专利名称：一种诱导罗汉果组培块茎的方法
技术领域：
本发明涉及植物的组织培养技术，具体涉及一种诱导罗汉果组培块茎的方法。
背景技术：
罗汉果(Siraitiagrosvenori (Swingle)C. Jeffrey)是我国重要的特产中药材，其果实为药、食兼用果品，是仅次于甘蔗的第二大甜味剂原料，广泛用于中成药、保健食品、饮料、烹饪作料等的制作。因为罗汉果是雌雄异株，又花期不遇，加之花粉粘重且着生于花药不易被昆虫触及的地方，所以很难像普通的风媒花或虫媒花那样传粉，因此自然条件下，结果的机率极低(目前人工栽培仍然必须 人工授粉)。同时，罗汉果种子实生苗有70%左右为雄株，且要等到2 3年之后，开花时才能判定，生产上基本无实用价值。但是，罗汉果的习性是，到了秋季分枝藤蔓会向下垂，并迅速伸长，一经着地就会膨大变作指头大小的块茎(俗称“薯块”、“薯仔”)，可以顽强地越冬，来年萌发成为独立的新植株。这是罗汉果自然繁殖的重要方式。在人工栽培之后，演化成了人工压蔓，小“块茎”依然是罗汉果最重要的种源。然而，这些传统块茎容易传播病毒及其它病虫害，又难以大批量生产，无法满足现代规模化种植的需求。上世纪末无菌无毒的罗汉果组培苗研究成功，很快就取代传统块茎成为最重要的种源。但罗汉果组培苗在包装运输中容易损伤，尤其是遇到市场滞销时，更需要占用大量场地和人工护理，而且难以长时间存贮。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种诱导罗汉果组培块茎的方法。该方法简单易操作，可实现大批量生产，培育得到的罗汉果组培块茎无菌无毒，且便于运输和长时间存贮，有很强的市场适应性。本发明所述的诱导罗汉果组培块茎的方法，包括以下步骤I)按常规方法获得罗汉果脱毒组培苗；2)切去脱毒组培苗上部顶芽和下部带根节，取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；3)将分切得到的带腋芽单节茎段微扦插于改良MS固体培养基中培养90 100天，即得到所述的罗汉果组培块茎；其中，所述的改良MS固体培养基配方为MS+LFS O.1 1. Omg · L_1+SA O. 3 O. 8mg · L-1+ 鹿糖 5 12% ；所述的培养条件为温度昼/夜25/17 (±2) °C;光照周期昼/夜8 10h/16 14h ;光照强度1200 15001xo上述方法中步骤3)中，所述的改良MS固体培养基配方优选为MS+LFS O.1 1. Omg · L_1+SAO. 4 O. 6mg *L k 鹿糖 5 10%;进一步优选为MS+LFS O. 3 O. 8mg *L :+SA O. 5mg *L :+蔗糖8% ;更优选为MS+LFS O. 5mg · L^+SAO. 5mg · Γ1+蔗糖8%。本申请所述的改良MS固体培养基的pH值与常规MS培养基的pH值相同，通常为5. 8 6. O。上述配方中，蔗糖的浓度5 12%代表每升培养基中含有50 120g的蔗糖。配方中的LFS为灵发素(Lingfasu，代号PGR-08)，同时具有细胞分裂素和生长素两类植物生长调节剂生物活性的特点；SA为撒酸(Salycylic Acid)。步骤3)中，所述的培养条件优选为温度昼/夜25/17(±2)°C ;光照周期昼/夜8h/16h ;光照强度1200 15001x ;其中光照强度进一步优选为1200 13001x。更优选的培养条件为 温度:昼/夜25/17 (±2) 0C ;光照周期 昼/夜8h/16h ;光照强度12001x。由本发明所述方法诱导形成的罗汉果组培块茎是腋芽的直接膨大，实为短缩分枝，前尖后圆，形似玉米穗，只是体积比传统块茎小很多，如黄豆或花生米。而野生块茎或人工压蔓块茎则是已经伸展开来的分枝藤蔓的触地部分或被掩埋部分的膨大，两端形态差异不显著，体积较大，如手指般大小。与现有技术相比，本发明所述方法将LFS和SA加入到常规MS固体培养基中，通过 优化培养基的撒酸、蔗糖等的含量得到改良的MS固体培养基；再将分切得的带腋芽单节茎段微型扦插于改良MS固体培养基中并于特定的培养条件下培养以诱导罗汉果组培块茎的形成。整个方法简单易操作，并且可实现大批量生产；由该方法培育得到的罗汉果组培块茎无菌无毒，且便于运输(诱导完成后，将得到的罗汉果组培块茎取出，洗净，直接置于纸箱或木箱中暂存运输即可)和长时间存贮(将洗净的罗汉果组培块茎采用室内外沙埋存贮即可)，既可用于当年栽种，亦可贮存至第二年栽种，有很强的市场适应性。
具体实施例方式下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。实施例1I)按常规方法获得罗汉果脱毒组培苗；2)在净化工作台上切去脱毒组培苗上部顶芽和下部带根节，取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；3)将分切得到的带腋芽单节茎段微扦插于20瓶装有改良MS固体培养基中(每瓶微扦插5个带腋芽单节茎段)，培养95天后，再生组培苗的各主茎中下部的节位即诱导出膨大的短缩侧茎，前尖后圆，形似玉米穗，长度在O. 5 1. 5cm范围内，即为本发明所述的罗汉果组培块茎；其中，所述的改良MS固体培养基配方为MS+LFS O.1mg · L^+SA O. 5mg · L—1+蔗糖8% ；所述的培养条件为温度昼/夜25(±2) V /17(±2) V ;光照周期昼/夜8h/16h ;光照强度 12001x。按照收获块茎总个数/接种茎段总个数X 100%来计算块茎收率(下同)，块茎收率为75%。实施例2重复实施例1的方法，只是将改良MS固体培养基配方修改为MS+LFSO. 3mg · L :+SA O. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。诱导得到的罗汉果组培块茎形态同实施例1，长度在O. 5 1. Ocm范围内。
经计算，块茎收率为110%。实施例3重复实施例1的方法，只是将改良MS固体培养基配方修改为MS+LFSO. 5mg · L :+SA 0. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。诱导得到的罗汉果组培块茎形态同实施例1，长度在O. 5 1. Ocm范围内。经计算，块茎收率为160%。实施例4
重复实施例1的方法，只是将改良MS固体培养基配方修改为MS+LFSO. 8mg · L :+SA 0. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。诱导得到的罗汉果组培块茎形态同实施例1，长度在O. 5 1. 5cm范围内。经计算，块茎收率为148%。实施例5重复实施例1的方法，只是将改良MS固体培养基配方修改为MS+LFS1. Omg · L :+SA O. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。诱导得到的罗汉果组培块茎形态同实施例1，长度在O. 5 1. 5cm范围内。经计算，块茎收率为150%。实施例6重复实施例1的方法，只是将改良MS固体培养基配方修改为MS+LFS1. Omg · L^+SA O. 3mg · Γ1+蔗糖10 % ;培养条件改为温度昼/夜25(±2)°C /17 (±2) °C;光照周期:昼/夜10h/14h ;光照强度13001x ;培养时间改为90天。诱导得到的罗汉果组培块茎形态同实施例1，长度在O. 5 1. 5cm范围内。经计算，块茎收率为40%。实施例7重复实施例1的方法，只是将改良MS固体培养基配方修改为MS+LFSO. 3mg · L^+SA 0. 8mg · Γ1+蔗糖12 % ;培养条件改为温度昼/夜25(±2)°C /17 (±2) °C;光照周期:昼/夜9h/15h ;光照强度15001x ;培养时间改为100天。诱导得到的罗汉果组培块茎形态同实施例1，长度在O. 5 1. Ocm范围内。经计算，块茎收率为72%。田间实验2011年，申请人按本发明实施例1的方法进行诱导，将得到的罗汉果组培块茎从瓶中取出洗净、晾干后，直接播种于实验田中，之后按常规管理方式进行管理，发芽成活率^90% (发芽成活数/播种数X 100% )。
权利要求
1.一种诱导罗汉果组培块茎的方法，其特征在于包括以下步骤1)按常规方法获得罗汉果脱毒组培苗；2)切去脱毒组培苗上部顶芽和下部带根节，取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；3)将分切得到的带腋芽单节茎段微扦插于改良MS固体培养基中培养90 100天，即得到所述的罗汉果组培块茎；其中，所述的改良MS固体培养基配方为MS+LFS O.1 1. Omg · L_1+SA O. 3 O. 8mg · Γ1+ 鹿糖5 12% ；所述的培养条件为 温度:昼/夜25/17 (±2) °C;光照周期昼/夜8 10h/16 14h ； 光照强度1200 15001x。
2.根据权利要求1所述的诱导罗汉果组培块茎的方法，其特征在于步骤3)中，所述的改良MS固体培养基配方为MS+LFS O.1 1. Omg · L ^SAO. 4 O. 6mg · L :+鹿糖5 10%。
3.根据权利要求2所述的诱导罗汉果组培块茎的方法，其特征在于所述的改良MS固体培养基配方为MS+LFS O. 3 O. 8mg · L :+SA O. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。
4.根据权利要求3所述的诱导罗汉果组培块茎的方法，其特征在于所述的改良MS固体培养基配方为MS+LFS O. 5mg · L_1+SA O. 5mg · L—1+ 鹿糖 8%。
5.根据权利要求1 4中任一项所述的诱导罗汉果组培块茎的方法，其特征在于所述改良MS固体培养基的pH值为5. 8 6. O。
6.根据权利要求1 4中任一项所述的诱导罗汉果组培块茎的方法，其特征在于步骤3)中，所述的培养条件为温度昼/夜25/17 (±2) V ;光照周期昼/夜8h/16h ;光照强度 1200 15001x。
7.根据权利要求6所述的诱导罗汉果组培块茎的方法，其特征在于所述的光照强度 1200 13001x。
8.根据权利要求6所述的诱导罗汉果组培块茎的方法，其特征在于所述的培养条件为温度昼/夜25/17(±2)°C ;光照周期昼/夜8h/16h ;光照强度12001x。
全文摘要
本发明公开了一种诱导罗汉果组培块茎的方法，包括以下步骤1)按常规方法获得罗汉果脱毒组培苗；2)切去脱毒组培苗上部顶芽和下部带根节，取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；3)将带腋芽单节茎段微扦插于改良MS固体培养基中培养90～100天，即得；其中，改良MS固体培养基配方为MS+LFS 0.1～1.0mg·L-1+SA 0.3～0.8mg·L-1+蔗糖5～12％；培养条件为温度昼/夜25/17(±2)℃；光照周期昼/夜8～10h/16～14h；光照强度1200～1500lx。该方法简单易操作，可实现大批量生产，育得的罗汉果组培块茎无菌无毒，便于运输和长时间存贮，有很强的市场适应性。
文档编号A01H4/00GK103004598SQ201210548769
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月18日 优先权日2012年12月18日
发明者许鸿源 申请人:永福科源罗汉果有限责任公司