160r/min摇瓶培养1 (6 24h 均可)；将摇瓶菌液离心去上清液，收集得到菌体；将收集到的菌体用无菌生理盐水洗涤，再次离心；重复洗涤、离心三次，得到洗涤和离心后的菌体；按洗涤和离心后的菌体与无菌生理盐水的体积比=Ig 200mL，将洗涤和离心后的菌体用无菌生理盐水重新悬浮菌体，得到菌含量达到IO12的菌液；按菌液与海藻酸钠溶液的体积比=1 2，再将菌液加入灭菌的海藻酸钠溶液，充分搅拌，得到混合液；按海藻酸钠溶液与CaCl2溶液的体积比=1 8，用注射器将混合液注入冷却的 CaCl2溶液中，固化50min，固化后用无菌生理盐水洗涤三次，得到微胶囊菌剂；所述海藻酸钠溶液浓度为(w/v)，氯化钙溶液浓度为(w/v)；2)饼粕基料混合、发酵按微胶囊菌剂的加入量为油料饼粕重量的5%，水的加入量为油料饼粕和水的总重量的20%，将微胶囊菌剂、油料饼粕和水搅拌混合均勻，在室温下静置发酵Mh (进行固态发酵)，得到发酵产物；油料饼粕为大豆粕(大豆饼粕)；3)将发酵结束后的发酵产物不经烘干直接真空包装，得到油料饼粕蛋白饲料。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC(异硫氰酸酯)含量达到1. 5%ig/g，粗蛋白含量提高率为6. 64%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例7 与实施例1基本相同，不同之处在于“枯草芽孢杆菌”由“毕赤酵母”替换，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基”由“YPD液体培养基”替换。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC (异硫氰酸酯)含量达到1. 82mg/g,粗蛋白含量提高率为6. 15%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例8 与实施例1基本相同，不同之处在于“枯草芽孢杆菌”由“红酵母”替换，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基”由“YPD液体培养基”替换。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC(异硫氰酸酯)含量达到1. 76mg/g，粗蛋白含量提高率为7. 03%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例9:与实施例1基本相同，不同之处在于“枯草芽孢杆菌”由“假丝酵母”替换，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基”由“YPD液体培养基”替换。
经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC(异硫氰酸酯)含量达到1. 57mg/g，粗蛋白含量提高率为7. 11%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例10 与实施例1基本相同，不同之处在于“枯草芽孢杆菌”由“酿酒酵母”替换，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基”由“YPD液体培养基”替换。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC(异硫氰酸酯)含量达到1. 37mg/g，粗蛋白含量提高率为6. 81 %，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例11 与实施例1基本相同，不同之处在于“枯草芽孢杆菌”由“米曲霉”替换，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基”由“马铃薯蔗糖液体培养基”替换。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC (异硫氰酸酯)含量达到1. 63mg/g,粗蛋白含量提高率为6. 23%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例12 与实施例1基本相同，不同之处在于“枯草芽孢杆菌”由“黑曲霉”替换，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基”由“马铃薯蔗糖液体培养基”替换。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC(异硫氰酸酯)含量达到1. 59mg/g，粗蛋白含量提高率为6. 68%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例13:与实施例1基本相同，不同之处在于“枯草芽孢杆菌”由“里氏木霉”替换，“葡萄
糖牛肉膏蛋白胨液体培养基”由“马铃薯蔗糖液体培养基”替换。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC(异硫氰酸酯)含量达到1. 7ang/g，粗蛋白含量提高率为6. 05%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例14:与实施例1基本相同，不同之处在于“枯草芽孢杆菌”由“少孢根霉”替换，“葡萄
糖牛肉膏蛋白胨液体培养基”由“马铃薯蔗糖液体培养基”替换。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC (异硫氰酸酯)含量达到1. 60mg/g,粗蛋白含量提高率为6. 34%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例15 与实施例1基本相同，不同之处在于“枯草芽孢杆菌”由“乳酸菌”替换，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基”由“MRS液体培养基”替换。经检测，OZT (噁唑硫酮)+ITC (异硫氰酸酯)含量达到1. 75mg/g (说明硫甙含量得到有效降解，在饲用安全范围内)，粗蛋白含量提高率为5. 27% (蛋白营养品质得到提高)， 益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例16 与实施例2基本相同，不同之处在于“菜籽饼粕(即菜籽粕)”由“棉籽粕”替换。经检测，棉酚含量从65. 43mg/kg降低到8. 44mg/kg,粗蛋白含量提高率为3. 25 %， 益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例17 与实施例2基本相同，不同之处在于“菜籽饼粕(即菜籽粕)”由“油茶粕”替换。
经检测，粗纤维含量由24. 89%降解到15. 88%，粗蛋白含量提高率为12. 36%，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例18 与实施例1基本相同，不同之处在于“菜籽饼粕(即菜籽粕)”由“芝麻粕”替换。经检测，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例19 与实施例1基本相同，不同之处在于“菜籽饼粕(即菜籽粕)”由“向日葵粕”替换。经检测，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。实施例20:与实施例1基本相同，不同之处在于“菜籽饼粕(即菜籽粕)”由“棉籽粕、大豆粕、亚麻粕、茶籽粕和花生粕”替换，棉籽粕、大豆粕、亚麻粕、茶籽粕和花生粕各20g(共计 IOOg)。经检测，益生菌含量达到109cfu/g，说明存活率较高。本发明所列举的各原料，以及本发明各原料的上下限、区间取值，以及工艺参数 (如温度、时间等)的上下限、区间取值都能实现本发明，在此不一一列举实施例。
权利要求
1.一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于它包括如下步骤1)菌剂制备将菌株接种于液体培养基中培养，收集菌液，离心去上清液，收集得到菌体；将收集到的菌体用无菌生理盐水洗涤，再次离心；重复洗涤、离心三次，得到洗涤和离心后的菌体；按洗涤和离心后的菌体与无菌生理盐水的体积比=Ig (100-500)mL，将洗涤和离心后的菌体用无菌生理盐水重新悬浮菌体，得到菌液；按菌液与海藻酸钠溶液的体积比= 1:1-1: 5，再将菌液加入灭菌的海藻酸钠溶液，充分搅拌，得到混合液；按海藻酸钠溶液与CaCl2溶液的体积比=1 2-1 10，用注射器将混合液注入CaCl2 溶液中，固化后用无菌生理盐水洗涤三次，得到微胶囊菌剂；2)饼粕基料混合、发酵按微胶囊菌剂的加入量为油料饼粕重量的0. 5%，水的加入量为油料饼粕和水的总重量的20% 40%，将微胶囊菌剂、油料饼粕和水搅拌混合均勻，在室温下静置发酵M 96h，得到发酵产物；3)采用下述2种方法之一①烘干发酵结束后，将发酵产物在50 80°C下烘干，使干燥成品含水量的质量维持在10% 20%，得到油料饼粕蛋白饲料；②将发酵结束后的发酵产物直接真空包装，得到油料饼粕蛋白饲料。
2.根据权利要求1所述的一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于所述步骤1)中的菌株为枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、醋酸杆菌、 乳酸菌、肠球菌、假单胞菌、酿酒酵母、毕赤酵母、红酵母、假丝酵母、米曲霉、黑曲霉、里氏木霉、少孢根霉等中的任意一种或任意二种以上的混合，任意二种以上混合时为任意配比；所述步骤1)中的液体培养基如下菌株选用含有枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、醋酸杆菌或假单胞菌时，液体培养基采用葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基； 菌株选用含有乳酸菌时，液体培养基采用MRS液体培养基； 菌株选用含有肠球菌时，液体培养基采用营养肉汁培养基；菌株选用含有酿酒酵母、毕赤酵母、红酵母或假丝酵母时，液体培养基采用YPD液体培养基；菌株选用含有米曲霉、黑曲霉、里氏木霉或少孢根霉时，液体培养基采用马铃薯蔗糖液体培养基。
3.根据权利要求2所述的一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于葡萄糖牛肉膏蛋白胨液体培养基的组成蛋白胨5. 0g，牛肉膏10g，酵母膏5. 0g，葡萄糖 5. 0g, NaCl 5. Og,琼脂 15. Og,蒸馏水 1. 0L, ρΗ7· 0-7. 2。
4.根据权利要求2所述的一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于MRS液体培养基的组成蛋白胨10. 0g，牛肉膏10. 0g，酵母提取物5. 0g，磷酸氢二钾 2. Og,柠檬酸三铵2. Og,乙酸钠5. Og,葡萄糖20. Og,吐温801. 0ml，硫酸镁0. 58g，硫酸锰 0. 25g，碳酸钙 5. Og,蒸馏水 1. 0L, ρΗ6· 2-6. 4。
5.根据权利要求2所述的一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于营养肉汁培养基的组成蛋白胨5g，牛肉膏30g，氯化钠5g，蒸馏水1. 0L。
6.根据权利要求2所述的一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于YPD液体培养基的组成酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸馏水1. 0L。
7.根据权利要求2所述的一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于马铃薯蔗糖液体培养基的组成马铃薯200g，蔗糖20g，蒸馏水1. 0L, pH自然。
8.根据权利要求1所述的一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于所述步骤1)中海藻酸钠溶液浓度为1 10% (w/v)，氯化钙溶液浓度为1 10% (w/V) O
9.根据权利要求1所述的一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于所述步骤2)中的油料饼粕为菜籽粕、脱皮冷榨菜籽粕、棉籽粕、大豆粕、亚麻粕、茶籽粕、花生粕、芝麻粕、向日葵粕等中的任意一种或任意二种以上的混合，任意二种以上混合时为任意配比。
全文摘要
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种采用低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法。一种低水分固态发酵制备油料饼粕蛋白饲料的方法，其特征在于它包括如下步骤1)菌剂制备按海藻酸钠溶液与CaCl2溶液的体积比＝1∶2-1∶10，用注射器将混合液(菌液+海藻酸钠溶液)注入CaCl2溶液中，固化后用无菌生理盐水洗涤三次，得到微胶囊菌剂；2)饼粕基料混合、发酵将微胶囊菌剂、油料饼粕和水搅拌混合均匀，在室温下静置发酵24～96h，得到发酵产物；3)采用下述2种方法之一①烘干发酵结束后，将发酵产物烘干，得到油料饼粕蛋白饲料；②将发酵结束后的发酵产物直接真空包装，得到油料饼粕蛋白饲料。本发明具有存活率较高、生产成本较低的特点。
文档编号A23K1/14GK102318732SQ20111023179
公开日2012年1月18日 申请日期2011年8月15日 优先权日2011年8月15日
发明者万楚筠, 周浩宇, 李文林, 江木兰, 胡双喜, 邓乾春, 钮琰星, 黄凤洪, 黄庆德, 黄茜 申请人:中国农业科学院油料作物研究所