含有非酸性乳香油分馏物的组合物作为用于提高生物制剂的生物利用度的生物增强剂的制作方法

专利名称：含有非酸性乳香油分馏物的组合物作为用于提高生物制剂的生物利用度的生物增强剂的制作方法
含有非酸性乳香油分馏物的组合物作为用于提高生物制剂的生物利用度的生物增强剂发明领域
本发明提供非酸性乳香低极性树胶脂提取分馏物(BLPRE)、乳香挥发性油分馏物(BVOIL)或含有BLPRE和BVOIL的乳香油分馏物(BOIL)用于提高生物制剂的生物利用度。本发明提供的用于提高生物制剂的生物利用度的组合物，其至少含有选自乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)及乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)中的一种组分及结合一种生物制剂。发明目的
许多药物、中草药成分及生物活性分子在体外对疾病或障碍都是非常有效的。然而，其中一些在体内(温血动物)没有效果或者没有生物可利用性。因此，研究、识别及发明安全和 有效的制剂来帮助提高药物成分的生物利用度是非常重要的。在本发明中，发明者筛选了大量的来自于植物、动物和微生物的提取物、分馏物、植物化学成分和化合物。发明背景
自古以来乳香树胶脂已经具有广泛的用途。例如，例如齿叶乳香树植物的树胶脂就长期被印度医药系统的草药人业人士用于治疗类风湿关节炎和痛风。树胶脂的各种提取物在实验室动物上均显示了潜在的消炎和抗动脉粥样硬化活性[CuaZ-Perolin et al.，ArteriosclerThrombVascBiolFeb 2008]。据发现，乳香提取物是一种潜在的抗关节炎药[Kimmatkar et al ; Phytomedicine. 2003, 10 (I) : 3 -7]。乳香树胶脂及其提取物在人体临床测试中还被证实能显著改进疗效，显示了体内消炎效果[E Ernest, BMJ 2008;337: a2813]。乳香树胶脂及其提取物具有消炎作用是由于一组三萜酸，即乳香酸，是从齿叶乳香的树胶脂中分离获得的。乳香酸通过抑制5-脂氧合酶(5-L0X)显示出消炎作用。5-L0X是花生四烯酸合成白三烯时的一种关键的酶。白三棱被认为与多种炎症疾病的发生和发展有关。此外乳香酸抑制5-脂氧合酶，从而抑制人体白细胞弹性蛋白酶(HLE)，一种不同促炎症路径的酶[Safayahi, H. , et. al. , J . Pharmacol . Exp . Ther. , 1997: 281 ;P 460-463]。3-0-乙酰基-11-酮-β-乳香酸(AKBA)在其同类中是生物学活性最强的成分，其抑制 5-L0X 的 IC5。为 I. 5 μΜ[Sailer, E. R.，et. al. , British J. Pharmacol.,1996: 117; p 615-618]。美国专利US5716928和US5665386涉及一种增加口服疏水药物化合物的生物利用度的方法，包括当需要化合物治疗的哺乳动物口服药物化合物的同时，伴随足够量的精油或精油组分，使得在存在精油或精油组分时化合物的生物利用度大于没有精油或精油组分时化合物的生物利用度，其中精油或精油组分在O. Olwt或更少浓度时具有10%的抑制活性，通过测量环孢素转变为羟基化产物的减少来分析，利用在I毫升的O. 1MPH7. 4的磷酸钠缓冲液中含有250mug大鼠肝脏微粒体、Imu环孢素及ImM还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的分析系统。要求了德国专利DE-A10041217的优先权的PCT申请W002/15916公开了源自乳香的二氢乳香酸，其药物可接受的盐及氢化提取物。所述公开的专利建议使用这些化合物来预防和/或治疗不受欢迎的身心疾病，尤其是身体、身心和精神疾病，如由白三烯形成量的增加、白细胞弹性蛋白酶或血纤维蛋白溶酶活性的升高引起的炎症过程。根据发明人的了解，现有技术中没有涉及将非酸性乳香低极性树胶脂分馏物(BLPRE)、乳香挥发性油分馏物(BVOIL)或含有BLPRE和BVOIL的乳香油分馏物(BOIL)用于在温血动物中增加生物制剂的生物利用度。大约有30%的年长的美国人没有得到所有必需营养物质的饮食需求。在用尽必需的营养物质时，食物-药物相互作用的危害是众所周知的。老年人需要增加药物的使用是不可避免的。例如，使用特定的抗生素会降低钙和铁的吸收，而EDTA螯合疗法会降低锌、铁、铜和镁的吸收。此外，许多使癌症和心血管疾病的风险增加的食物必须从饮食中去除，从而进一步消耗掉必需营养物质的来源。例如，维生素B和维生素D的良好来源，如红色肉类、肝、蛋 黄、奶酪和奶制品，往往是受限制的，因为他们的胆固醇含量高。有限的菜单也造成人体必需氨基酸的消耗，如色氨酸，这是非常重要的神经递质的前体，并可能在预防大脑随年龄的退化方面发挥的作用。必需营养物质的利用度由于胃肠道吸收差而进一步受到损害。弥补营养补充不足、胃肠道吸收不足和营养物质的代谢利用不足的传统方式是口服大剂量的补偿物质，如维生素和矿物质补充剂。因此，非常需要开发有助于提高生物制剂的利用度的化合物/组合物，通过包含提高生物利用度、提高血清浓度、改善胃肠道吸收、改善系统利用、改善某些生物屏障例如呼吸道粘膜、尿道粘膜、血脑屏障和温血动物的皮肤之间的交叉连通在内的一种或多种机制。发明概述
本发明的一个重要方面是提供乳香油(BOIL)用于提高生物制剂的生物利用度。本发明的另一个重要方面是提供乳香挥发性油分馏物(BVOIL)用于提高生物制剂的生物利用度。本发明的另一个重要方面是提供乳香低极性树胶脂提取分馏物(BLPRE)用于提高生物制剂的生物利用度。本发明的另一方面是提供在需要的温血动物中提高生物制剂的生物利用度的组合物,其至少含有选自乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)及来自于乳香树胶脂的乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)中的一种组分结合一种生物制剂。本发明的另一方面是提供乳香衍生的生物增强剂用于提高一个或多个生物成分或功能性成分的生物利用度。本发明的另一方面是提供乳香衍生的生物增强剂用于提高一个或多个药制品/合成药物的生物利用度。本发明的另一方面是提供乳香衍生的生物增强剂用于提高一个或多个乳香衍生组分的生物利用度。本发明的另一方面是提供乳香衍生的生物增强剂用于提高一个或多个姜黄衍生组分的生物利用度。


图I :图中显示的结构式1-9表示齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BSLPRE)的代表性化合物。图II是显示的AKBA的血清浓度图示，在以相当于30mg/kgAKBA的剂量给白化鼠口服含有齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BSLPRE)和选择性浓缩至30%3-0_乙酰基-11-酮基-乳香酸(AKBA)的齿叶乳香树提取物的组合物LI13108F和含有齿叶乳香树挥发性油分馏物(BsVOIL)和选择性浓缩至30%3-0_乙酰基-11-酮基-乳香酸(AKBA)的齿叶乳香树提取物的组合物LI13119F后。图III是显示的双去甲基姜黄素(LI01008)的血清浓度图示，在以浓度450mg/kg口服含有双去甲基姜黄素和齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BSLPRE)以2:1的比例混合的组合物(LI13124F1)后或以300mg/kg体重的浓度单独口服双去甲基姜黄素(LI01008)后。
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发明详述
I、本文中使用的“乳香油”或“非酸性乳香提取物”或“BOIL”代表含有从任何乳香属的树胶脂得到的非酸性乳香低极性树胶脂提取分馏物(BLPRE)及乳香挥发性油分馏物(BVOIL)的非酸性乳香树胶脂提取物。2、本文中使用的“齿叶乳香树油”或“非酸性齿叶乳香树提取物”或“BsOIL”代表从齿叶乳香树的树胶脂得到的含有非酸性齿叶乳香树低极性树胶脂提取分馏物(BsLPRE)和齿叶乳香树挥发性油分馏物(BsVOIL)的非酸性齿叶乳香树树胶脂提取物。3、本文中使用的“卡氏乳香树油”或“非酸性卡氏乳香树提取物”或“BcOIL”代表含有从任何卡氏乳香树种的树胶脂得到的非酸性卡氏乳香树低极性树胶脂提取分馏物(BcLPRE)和卡氏乳香树挥发性油分馏物(BcVOIL)的非酸性卡氏乳香树胶脂提取物。4、本文中使用的“乳香低极性树胶脂提取分馏物”或“乳香低极性树胶脂提取物”或“BLPRE”代表非酸性乳香树胶脂抽提油分馏物，其含有从乳香油中移除了挥发性组分后得到的倍半萜烯、二萜、三萜类及其他的油性植物化学物质，所述乳香油是从任何乳香属的树胶脂中通过所描述的任何方法得到。5、本文中使用的“齿叶乳香树油低极性树胶脂提取分馏物”或“齿叶乳香树低极性树胶脂提取物”或“BsLPRE”代表非酸性齿叶乳香树树胶脂抽提油分馏物，其含有从乳香油中移除了挥发性组分后得到的倍半萜烯、二萜、三萜类及其他的油性植物化学物质，所述乳香油是从齿叶乳香树的树胶脂中通过所描述的任何方法得到。6、本文中使用的“卡氏乳香树低极性树胶脂提取分馏物”或“卡氏乳香树低极性树胶脂提取物”或“BcLPRE”代表非酸性卡氏乳香树树胶脂抽提油分馏物，其含有从卡氏乳香树油中移除了挥发性组分后得到的倍半萜烯、二萜、三萜类及其他的油性植物化学物质，所述卡氏乳香树油是从卡氏乳香树种的树胶脂中通过所描述的任何方法得到。7、本文中使用的“乳香挥发性油分馏物”或“乳香挥发性油”或“挥发性油”或“挥发性分馏物”或“BV0IL”代表挥发性分馏物/提取物，其含有通过任意所述的方法从任何乳香属中的树胶脂得到的单烯、二萜、挥发性油及其他的油性植物化学物质。8、本文中使用的“齿叶乳香树挥发性油分馏物”或“齿叶乳香树挥发性油”或“齿叶挥发性油”或“齿叶挥发性分馏物或“BsVOIL”代表挥发性分馏物/提取物，其含有通过任意所述的方法从齿叶乳香树的树胶脂得到的单烯、二萜、挥发性油及其他的油性植物化学物质。9、本文中使用的“卡氏乳香树挥发性油分馏物”或“卡氏乳香树挥发性油”或“卡氏挥发性油”或“卡氏挥发性分馏物或“BcVOIL”代表挥发性分馏物/提取物，其含有通过任意所述的方法从任何卡氏乳香树的树胶脂得到的单烯、二萜、挥发性油及其他的油性植物化学物质。10、本文中使用的“树胶”或“树胶脂”或“树脂”代表乳香植物物种的分泌物。11、本文中使用的“植物化学成分”代表从植物中分离的纯的或半纯的化合物。12、“生物增强剂”是指在温血动物中通过一个或多个机制提高生物制剂利用度的 试剂，其中的机制包括提高生物利用度、提高血清浓度、改善胃肠道吸收、改善系统利用、改善某些生物屏障例如呼吸道粘膜、尿道粘膜、血脑屏障和皮肤之间的交叉连通。13、“生物增强组合物”是指含有作为生物增强剂的乳香衍生油分馏物结合一个或多个生物制剂的组合物。14、“生物制剂”是指是指选自从植物/动物/微生物/合成或半合成获得的生物活性成分、功能性成分、抗氧化剂、维生素、矿物质、氨基酸和油及其混合物中的一种或多种制剂。15、本文中使用的“BSE85 %”是指标准化为85%乳香酸的齿叶乳香提取物。16、本文中使用的“BCE85%”是指标准化为85%乳香酸的卡氏乳香提取物。17、“CLE95 %”是指标准化为95%姜黄色素的姜黄提取物。18、“CAE20 %”是指标准化为20%姜黄色素的郁金提取物。19、“生物活性成分”是指任何药学上或营养学上或饮食上可接受的活性成分；来自于植物、动物或微生物的或通过化学合成或半合成方法得到的化合物、抽提物、分馏物、植物化学物质、合成药物，或它们的盐或它们的混合物。20、“功能性成分”是指来自于植物或动物或微生物或化学合成或半合成的任何中草药成分、膳食补充剂、抗氧化剂、维生素、矿物质、氨基酸、脂肪酸、精油、鱼油、酶、葡萄糖胺、软骨素和益生菌或它们的盐或它们的混合物。自古以来乳香的树胶脂就已经得到了非常广泛的应用。各种乳香属例如齿叶乳香树、卡氏乳香树或乳香枸树的树胶脂是含有乳香油分馏物(BOIL)、乳香酸、糖类及多糖成分的复杂混合物，其中乳香油分馏物(BOIL)含有精油/乳香挥发油分馏物(BVOIL)及非酸性乳香低极性树胶脂提取分馏物(BLPRE)。在国际市场上广泛使用的齿叶乳香树/卡氏乳香树/乳香枸树提取物是从树胶脂分离出的酸性分馏物，该分馏物是通过滴定分析法被标准化的含有65%或85%总乳香酸。在对来自于齿叶乳香树/卡氏乳香树/乳香枸树的常规乳香提取物(85%总乳香酸)实行商业化过程中，主要包括含乳香酸的三萜酸的酸分馏物是从树胶脂的剩余部分分离获得的。在总乳香酸浓缩过程中，糖及其他的聚合物分离出来进入水相。剩下的水不溶低极性化合物被分离出来成为乳香油分馏物/提取物。这些低极性的化合物不存在或以极低浓度低存在于标准化为乳香酸的商业乳香提取物和选择性地浓缩于3-0-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸(AKBA)的乳香提取物这两者中。获得非酸件乳香油(BOIL)分馏物的方法:
获得乳香油的一个典型方法包括a)获取一种或多种植物的树胶脂，所述植物选自但不限于齿叶乳香树或卡氏乳香树或/乳香枸树或它们的混合物，
b)利用水不溶性有机溶剂萃取树胶脂，
c)仔细过滤提取物以移除不溶性的树脂材料，.
d)利用碱水溶液如氢氧化钾水溶液反复洗涤有机溶剂提取物，
e)利用水和盐水洗涤有机层，及
f)在真空和高温下蒸发有机层，以得到油状残留物(BOIL)。获得乳香挥发性油(BVOIL)分馏物的方法: 获得乳香挥发性油(BVOIL)的方法是从乳香树胶脂中通过蒸汽蒸馏或利用高度真空。获得乳香挥发性油的(BVOIL) —个典型方法包括
a)获取乳香的树胶脂，及
b)从所述树胶脂中或通过蒸汽蒸馏或在高度真空、低温下蒸馏来分离出挥发性油组分，以得到BV0IL。在另一个可替换方法中，
a)BOIL通过上述方法制备，
b)然后将BOIL蒸汽蒸馏或真空蒸馏以收集乳香挥发性油(BV0IL)。获得乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)分馏物的方法
获得乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)的一个典型方法包括
a)利用水不溶性有机溶剂萃取乳香树属的树胶脂，然后仔细过滤提取物以移除不溶性的树脂材料，
b)利用碱水溶液如氢氧化钾水溶液反复洗涤有机溶剂提取物，
c)洗涤利用水和盐水碱洗后得到的有机层，
d)在真空和高温下蒸发所述有机层以得到油状残留物，及
e)在高度真空和高温下从所述油状残留物中除去挥发性化合物以得到BLPRE。获得乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)的另一典型方法包括
a)制备乳香树胶脂的醇类或水合醇类提取物，
b)在碱水溶液与水不溶性有机溶剂之间分离出醇类提取物，
c)分离有机溶剂层，然后蒸发溶剂以得到油状残留物，及
d)在高温和高度真空下从所述油状残留物中除去挥发性化合物以得到BLPRE。还有另一个获得乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)的典型方法包括
a)利用醇类或水合醇类抽提乳香属的树胶脂，
b)蒸发有机溶剂至总固体物的最佳水平，然后
c)调整PH值为碱性，优选的为PH9-12，
d)利用有机溶剂重复提取溶液，
e)在真空及高温下蒸发有机溶剂以得到油状残留物，及
f)在高度真空和高温下从所述油状残留物中蒸发挥发性化合物以得到BLPRE。获得齿叶乳香树挥发性油(BsVOIL)的一个典型方法包括
a)获取齿叶乳香树的树胶脂，及
b)从所述树胶脂中或通过蒸汽蒸馏或在高度真空、低温下蒸馏来分离出挥发性油组份，以得到BsVOIL。另一个获得卡氏乳香树挥发性油(BcVOIL)的典型方法包括
a)获取卡氏乳香树的树胶脂，及
b)从所述树胶脂中或通过蒸汽蒸馏或在高度真空、低温下蒸馏来分离出挥发性油组份，以得到BcVOIL。从齿叶乳香树、卡氏乳香树获得乳香挥发性油(BVOIL)的典型方法如上所述。然而，可使用相似的方法或过程来从乳香树属中获得任何树胶脂以用于制作乳香挥发性油(BVOIL)0获得齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BsLPRE)的典型方法 a)获取齿叶乳香树的树胶脂， b )利用水不溶性有机溶剂萃取，然后通过过滤分离出不溶性的树胶材料并丢弃，
c)利用稀释的碱水溶液反复洗涤有机溶剂提取物以除去酸性化合物，
d)相继用水和盐水洗涤有机层，
e)在真空和60-70°C下蒸发有机层以得到油状残留物，及
f )在高度真空和高温下从所述油状残留物中除去挥发性组分以得到粘性油，即为本文中的齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BsLPRE)。可替换地，BsLPRE也可通过以下方法制备
a)制备齿叶乳香树树胶脂的醇类或水合醇类提取物，
b)在碱水溶液与水不溶性有机溶剂之间分离出醇类提取物，
c)分离有机溶剂层，然后在真空及60- 70° C下蒸发有机层以得到油状残留物，及
d)在高度真空和高温下从所述油状残留物中除去挥发性组分以得到粘性油，即为本文中的齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BsLPRE)。获得卡氏乳香树低极性树胶脂提取物(BcLPRE)的另一典型方法包括
a)获取卡氏乳香树的树胶脂，
b)利用水不溶性有机溶剂萃取树胶脂，然后通过过滤分离出不溶性的树胶材料并丢
弃，
c)利用稀释的碱水溶液反复洗涤有机溶剂提取物以除去酸性化合物，
d)相继用水和盐水洗涤有机层，
e)在真空和60-70°C下蒸发有机层以得到油状残留物，及
f )在高度真空和高温下从所述油状残留物中除去挥发性组分以得到粘性油，即为本文中的卡氏乳香树低极性树胶脂提取物(BcLPRE )。可替换地，BcLPRE也可通过以下方法制备
a)制备卡氏乳香树树胶脂的醇类或水合醇类提取物，
b)在碱水溶液与水不溶性有机溶剂之间分离出醇类提取物，
c)分离有机溶剂层，然后在真空及60-70°C下蒸发有机层以得到油状残留物，
d)在高度真空和高温下从所述油状残留物中除去挥发性组分以得到粘性油，即为本文中的卡氏乳香树低极性树胶脂提取物(BcLPRE )。从齿叶乳香树和卡氏乳香树中获得乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)的典型方法如上所述。然而，可使用相似的方法或过程来从乳香树属中获得任何树胶脂以用于制作低极性树胶脂提取物。所述原乳香油(BOIL)或乳香挥发油(BVOIL)或乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)构成了乳香树胶脂的主要成分。然而，它具有有限的商业用途，并且它常常作为废料丢弃。这些分馏物的潜在用途迟迟未被发现。发明者意外地发现从齿叶乳香树油中除去挥发性化合物后得到的分馏物即齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BsLPRE)具有一些有益的性质。在我们之前于2008年9月15日提交的印度专利申请2229/CHE/2008及2009年9月14日提交的PCT申请PCT/IN2009/000505中，我们公开了包含AKBA浓缩分馏物及齿叶乳香树非酸性提取物(BNRE)的协同作用组合物。BNRE组合物及其识别方法也已经一并公开。在我们最近于2010年2月15日提交的印度专利申请394/CHE/2010中，我们公开了非乳香酸分馏物及其协同作用组合物。在研究生物增强剂的过程中，发明者意外发现，非酸性乳香低极性树胶脂提取·分馏物(BLPRE)、乳香挥发性油分馏物(BVOIL)或含有BLPRE和BVOIL的乳香油分馏物(BOIL)可提高生物活性剂的生物利用度。将含有齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BSLPRE ；LI13115)和选择性浓缩至30%3-0_乙酰基_11_酮基-β -乳香酸(AKBA)的齿叶乳香树提取物的组合物LI13108F及含有齿叶乳香树挥发性油分馏物(BsVOIL)和选择性浓缩至30%3-0-乙酰基-11-酮基-β -乳香酸(AKBA)的齿叶乳香树提取物的组合物LI13119F给予给白化鼠。对照组的动物给予选择性浓缩至30%ΑΚΒΑ的齿叶乳香树提取物。在口服测试物质之前及分别在口服之后的O. 5、1、2、4、8小时时，收集所有动物的血液样本。利用LC-MS通过测量每一个测试动物的血清AKBA浓度来分析比较乳香物质中的AKBA的口服生物利用度。令人惊讶的是，组合物LI13108F和组合物LI13119F都表现出了较好的口服生物利用度，分别为AUCsl4. 08和11. 23，而包含30%AKBA的只有齿叶乳香树提取物的组分(LI13115)的 AUC 为 9. 825。LI13108F 的生物利用度(以 AUC 论)比 LI13115 高 43. 33%。LI13119F的生物利用度比LI13115高14. 33%。研究的细节如实施例6和图II中所描述。为了达到最佳的治疗效果，活性物质在所需期间应该以有效浓度完成体循环和到达其活性位点。提高生物利用度和减少用药频率而不失治疗效果对于实现治疗效果和对于慢性治疗中病人的依从性是至关重要的。本发明通过提高在含有BsLPRE或BsVOIL的组合物中AKBA的口服生物利用度来实现该目的。通过在白化大鼠中对比分析含有BSLPRE和新的名为双去甲基姜黄素(LI01008)的组合物(LI13124F1)与单独的LI01008来进一步证实提高BsLPRE的生物利用度的效果。双去甲基姜黄素是一种强效的姜黄素类化合物，远优于其他其他天然的姜黄素类化合物的抗氧化性及通常表现的姜黄素的其他生物活性。与单独供给LI01008的动物相比，在血清样本中组合物LI13124F1的生物利用度优于LI01008。与单独供给LI01008的动物的血清样本相比，供给组合物LI13124F1的动物的血清样本显示出高出75%的生物利用度。实验研究在实施例6和图III中描述。以上内容说明非酸性乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)、乳香挥发性油分馏物(BVOIL)或含有BLPRE和BVOL的乳香油分馏物(BOIL)提高生物活性剂的生物利用度。因此，这些生物增强剂可用于提高疗效和降低生物活性剂的剂量。
下面将描述本发明不同的实施例:
本发明的一个重要方面是提供用于提高生物制剂的生物利用度的生物增强剂，选自原本的乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)和来自于乳香树种的乳香树胶脂的乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)。本发明的一个重要方面是提供用于提高生物制剂的生物利用度的组合物，含有一个或多个选自的原本的乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)和来自于乳香树种的乳香树胶脂的乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)的成分结合一个生物制剂。本发明的另一方面是提供乳香衍生的生物增强剂，用于提高生物利用度和/或生物有效性或除对人类重要外还与动物有关的膳食补充剂。本发明的另一方面是提供乳香衍生的生物增强剂，用于提高一个或多个生物成分或功能性成分的生物利用度。 本发明的另一方面是提供乳香衍生的生物增强剂，用于提高一个或多个乳香衍生组分的生物利用度。本发明的另一方面是提供乳香衍生的生物增强剂，用于提高一个或多个姜黄衍生组分的生物利用度。本发明的另一方面是提供利用乳香衍生的生物增强剂提高生物制剂的生物利用度的方法。本发明的另一方面是提供通过一个或多个机制发挥作用的生物增强剂，其中的机制包括提高生物利用度、提高血清浓度、改善胃肠道吸收、改善系统利用和改善某些生物屏障例如呼吸道粘膜、尿道粘膜、血脑屏障和皮肤之间的交叉连通。本发明的另一方面是提供乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)及来自于乳香属树胶脂的乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)的生物增强剂，其中该树胶脂可从选自于齿叶乳香树、卡氏乳香树和乳香枸树的乳香种的一个或多个中获得。本发明的另一方面是提供用于在需要的温血动物中生物提高生物制剂的活性的组合物。本发明的另一方面是提供用于在需要的温血动物中提高营养或饮食成分的生物利用度的组合物，其含有乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)及乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)。营养/饮食上可接受的试剂包括一个或多个成分，该成分选自植物化学物质、促智剂、抗肥胖剂、抗炎剂、抗血脂剂、抗关节炎剂、抗糖尿病剂、抗微生物剂、抗真菌剂、抗肿瘤剂、抗高血压药物、镇痛剂、抗血小板聚集剂、抗动脉粥样硬化剂、抗氧化剂、抗血栓形成剂、抗菌剂、抗抗疟疾剂、抗骨质疏松剂、益生菌剂、抗真菌剂、免疫增效剂、抗病毒剂、抗组胺剂、肌肉松弛剂、抗抑制剂、催眠剂及它们的盐。本发明的另一方面是提供用于提高一个或多个生物成分的组合物，该生物成分选自从植物/动物/微生物中合成/半合成的生物活性成分、功能性成分、中草药成分、膳食补充剂、营养物质、抗氧化剂、维生素、矿物质、氨基酸和油及它们的混合物。所述功能性成分包括选自营养物质、膳食补充剂、营养成分、中草药成分、植物化学物质、动物蛋白、葡萄糖胺、软骨素、植物蛋白质、水果提取物、动物提取物、藻类提取物、益生菌和它们的盐。
所述中草药成分包含一个或多个成分，该成分选自衍生于睡爺、假马齿觅、乳香种、姜黄种、积雪草、绒毛戴星草、番荔枝、全缘叶全翅榆、萎叶、双花扁豆、辣木和九里香的抽提物/分馏物/植物化学物质及它们的盐。所述抗氧化剂包含一个或多个成分，选自维生素A、维生素C、维生素Ε、α -胡萝卜素、反β-胡萝卜素、β隐黄质、番茄红素、叶黄素/玉米黄质、松树皮生物类黄碱醇复合物、锗、硒和锌。所述维生素包含一个或多个水溶性维生素，选自维生素BI、维生素Β2、烟酰胺、维生素Β6、维生素Β12、叶酸和维生素C ;脂溶性维生素，选自维生素Α、维生素D、维生素E和维生素K。所述矿物质包含一种或多种选自钙、铁、锌、钒、硒、铬、碘、钾、锰、铜和镁的矿物质。所述氨基酸包含一种或多种选自赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨 酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、L-硒代蛋氨酸及其混合物的氨基酸。所述油包含一个或多个选自ω-3脂肪酸、亚麻籽油、鱼油、磷虾油、精油和挥发油的油。所述乳香衍生化合物/植物化学物的生物活性可以通过生物增强剂提高，包括分馏提取物标准化为一个或多个乳香酸，选自α-乳香酸、β_乳香酸、3-0-乙酰基-α乳香酸、3-0-乙酰基-β乳香酸、3-0-乙酰基-11-酮基- α -乳香酸、11-酮基-β -乳香酸和3-0-乙酰基-11-酮基-β -乳香酸。本发明的另一方面是提供生物增强剂，选自乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)和来自乳香胶树脂的乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)用于提高提取物/分馏物特别是标准化的3-0-乙酰基-11-酮基-β -乳香酸(AKBA)的生物利用度。本发明的另一方面是提供乳香衍生的制剂和组合物，用于提高衍生于乳香物种的植物化学物质的生物利用度，包括但不限于乳香酸，选自α-乳香酸、β-乳香酸、3-乙酰基-α乳香酸、3-乙酰基-β乳香酸、3-乙酰基-11-酮基-α-乳香酸、及3-0-乙酰基-Ii-酮基-β -乳香酸或它们的混合物。用于制备所述油(BOIL)或挥发性油(BVOIL)或来自于树胶脂的低极性树胶脂提取物(BLPRE)的乳香树种包括一个或多个树种，选自选自齿叶乳香树(此■wdhaserrata)、卡氏乳香树 Uioswellia carter! i )、乳香枸树 Uioswellia papyri fera) ^ 埃米尔乳香树(Moswelli a ameer ο )、布拉塔乳香树(Moswelli a bulla ia )、达热立乳香树(.Boswellia dalzi)、迪奥斯科里德乳香树 iBoswellia clioscorides )、麦草乳香树(Boswellia elonga ia )、科普特乳香树 QBoswellia frereana )、拉拉乳香树 QBoswellianana )、野乳香树(Moswellia neglec ia )、欧伽登斯乳香树{Boswellia ogadensi51)、皮罗塔乳香树iBoswellia pirottae、、拍拍维拉乳香树(JioswelIia popoviana)、索比亚乳香树 iBoswellia ri vae )、神圣乳香树(Moswellia sacra )和索科特拉乳香树(Moswelliasocotrana )。本发明的另一方面是提供乳香油或乳香挥发性油或乳香低极性树胶脂提取物用于提高一个或多个姜黄属衍生的提取物/分馏物/组分/植物化学物质的生物利用度，通过生物增强剂提高，包括分馏提取物标准化的姜黄素、去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素、去甲基姜黄素、二去甲基姜黄素、四氢姜黄素、四氢去甲氧基姜黄素、四氢二去甲氧基姜黄素、芳姜黄酮或它们的混合物。本发明的另一方面是提供生物增强剂，选自乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)和来自乳香胶树脂的乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)用于提高提取物/分馏物特别是标准化的姜黄素或去甲氧基姜黄素或二去甲氧基姜黄素或它们的混合物的生物利用度。本发明的另一方面是提供乳香衍生的生物增强剂及用于提高衍生自姜黄属的一个或多个植物化学物质的生物利用度，选自姜黄素、去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素、去甲基姜黄素、二去甲基姜黄素、四氢姜黄素、四氢去甲氧基姜黄素、四氢二去甲氧基姜黄素、芳姜黄酮或它们的混合物。能被生物增强的姜黄素衍生的组分衍生自姜黄{Curcuma longa)、mGurcurmaroma iica )、家郁金(Curcuma domesiica )、莪术(Curcuma aeruginosa )、川郁金(Curcumaalbicoma )、|^可1匕伏^爱姜黄(Curcuma albiflora)、姜荷花(Curcuma alismatifolia、、 温郁金XCurcuma angus ti folia') ^ 大莪靠XCurcuma elata、、镑色莪太{Curcumaferruginea.)、黄花姜黄父 Curcuma fl a vi fl ora ) > TjS ^ H τ|^ (Curcuma yunnanensis )及莪术(.Curcuma zedoaria)。本发明的另一方面是提供获得乳香油(BOIL)的典型方法，包括
a)获取一种或多种植物的树胶脂，所述植物选自但不限于齿叶乳香树或卡氏乳香树或/乳香枸树或它们的混合物，
b)利用水不溶性有机溶剂萃取树胶脂，
c)仔细过滤提取物以移除不溶性的树脂材料，
d)利用碱水溶液如氢氧化钾水溶液反复洗涤有机溶剂提取物，
e)利用水和盐水洗涤有机层，
f)在真空和高温下蒸发有机层以得到油状残留物(BOIL)。本发明的另一方面是提供获得乳香挥发性油(BVOIL)的典型方法，包括
a)获取乳香的树胶脂，
b)从所述树胶脂中或通过蒸汽蒸馏或在高度真空和温度下蒸馏来分离出挥发性油组分，以得到乳香挥发性油分馏物(BV0IL)。c)可替换地，BVOIL分馏物通过上述的在高度真空和温度下真空蒸馏的方式从BOIL分馏物中分离出来。本发明的另一方面是提供制备乳香低极性树胶脂提取物(BVOIL)的典型方法，包括
a)利用水不溶性有机溶剂萃取乳香树种的树胶脂，并仔细过滤提取物以移除不溶性的树脂材料，
b)利用碱水溶液如氢氧化钾水溶液反复洗涤有机溶剂提取物，
c)利用水和盐水洗涤碱洗后获得的有机层，
d)在真空和高温下蒸发所述有机层以得到油状残留物，
e)从所述油状残留物中移除挥发性化合物以得到乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)。用于萃取的水不溶性有机溶剂非限制性地选自I，2 -二氯乙烷、正己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、甲基异丁基酮(MIBK)或它们的合适组合。用于洗涤有机溶剂提取物的碱水溶液选自于组I或II组金属氢氧化物，非限制性地包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙和氢氧化镁或它们的混合物。另一方面，一种供选择的制备BLPRE的方法包括
a)准备乳香树胶脂的醇类或水合醇类提取物，
b )在碱水溶液和水不溶性有机溶剂之间分离出醇类提取物， c )分离有机溶剂层，然后蒸馏有机层，获得一种油性残留物，
d)然后在高度真空和高温下将所述的油性残留物中的挥发性化合物去除，获得BLPRE
O
另一方面，还有一种供选择的制备乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)的方法，包括
a)用醇类或水合醇类提取乳香树胶脂；
b)蒸馏有机溶剂至总固体的最佳水平，然后
c)将pH值调节为碱性，优选为pH9-12，
d)利用有机溶剂重复提取溶液，
e)在真空及高温下蒸发有机溶剂，得到油状残留物，
f)在高度真空和高温下从所述油状残留物中蒸发挥发性化合物，得到BLPRE。提取中使用的醇类非限制性地选自甲醇、乙醇和丙醇或它们的合适组合。另一方面，本发明提供来自于齿叶乳香树的乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)，其中所述提取物包括一个或多个植物化学标记化合物，非限制性地选自愈创奥醇(guiol)(I)、西松烧酹醇(nephthenol) (2)、锯缘青蟹醇(serratol) (3)、二職 X (diterpene X)
(4)、羽扇豆醇(Iupeol ) (5)、齐墩果-12-烯-3 β -醇(olean-12-ene_3 β-ol) (6)、齐墩果-12-烯 _3 α -醇(olean-12-ene_3 α -οI)(7)、羊毛留 _8，24- 二烯-3 α -醇(lanosta-8，24-diene_3 a-ol) (8)和乌苏-12-烯 _3 α -醇(urs-12-ene_3 a-ol) (9)。另一方面，本发明提供选择性地移除酸性和挥发性化合物后获得的乳香低极性树胶脂提取物。含有生物增强剂和生物制剂的本发明的组合物通过口服、经皮肤、静脉内、皮下、腹膜内、直肠给药、肌肉内、或任何合适的方式给予温血动物。在温血动物中生物增强剂的有效的每日剂量是在0. 001-1500 mg/kg体重的范围。在温血动物中生物增强剂的有效的每日剂量是在0. 01-500 mg/kg体重的范围。在温血动物中生物增强剂的有效的每日剂量是在0. 1-150 mg/kg体重的范围。在温血动物中生物增强剂的有效的每日剂量是在I. 5-15 mg/kg体重的范围。实施例
实施例I:
制备乳香油(BOIL)的方法包括
制备乳香油的方法包括
a)获取一种或多种植物的树胶脂，所述植物选自但不限于齿叶乳香树或卡氏乳香树或乳香枸树或它们的混合物，
b)利用水不溶性有机溶剂萃取树胶脂，c)仔细过滤提取物以移除不溶性的树脂材料，
d)利用碱水溶液如氢氧化钾水溶液反复洗涤有机溶剂提取物，
e)利用水和盐水洗涤有机层，及
f)在真空和高温下蒸发有机层，得到油状残留物(BOIL)。实施例2:
制备乳香挥发性油(BVOIL)的方法
制备乳香挥发性油的方法包括
a)获取一种或多种植物的树胶脂，所述植物选自但不限于齿叶乳香树或卡氏乳香树或 乳香枸树或它们的混合物，
b)从所述树胶脂中或通过蒸汽蒸馏或在高度真空、低温下蒸馏来分离出挥发性油组分，得到乳香挥发性油(BV0IL)。实施例3:
齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BsLPRE)的制备
将齿叶乳香树树胶脂(100 g)分散于600 mL的甲基异丁基酮(MIBK)溶剂中并在室温下搅拌60min。不溶性树胶材料通过过滤分离。利用2%氢氧化钾溶液(3*200 mL)反复萃取MIBK溶液以除去酸性化合物。随后相继利用水(400 mL)和盐水(200 mL)洗涤MIBK层。在60 - 70° C减压下蒸发MIBK层，然后在75 - 110° C和高度真空下将挥发性组分从油状残留物中除去，得到粘性油状的齿叶乳香树低极性树胶脂提取物或BsLPRE (12 g)。可替换地，从齿叶乳香树中收集的树胶脂(250 g)利用甲醇(300 mL*3)萃取并浓缩收集到的甲醇提取物。将残留物(50 g)溶解于乙酸乙酯(400 mL)中并利用IN氢氧化钾(3 *100 mL)萃取。水(2*200 mL)和盐水(200 mL)洗涤有机层然后蒸发以得到乳香油。在高度真空及75-110° C下从所述油中蒸发掉挥发性化合物以得到22 g的BsLPRE。在标准硅胶色谱柱中对BsLPRE使用从己烷至己烷/乙酸乙酯混合物至乙酸乙酯的极性增强的溶剂。基于TLC相同的分馏物集合并将集合的分馏物分别反复通过利用己烷/乙酸乙酯或己烷/丙酮的混合物作为洗液的硅胶柱以获得纯净的化合物。一些不纯的分馏物进一步通过预备的反相C18硅胶柱的HPLC从而获得纯净的化合物。通过1H核磁共振、13C核磁共振、DEPT, HSQC和HMBC和大量的光谱数据的分析确定各个化合物的结构，然后将已知化合物的数据与这些数据进行比较。鉴别出如图I所示的九种主要化合物为愈创奥醇(guiol) (I)、西松烧酹醇(nephthenol) (2)、锯缘青蟹醇(serratol)
(3)、二職 X (diterpene X) (4)、羽扇豆醇(Iupeol ) (5)、齐墩果-12-烯-3 β -醇(olean-12-ene_3 β -ol) (6)、齐壤果_12-稀-3<1-醇(olean-12-ene_3 α-ο ) (7)、羊毛甾-8，24-二烯-3 α-醇(lanosta-8, 24-diene_3 a-01) (8)和乌苏-12-烯 _3 α -醇(urs-12-ene-3a-ol) (9)。然后，采用HPLC方法利用这些纯的化合物来标准化齿叶乳香树低极性树胶脂提取物(BsLPRE)。基于HPLC和保留时间(Rt)分析法对BsLPRE的新的组合物的鉴别分析如表I所示。
权利要求
1.一种生物增强剂，选自来自于乳香种的树胶脂的原乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)和乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)或它们的混合物，用于提高生物制剂的生物利用度。
2.包含一个或多个成分并结合生物制剂的一种组合物，成分选自来自于乳香树种的原乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)和乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)或它们的混合物，用于提高所述生物制剂的生物利用度。
3.如权利要求I或2所述的制剂或组合物，其中所述乳香树胶脂来自于一个多个乳香树种，选自齿叶乳香树、卡氏乳香树及乳香枸树。
4.如权利要求I或2所述的生物增强剂或组合物，用于在需要的温血动物或哺乳动物中提高生物制剂的生物增强活性。
5.如权利要求4所述的生物增强剂或组合物，其中所述生物制剂选自生物活性成分、功能性成分、中草药成分、膳食补充剂、营养物质、抗氧化剂、维生素、矿物质、氨基酸和油或它们的混合物。
6.如权利要求5所述的生物增强剂或组合物，其中所述生物活性成分选自饮食上可接受的活性成分、化合物、提取物、分馏物、植物化学物质、合成药物或它们的盐或其混合物。
7.如权利要求5所述的生物增强剂或组合物，其中所述功能性成分包括一个或多个成分，选自中草药成分、膳食补充剂、抗氧化剂、维生素、矿物质、氨基酸、脂肪酸、精油、鱼油、酶、葡糖胺、软骨素和益生菌或它们的盐或其混合物。
8.如权利要求6或7所述的生物增强剂或组合物，其中所述生物活性成分和功能性成分来自于植物、动物、微生物，通过合成或半合成得到，用于提高生物利用度。
9.如权利要求5或7所述的生物增强剂或组合物，其中中草药成分包括选自提取物/分馏物/植物化学物质及它们的盐的一个或多个成分，来自于睡茄、假马齿苋、乳香种、姜黄种、积雪草、绒毛戴星草、莽吉柿、番荔枝、全缘叶全翅榆、萎叶、双花扁豆、辣木和九里香或它们的混合物。
10.如权利要求9所述的生物增强剂或组合物，其中来自于乳香树种的提取物/分馏物/植物化学物质包括标准化的一个或多个乳香酸的提取物或分馏物，所述乳香酸选自a-乳香酸、β -乳香酸、3-0-乙酰基-α乳香酸、3-0-乙酰基-β乳香酸、3_0_乙酰基-11-酮基-α -乳香酸和3-0-乙酰基-11-酮基_β -乳香酸或它们的混合物。
11.如权利要求9所述的生物增强剂或组合物，其中来自于乳香树种的提取物/分馏物/植物化学物质包括提取物或分馏物标准化的3-0-乙酰基-11-酮基-β -乳香酸。
12.如权利要求9所述的生物增强剂或组合物，其中来自于乳香树种的植物化学物质包括乳香酸，所述乳香酸选自α-乳香酸、乳香酸、3-0-乙酰基-α乳香酸、3-0-乙酰基-β乳香酸、3-0-乙酰基-11-酮基-α -乳香酸和3-0-乙酰基-11-酮基-β -乳香酸或它们的混合物。
13.如权利要求9所述的生物增强剂或组合物，其中来自于姜黄属的提取物/分馏物/组分/植物化学物质包括提取物或分馏物标准化的一个或多个组分的，选自姜黄素、去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素、去甲基姜黄素、二去甲基姜黄素、四氢姜黄素、四氢去甲氧基姜黄素、四氢二去甲氧基姜黄素和芳姜黄酮或它们的混合物。
14.如权利要求9所述的生物增强剂或组合物，其中姜黄属衍生的提取物或分馏物尤其是标准化的姜黄素。
15.如权利要求9所述的生物增强剂或组合物，其中姜黄属衍生的植物化学物质包括姜黄素、去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素、去甲基姜黄素、二去甲基姜黄素、四氢姜黄素、四氢去甲氧基姜黄素、四氢二去甲氧基姜黄素和芳姜黄酮或它们的混合物。
16.如权利要求5和7所述的生物增强剂或组合物，其中所述抗氧化剂包含一个或多个成分，选自维生素A、维生素C、维生素Ε、α-胡萝卜素、反β-胡萝卜素、β隐黄质、番茄红素、叶黄素/玉米黄质、松树皮生物类黄碱醇复合物、锗、硒和锌。
17.如权利要求5和7所述的生物增强剂或组合物，其中所述维生素包含一个或多个水溶性维生素，选自维生素BI、维生素Β2、烟酰胺、维生素Β6、维生素Β12、叶酸和维生素C ;月旨溶性维生素,选自维生素Α、维生素D、维生素E和维生素K。
18.如权利要求5和7所述的生物增强剂或组合物，其中所述矿物质包含一种或多种，选自I丐、铁、锌、银、硒、铬、碘、钾、猛、铜和镁。
19.如权利要求5和7所述的生物增强剂或组合物，其中所述氨基酸包含一种或多种，选自赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、L-硒代蛋氨酸或其混合物。
20.如权利要求5和7所述的生物增强剂或组合物，其中所述所述油包含一种或多种，选自ω-3脂肪酸、亚麻籽油、鱼油、精油和挥发油。
21.如权利要求3所述的生物增强剂或组合物，其中所述可用于制备所述油或挥发油或低极性树胶脂提取物的乳香树种来自于如权利要求3的树胶脂，选自埃米尔乳香树、布拉塔乳香树、达热立乳香树、迪奥斯科里德乳香树、麦草乳香树、科普特乳香树、拉拉乳香树、野乳香树、欧伽登斯乳香树、皮罗塔乳香树、珀珀维拉乳香树、索比亚乳香树、神圣乳香树和索科特拉乳香树。
全文摘要
本发明涉及乳香衍生的分馏物结合生物制剂用于提高生物制剂的生物利用度，乳香衍生的分馏物选自非酸性乳香低极性树胶脂提取分馏物(BLPRE)、乳香挥发性油分馏物(BVOIL)或含有BLPRE和BVOIL的乳香油分馏物(BOIL)。本发明也提供含有至少一个组分并结合生物制剂的组合物用于提高生物制剂的生物利用度，组分选自乳香油(BOIL)、乳香挥发性油(BVOIL)及乳香低极性树胶脂提取物(BLPRE)。
文档编号A01N45/00GK102905529SQ201180026213
公开日2013年1月30日 申请日期2011年5月26日 优先权日2010年5月30日
发明者G·R·古卡拉吉, R·R·古卡拉吉, V·K·R·R·古卡拉吉, T·古兰扣提, K·布帕蒂拉吉, V·K·R·阿鲁瑞 申请人:莱拉营养食品有限公司