专利名称：足茎毛兰组培快繁方法
技术领域：
本发明属于兰科植物的生物技术领域，特别是涉及一种足茎毛兰组培快繁方法。
背景技术：
足莖毛兰〔Eria coronaria (Lindl. ) Rchb. f.〕属兰科毛兰属附生植物，假鳞莖密集，圆柱形，叶长椭圆形或倒卵状椭圆形。花序顶生，通常上半部外弯，总状，略短于叶，具数花；花白色，唇瓣侧裂片有褐色脉，中裂片黄色；中萼片椭圆状披针形，侧萼片三角状披针形；花瓣矩圆状披针形，唇瓣矩圆形。花期10 —11月。生于林中树干或岩石上；海拔1300— 2000米。全世界共370种，我国有43种，贵州有8种，分布于海南、广西、贵州、云南南部至西北部和西藏东南部；贵州、云南和广西是我国野生足茎毛兰的自然分布中心。足茎毛兰花瓣洁白，清秀而唇瓣极富色彩变化，可作盆栽，供室内外装饰或插花材料，在毛兰属中极具重要的观赏价值，是一个正待开发的兰花种。·
由于人类对兰花资源的过度索取及生态环境的不断恶化，造成其野生种群数量下降，极具观赏开发价值的兰花几乎濒临灭绝，基于此，兰科植物所有野生种都在《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)附录I和II的保护范围之内，受到国际保护。野生状态的足茎毛兰繁殖困难，因其种子无胚乳，在野外需与真菌共生才能萌发，种子萌发率极低；传统的分株繁殖法，周期长，繁殖系数低，每年只能增殖I 3倍。采用组培快繁技术通常有利于解决其繁殖困难和种苗的不足，并在短期内提供大量种苗，以保护其野生种质资源和野生种群，为足茎毛兰的有效保护、产业开发，优良品种的培育及种源基地培育建设提供技术支撑。
发明内容
本发明的目的是在专门配制的培养基上，通过人工无菌播种的方法，经过原球茎体的获得、诱导分化、壮苗生根和试管苗移栽等繁殖步骤，获得原球茎及芽混合体，利用分化的小苗进行增殖，在短时间内获得大量整齐划一的试管苗，通过壮苗生根培养能形成完整植株。通过发明人的努力，完成了足茎毛兰组培快繁方法的研究工作。本发明足茎毛兰的组培快繁方法，其过程包括以下步骤
(I)外植体的建立选取生长健壮的足茎毛兰母株，在开花时进行人工授粉，选取人工授粉120天左右发育至基本成熟而未开裂的果实作为外植。(2)原球茎萌发阶段选用饱满的果实用75%的酒精浸泡30秒，置于O. 1%的升汞溶液中消毒20分种，无菌水冲洗4-5次，切开果实，用接种针将乳白色粉末状胚接种到1/2MS添加10%椰子乳的培养基上，20天左右形成原球茎。(3)增殖培养阶段为获得更多的种苗，利用原球茎接种在1/2MS附加6-苄基氨基嘌呤(6-BA)2毫克/升及α-奈乙酸(NAA)O. I毫克/升培养基上，经90天培养，形成芽的丛生植株。(4)壮苗生根阶段将长成的丛生植株分开，接种到添加吲哚乙酸(IBA) O. 2毫克/升的1/2MS培养基上培养，60天后长成具2-3条根、2-3片叶的完整植株。(5)练苗及移栽当足茎毛兰试管苗长至3-4厘米时，移栽前在温室中自然光照下炼苗10天左右，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入碎树皮基质中。温室保持15-25°c的温度、70%以上的湿度、78-80%的遮阴并通风，足茎毛兰即可正常生长，种苗的移栽成活率可达93%以上。通常15天浇一次有机肥(发酵的油枯水)或叶面肥，其浓度为水稀释1000倍质量比，薄肥勤施，并加强病虫害管护措施即可建立足茎毛兰种苗的规模化培育技术体系。本发明的有益效果是通过足茎毛兰组培快繁技术研究，可大大提高种苗的繁殖系数，获得品相高度一致的种苗，便于大规模的工厂化种植，此项技术可用于其它兰科植物的研究和开发，但必须具体情况具体分析，充分发掘研究各特种特殊情况，才能为其它珍稀植物的研究提供技术支撑，在珍稀植物的保护开发及可持续利用方面具有十分重要的意 义。
具体实施例方式实施例I
(I)外植体的建立选取生长健壮的足茎毛兰母株，在开花时进行人工授粉，选取人工授粉120天左右发育至基本成熟而未开裂的果实做为外植体。(2)原球茎萌发阶段选用饱满的果实用75%的酒精浸泡30秒，置于0.1%的升汞溶液中消毒20分种，无菌水冲洗4-5次，切开果实，用接种针将乳白色粉末状胚接种到1/2MS添加10%椰子乳的培养基上，20天左右形成原球茎。(3)增殖培养阶段为获得更多的种苗，利用原球茎接种在1/2MS附加6-苄基氨基嘌呤(6-BA)2毫克/升及α-奈乙酸(NAA)O. I毫克/升培养基上，经90天培养，形成芽的丛生植株，繁殖系数可达3-4。(4)壮苗生根阶段将长成的丛生植株分开，接种到添加吲哚乙酸(IBA) O. 2毫克/升的1/2MS培养基上培养，50天后长成具2-3条根、2-3片叶的完整植株。(5)练苗及移栽当足茎毛兰试管苗长至3-4厘米时，移栽前在温室中自然光照下炼苗10天左右，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入碎树皮基质中。温室保持15-25°c的温度、70%以上的湿度、78-80%的遮阴并通风，足茎毛兰即可正常生长，种苗的移栽成活率可达93%以上。通常15天浇一次有机肥(发酵的油枯水)或叶面肥1000倍，薄肥勤施，并加强病虫害管护措施即可建立足茎毛兰种苗的规模化培育技术体系，目前栽种足茎毛兰种苗I万株。本发明的有益效果是通过足茎毛兰组培快繁技术研究，可大大提高种苗的繁殖系数，获得品相高度一致的种苗，便于大规模的工厂化种植，此项技术可广泛用于其它兰科植物的研究和开发，并为其它珍稀植物的开发提供技术支撑，在珍稀植物的保护及可持续利用方面具有十分重要的意义。
权利要求
1.足茎毛兰的组培快繁方法，其特征是方法包括以下步骤 ①外植体的建立选取生长健壮的足茎毛兰母株，在开花时进行人工授粉，选取人工授粉120天左右发育至基本成熟而未开裂的果实作为外植； ②原球茎萌发阶段选用饱满的果实用75%的酒精浸泡30秒，置于O.1%的升汞溶液中消毒20分种，无菌水冲洗4-5次，切开果实，用接种针将乳白色粉末状胚接种到1/2MS添加10%椰子乳的培养基上，20天左右形成原球茎； ③增殖培养阶段为获得更多的种苗，利用原球茎接种在1/2MS附加6-苄基氨基嘌呤(6-BA)2毫克/升及α-奈乙酸(NAA)O. I毫克/升培养基上，经90天培养，形成芽的丛生植株； ④壮苗生根阶段将长成的丛生植株分开，接种到添加吲哚乙酸(IBA)O. 2毫克/升的1/2MS培养基上培养，60天后长成具2-3条根、2-3片叶的完整植株； ⑤练苗及移栽当足茎毛兰试管苗长至3-4厘米时，移栽前在温室中自然光照下炼苗10天左右，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入碎树皮基质中；温室保持15-25°C的温度、70%以上的湿度、78-80%的遮阴并通风，足茎毛兰即可正常生长，种苗的移栽成活率可达93%以上；通常15天浇一次有机肥(发酵的油枯水)或叶面肥，其浓度为水稀释1000倍质量比，薄肥勤施，并加强病虫害管护措施即可建立足茎毛兰种苗的规模化培育方法。
全文摘要
本发明公开了足茎毛兰组培快繁方法，方法包括以下步骤(1)外植体的建立，(2)原球茎萌发阶段，(3)增殖培养阶段，(4)壮苗生根阶段和(5)练苗及移栽；当足茎毛兰试管苗长至3-4厘米时，移栽前在温室中自然光照下炼苗10天左右后，温室保持15-25℃的温度、70%以上的湿度、78-80%的遮阴并通风，足茎毛兰即可正常生长，种苗的移栽成活率可达93％以上；本发明的有益效果是通过足茎毛兰组培快繁方法，可大大提高种苗的繁殖系数，获得品相高度一致的种苗，便于大规模的工厂化种植；对兰科植物的研究和开发，注意品种具体属性研究，再选用具体方法，在珍稀植物保护开发及可持续利用方面具有十分重要的意义。
文档编号A01H4/00GK102884979SQ20121034343
公开日2013年1月23日 申请日期2012年9月17日 优先权日2012年9月17日
发明者王莲辉, 姜运力, 冯育才, 潘德权, 李丛瑞 申请人:贵州省林业科学研究院