专利名称：一种广豆根组培种苗工厂化生产方法
技术领域：
本发明涉及一种植物组培种苗工厂化生产方法，特别是一种广豆根组培种苗工厂化生产方法。
背景技术：
广豆根，也称山豆根、南豆根，为豆科植物越南槐(Sophora tonkinensisGapnep.)的干燥根及根茎，分布于我国南部，以广西产量最大。具有清火解毒、消肿止痛等 功效，可以治疗喉痈、喉风、喉痹、牙龈肿痛、喘满热咳、肝炎、便秘、黄疸、下痢、痔疾、秃疮、疥癣及蚊、虫、犬咬伤等。医药工业用广豆根作为原料，大量研制开发治疗肝炎的针剂、咽喉肿痛的片剂以及抗肿瘤的中成药。广豆根地域分布范围相当有限，且常零星生长于石山岩缝之中，随着市场需求量的不断增加，野生广豆根资源濒临枯竭。在自然条件下，广豆根主要依靠种子进行繁育，但在开花结荚期广豆根的病虫害严重，且种子成熟时自然脱落的特性常造成种子产量低，生产上难以实现大面积栽培。采用生物技术组织培养技术，是最为快速有效地生产广豆根种苗的途径，但目前广豆根的组织培养体系存在周期长、种苗质量偏低、成活率不高等问题，通过本发明的生产工艺，可以大大缩短生产周期，减低生产成本，提高种苗质量，从而提高种苗成活率及药材产量。
发明内容
本发明的目的是提供一种广豆根组培种苗工厂化生产方法，它能够缩短生产周期，降低生产成本,提高种苗质量,从而提高种苗成活率及药材产量。本发明通过以下技术方案达到上述目的一种广豆根组培种苗工厂化生产方法，该方法的具体步骤和操作条件为
(I)繁殖复壮一体化培养繁殖复壮一体化培养基为MS+1. (Tl. 5mg/L BA+ 0. 3mg/L KT+ 0. 3mg/L IAA +0. 2^0. 5mg/L NAA，繁殖复壮一体化培养方法为将广豆根种子消毒后接种到MS+1. 5mg/L BA+0. 3mg/L KT+ 0. 3mg/L IAA繁殖培养基上培养获得丛生芽，将丛生芽切割成I. 5^2. 5cm的带芽茎段，平铺在繁殖复壮一体化固体培养基面上，再用镊子将茎段的1/2压入到培养基内，接种完毕后转入培养室内培养15天，培养条件为培养温度23^27° C，光照强度15001uX，光照时间为8小时/天，然后再转入散射自然光照下培养15天，培养温度25 28° C，光照强度400(T50001uX。获得叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条。(2)生根炼苗同步化培养生根炼苗同步化培养基为MS+2. Omg/LNAA+ 0. 2mg/LIBA +0. 2mg/LABT，生根炼苗同步化培养方法为将繁殖复壮一体化培养获得的叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条剪下，接种到生根炼苗同步化培养基中，在室内培养7天，新根开始萌发后转入玻璃大棚，进行生根炼苗同步化培养25天，获得根系发达，适宜移栽的完整植株，其中室内培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001UX，光照时间为10小时/天；大棚培养条件为温度23 30° C，光照为自然光，大棚上部覆盖一层遮阳网，遮光度为15 30%，相对湿度为 85 90%。(3)生根苗的移栽在大棚形成完整的植株后，将生根苗的瓶盖打开，取出生根苗，洗净根部残留培养基，于阴天傍晚移栽至平整精耕的育苗床上，育苗要求相对湿度为9(T95%，温度25 30° C，遮光度6(T75%，加盖两层黑色遮阳网，基质为沙子泥土 有机肥=20:75:5 ;或移栽至育苗大棚，大棚内湿度为90 95%，温度25 30° C，遮光度60 75%，基质为沙子泥土 有机肥=20:75:5。其中，MS为MS基本培养基，BA为6_苄基腺嘌呤，IAA为吲哚乙酸，NAA为萘乙酸，KT为激动素，IBA为吲哚丁酸，ABT为生根粉。本发明的突出优点在于
(I)通过生物技术对广豆根进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的广豆根幼苗，显著提高了广豆根种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。(2)通过繁殖复壮一体化培养、生根炼苗同步化培养两步培养法进行广豆根组培苗的工厂化生产，缩短了培养时间，减少培养步骤，降低了培养成本，提高了广豆根组培种苗的生产效率。(3)在繁殖复壮一体化培养基上培养获得的无菌枝条健康粗壮、无玻璃化现象，展叶良好，木质化程度较高，接种到生根培养基上生根情况良好，生根率在96%以上，移栽育苗大棚后成活率在98%以上。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。实施例I
一种广豆根组培种苗工厂化生产方法，包括以下步骤
(I)繁殖复壮一体化培养繁殖复壮一体化培养基为MS+1. Omg/L BA+ 0. 3mg/L KT+
0.3mg/L IAA +0. 2mg/L NAA。繁殖复壮一体化培养方法为将广豆根种子消毒后接种到MS+1. 5mg/L BA+0. 3mg/L KT+0. 3mg/L IAA繁殖培养基上培养获得丛生芽，将丛生芽切割成
1.5^2. 5cm的带芽茎段，平铺在繁殖复壮一体化固体培养基面上，再用镊子将茎段的1/2压入到培养基内，使其能够充分吸收培养基中的营养。接种完毕后转入培养室内培养15天，培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001uX，光照时间为8小时/天。然后再转入散射自然光照下培养15天，培养温度25 28° C，光照强度400(T50001uX。获得叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条。(2)生根炼苗同步化培养生根炼苗同步化培养基为MS+2. Omg/L NAA+ 0. 2mg/LIBA +0. 2mg/L ABT。生根炼苗同步化培养方法为将繁殖复壮一体化培养获得的叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条剪下，接种到生根炼苗同步化培养基中，在室内培养7天，新根开始萌发后转入玻璃大棚，进行生根炼苗同步化培养25天，获得根系发达，适宜移栽的完整植株。其中室内培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001UX，光照时间为10小时/天；大棚培养条件为温度23 30° C，光照为自然光，大棚上部覆盖一层遮阳网，遮光度为15 30%，相对湿度为85 90%。(3)生根苗的移栽在大棚形成完整的植株后，将生根苗的瓶盖打开，取出20瓶生根苗，每瓶15株,共300株,洗净根部残留培养基后统计生根植株为292株,生根率为
97.3%。于阴天傍晚将292株生根苗移栽至育苗大棚，大棚内湿度为90、5%，温度25 30° C，遮光度6(T75%，基质为沙子泥土 有机肥=20:75:5。30天后统计成活植株为288株，成活率为98. 6%o
实施例2
一种广豆根组培种苗工厂化生产方法，包括以下步骤
(I)繁殖复壮一体化培养繁殖复壮一体化培养基为MS+1. 5mg/L BA+ 0.3 mg/LKT+0. 3mg/L IAA +0. 4mg/L NAA。繁殖复壮一体化培养方法为将广豆根种子消毒后接种到MS+1. 5mg/L BA+0. 3mg/L KT+ 0. 3mg/L IAA繁殖培养基上培养获得丛生芽，将丛生芽切割成I. 5^2. 5cm的带芽茎段，平铺在繁殖复壮一体化固体培养基面上，再用镊子将茎段的1/2压入到培养基内，使其能够充分吸收培养基中的营养。接种完毕后转入培养室内培养15天，培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001uX，光照时间为8小时/天。然后再转入散射自然光照下培养15天，培养温度25 28° C，光照强度400(T50001uX，获得叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条。(2)生根炼苗同步化培养生根炼苗同步化培养基为MS+2. Omg/L NAA+ 0. 2mg/LIBA +0. 2mg/L ABT。生根炼苗同步化培养方法为将繁殖复壮一体化培养获得的叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条剪下，接种到生根炼苗同步化培养基中，在室内培养7天，新根开始萌发后转入玻璃大棚，进行生根炼苗同步化培养25天，获得根系发达，适宜移栽的完整植株。其中室内培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001UX，光照时间为10小时/天；大棚培养条件为温度23 30° C，光照为自然光，大棚上部覆盖一层遮阳网，遮光度为15 30%，相对湿度为85 90%。(3)生根苗的移栽在大棚形成完整的植株后，将生根苗的瓶盖打开，取出20瓶生根苗，每瓶15株,共300株,洗净根部残留培养基后统计生根植株为295株,生根率为
98.3%。于阴天傍晚将295株生根苗移栽至育苗大棚，大棚内湿度为90、5%，温度25 30° C，遮光度6(T75%，基质为沙子泥土 有机肥=20:75:5。30天后统计成活植株为293株，成活率为99. 3%o实施例3
一种广豆根组培种苗工厂化生产方法，包括以下步骤
(I)繁殖复壮一体化培养繁殖复壮一体化培养基为MS+1. 5mg/LBA+ 0.3 mg/L KT+
0.3mg/L IAA +0. 5mg/L NAA。繁殖复壮一体化培养方法为将广豆根种子消毒后接种到MS+1. 5mg/L BA+0. 3mg/L KT+0. 3mg/L IAA繁殖培养基上培养获得丛生芽，将丛生芽切割成
1.5^2. 5cm的带芽茎段，平铺在繁殖复壮一体化固体培养基面上，再用镊子将茎段的1/2压入到培养基内，使其能够充分吸收培养基中的营养。接种完毕后转入培养室内培养15天，培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001uX，光照时间为8小时/天。然后再转入散射自然光照下培养15天，培养温度25 28° C，光照强度400(T50001uX，获得叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条。
(2)生根炼苗同步化培养生根炼苗同步化培养基为MS+2. Omg/L NAA+ 0. 2mg/LIBA +0. 2mg/L ABT。生根炼苗同步化培养方法为将繁殖复壮一体化培养获得的叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条剪下，接种到生根炼苗同步化培养基中，在室内培养7天，新根开始萌发后转入玻璃大棚，进行生根炼苗同步化培养25天，获得根系发达，适宜移栽的完整植株。其中室内培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001UX，光照时间为10小时/天；大棚培养条件为温度23 30° C，光照为自然光，大棚上部覆盖一层遮阳网，遮光度为15 30%，相对湿度为85 90%。(3)生根苗的移栽在大棚形成完整的植株后，将生根苗的瓶盖打开，取出20瓶生根苗，每瓶15株,共300株,洗净根部残留培养基后统计生根植株为296株,生根率为 98.6%。于阴天傍晚将296株生根苗移栽至育苗大棚，大棚内湿度为90、5%，温度25 30° C，遮光度6(T75%，基质为沙子泥土 有机肥=20:75:5。30天后统计成活植株为290株，成活率为98. 0%。实施例4
一种广豆根组培种苗工厂化生产方法，包括以下步骤
(I)繁殖复壮一体化培养繁殖复壮一体化培养基为MS+1. 2mg/LBA+ 0.3 mg/L KT+
0.3mg/L IAA +0. 4mg/LNAA。繁殖复壮一体化培养方法为将广豆根种子消毒后接种到MS+1. 5mg/L BA+0. 3mg/L KT+ 0. 3mg/L IAA繁殖培养基上培养获得丛生芽，将丛生芽切割成I. 5^2. 5cm的带芽茎段，平铺在繁殖复壮一体化固体培养基面上，再用镊子将茎段的1/2压入到培养基内，使其能够充分吸收培养基中的营养。接种完毕后转入培养室内培养15天，培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001uX，光照时间为8小时/天。然后再转入散射自然光照下培养15天，培养温度25 28° C，光照强度约为400(T50001uX，获得叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条。(2)生根炼苗同步化培养生根炼苗同步化培养基为MS+2. Omg/LNAA+ 0. 2mg/LIBA +0. 2mg/LABT。生根炼苗同步化培养方法为将繁殖复壮一体化培养获得的叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条剪下，接种到生根炼苗同步化培养基中，在室内培养7天，新根开始萌发后转入玻璃大棚，进行生根炼苗同步化培养25天，获得根系发达，适宜移栽的完整植株。其中室内培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001UX，光照时间为10小时/天；大棚培养条件为温度23 30° C，光照为自然光，大棚上部覆盖一层遮阳网，遮光度为15 30%，相对湿度为85 90%。(3)生根苗的移栽在大棚形成完整的植株后，将生根苗的瓶盖打开，取出20瓶生根苗，每瓶15株,共300株，洗净根部残留培养基后统计生根植株为290株，生根率为96. 7%。将290株生根植株于阴天傍晚移栽至育苗大棚，大棚内湿度为90、5%，温度25 30° C，遮光度60 75%，基质为沙子泥土有机肥=20:75:5。30天后统计成活植株为286株，成活率为98. 6%。
权利要求
1. 一种广豆根组培种苗工厂化生产方法，其特征在于该方法的具体步骤和操作条件为 (1)繁殖复壮一体化培养繁殖复壮一体化培养基为MS+l.(Tl.5mg/LBA+ 0.3 mg/L KT+ 0. 3mg/L IAA +0. 2^0. 5mg/L NAA，繁殖复壮一体化培养方法为将广豆根种子消毒后接种到MS+1. 5mg/L BA+0. 3mg/L KT+ 0. 3mg/L IAA繁殖培养基上培养获得丛生芽，将丛生芽切割成I. 5^2. 5cm的带芽茎段，平铺在繁殖复壮一体化固体培养基面上，再用镊子将茎段的1/2压入到培养基内，接种完毕后转入培养室内培养15天，培养条件为培养温度23^27° C，光照强度15001uX，光照时间为8小时/天，然后再转入散射自然光照下培养15天，培养温度25 28° C，光照强度400(T50001uX，获得叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条， (2)生根炼苗同步化培养生根炼苗同步化培养基为MS+2.Omg/L NAA+0. 2mg/L IBA +0. 2mg/L ABT，生根炼苗同步化培养方法为将繁殖复壮一体化培养获得的叶片展开、木质化程度较高的健壮枝条剪下，接种到生根炼苗同步化培养基中，在室内培养7天，新根开始萌发后转入玻璃大棚，进行生根炼苗同步化培养25天，获得根系发达，适宜移栽的完整植株，其中室内培养条件为培养温度23 27° C，光照强度15001UX，光照时间为10小时/天；大棚培养条件为温度23 30° C，光照为自然光，大棚上部覆盖一层遮阳网，遮光度为15 30%，相对湿度为85 90%， (3)生根苗的移栽在大棚形成完整的植株后，将生根苗的瓶盖打开，取出生根苗，洗净根部残留培养基，于阴天傍晚移栽至平整精耕的育苗床上，育苗要求相对湿度为90、5%，温度25 30° C，遮光度6(T75%，基质为沙子泥土 有机肥=20:75:5 ;或移栽至育苗大棚，大棚内湿度为90 95%，温度25 30° C，遮光度60 75%，基质为沙子泥土 有机肥=20:75:5。
全文摘要
一种广豆根组培种苗工厂化生产方法，包括如下步骤广豆根组培种苗繁殖复壮、生根驯化以及移栽步骤。采用本发明能够在短时间内提供大量优质的、适宜山区栽培、移栽成活率达98%以上的广豆根组培种苗，以满足生产上的需要。
文档编号A01H4/00GK102715090SQ20121023879
公开日2012年10月10日 申请日期2012年7月11日 优先权日2012年7月11日
发明者李林轩, 缪剑华, 韦坤华, 韦范 申请人:广西壮族自治区药用植物园