专利名称：一种混合菌发酵饲料及其制备和应用方法
一种混合菌发酵饲料及其制备和应用方法技术领域
本发明属于微生物发酵领域，具体涉及一种副干酪乳杆菌等混合菌生产的发酵饲 料及其制备和应用方法。
背景技术：
在动物日粮中添加抗生素显著促进了动物生产，并对集约化畜牧业的发展做出了 重大贡献。然而随着时间的推移，饲料中添加抗生素的危害日益显现，并受到社会的广泛关 注。欧盟自2006年I月起全面禁止在畜禽饲料中添加抗生素。随后，日本和韩国等亚洲国 家也相继制定了畜禽无抗生素饲养规范。在生猪等饲养中不得添加抗生素目前已经是国际 公认的食品安全标准。
无抗发酵饲料是利用有益微生物发酵饲料，形成富含大量活性有益微生物、有机 酸及微生物代谢产物，且不含有任何抗生素的微生物发酵饲料。以提供真蛋白及乳酸菌为 主，长期饲用的畜禽体内无抗生素残留。富含大量的乳酸菌、酵母菌，在微生物的作用下合 成动物所需要的氨基酸、维生素、消化酶和乳酸等，使饲料的营养更全面，生物效价更高。不 但可以弥补常规饲料中容易缺乏的氨基酸，而且能使其它粗饲料原料营养成份迅速转化， 达到增强消化吸收利用效果。
使用微生物发酵饲料喂养的家畜家禽，其体内不含残留抗生素和有害的化学添加 剂，不但使食用肉的标准达到和超过了欧盟食用肉的标准，而且使肉中的风味物质提高了， 口感更好。同时，由于畜群患病几率减低，生长稳定，操作简便，从而大大降低了农民的饲养 成本，提高了养殖经济效益，特别适合在我国广大农村推广使用。
“无抗发酵饲料”的研发将促进“无抗猪肉”的生产，为老百姓，提高我国畜禽养殖 业饲料转化利用率、猪肉品质，增强饲料工业产品的国际竞争力。发明内容
本发明的目的是提供一种副干酪乳杆菌等混合菌生产的发酵饲料及其制备和应 用方法，本发明提出的发酵饲料的制备方法减少了抗生素的使用，所得到的发酵饲料含有 大量的菌体蛋白、丰富的氨基酸和维生素等营养物质，有利于促进肠道菌群平衡，提高禽畜 机体免疫力,提高生产性能,降低饲养成本。
一种混合菌发酵饲料的制备方法由副干酪乳杆菌(CICC20296)、枯草芽孢杆菌 (ACCC10619)、酿酒酵母(CICC32236)分别液体发酵培养，发酵液按体积比1:1:1混合后进 行固体发酵培养而成。
具体包括以下步骤
(I)液体发酵
将经过斜面活化的副干酪乳杆菌取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养，培养条件 为MRS培养基，35 37°C，pH自然，静置培养18 22h ;然后按3 7%接种量接种进行液体 发酵培养，所述培养基为MRS培养基，所述发酵条件为35 37°C，pH自然，装液量50 70%，静置培养36 60h ；
将经过斜面活化的枯草芽孢杆菌取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养，培养条件为:LB培养基，28 32°C，ρΗ6· 8 7. 2，摇床转速18(T220r / min，培养16 20h ;然后按 21%接种量接种进行液体发酵培养，所述培养基为LB培养基，所述发酵条件为28 32°C， pH6. 8 7. 2，装液量10 30%，摇床转速180^220r / min，培养20 24h ;
将经过斜面活化的酿酒酵母取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养，培养条件为 PDA培养基，26 30°C，pH6. 2 6. 8，摇床转速18(T250rpm ;培养16 20h ;然后按4 8%接种量接种进行液体发酵培养，所述培养基为PDA培养基，所述发酵条件为26 3(TC，pH6. 2^6. 8， 装液量10 30%，摇床转速18(T250rpm ;培养26 34h ；
(2)固体发酵
分别取步骤(I)得到的三种发酵液按体积比1:1:1混合，按质量百分比3-10%的接种量将发酵液与培养基主料充分混合，含水量控制在35飞5%范围；培养基主料包括畜禽全价料或者饲料原料；
(3)将步骤(2)得到的混合物料置于密封容器中，在1(T37°C发酵环境温度下静止发酵，连续固态厌氧发酵75 240小时；产品活菌数达20(Γ300X IO8Cfu. g—1。
上述饲料原料包括麦麸、玉米粉、豆饼粉中的一种或几种。
上述固体发酵在密封的发酵罐、发酵池、塑料容器或真空袋中完成。
一种发酵饲料，是由上述的方法制备而成的饲料。
上述的发酵饲料的应用方法是直接，或者添加到饲料中喂饲畜禽；在饲料或者饲料原料中添加质量浓度为5%-30%。
本发明产品无需干燥可直接饲用。
本发明使用的副干酪乳杆菌(CICC20296)和酿酒酵母(CICC32236)购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，枯草芽孢杆菌(ACCC10619)购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
本发明提出的发酵饲料的制备方法减少了抗生素的使用，所得到的发酵饲料含有大量的菌体蛋白、丰富的氨基酸和维生素等营养物质，有利于促进肠道菌群平衡，提高禽畜机体免疫力,提高生产性能,降低饲养成本。
具体实施方式
以下结合实 施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。
实施例1
(I)液体发酵
将经过斜面活化的副干酪乳杆菌(CICC20296)取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养，MRS培养基，35°C，pH自然，静置培养18h ;然后按3%接种量接种进行液体发酵培养，所述培养基为MRS培养基，所述发酵条件为35°C，pH自然，装液量50%，静置培养36h ；
将经过斜面活化的枯草芽孢杆菌(ACCC10619)取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养，1^培养基，281，？册.8，摇床转速180r / min，培养16h ;然后按2%接种量接种进行液体发酵培养，所述培养基为LB培养基，所述发酵条件为28°C，pH6. 8，装液量10%，摇床转速 180r / min，培养 20h ；
将经过斜面活化的酿酒酵母(CICC32236)取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养， PDA培养基，26°C，pH6. 2，摇床转速180rpm ;培养16h ;然后按4%接种量接种进行液体发 酵培养，所述培养基为PDA培养基，所述发酵条件为26°C，pH6. 2，装液量10%，摇床转速 180rpm ;培养 26h ；
(2)固体发酵
培养基主料畜禽全价料(或麦麸、玉米粉、豆饼粉等饲料原料);
接种分别取发酵液按体积比1:1:1混合，以3%接种量将发酵液与固体培养基充 分混合，含水量控制在35% ；
(3)将混合物料置于密封容器中(固体发酵可在密封的发酵罐、发酵池、塑料容器、 真空袋中完成，采用两步法发酵)，在10°c发酵环境温度下进行连续固态厌氧发酵240小 时；(4)产品活菌数可达200X IO8Cfu. g_S产品无需干燥直接饲用。
实施例2
(I)液体发酵
将经过斜面活化的副干酪乳杆菌(CICC20296)取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培 养，MRS培养基，36°C，pH自然，静置培养20h ;然后按5%接种量接种进行液体发酵培养，所 述培养基为MRS培养基，所述发酵条件为36°C，pH自然，装液量60%，静置培养48h ；
将经过斜面活化的枯草芽孢杆菌(ACCC10619)取一环斜面菌株接种到种子摇瓶 培养，LB培养基，30°C，pH7.0，摇床转速200r / min，培养18h ;然后按5%接种量接种进行 液体发酵培养，所述培养基为LB培养基，所述发酵条件为30°C，pH7. 0，装液量20%，摇床 转速 200r / min，培养 22h。
将经过斜面活化的酿酒酵母(CICC32236)取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养， PDA培养基，28°C，pH6. 5，摇床转速220rpm ;培养18h ;然后按6 %接种量接种进行液体发 酵培养，所述培养基为PDA培养基，所述发酵条件为28°C，pH6. 5，装液量20%，摇床转速 220rpm ;培养 30h。
(2)固体发酵
培养基主料畜禽全价料(或麦麸、玉米粉、豆饼粉等饲料原料);
接种分别取发酵液按体积比1:1:1混合，以6%接种量将发酵液与固体培养基充 分混合，含水量控制在45% ；
(3)将混合物料置于密封容器中(固体发酵可在密封的发酵罐、发酵池、塑料容器、 真空袋中完成，采用两步法发酵，在25°C发酵环境温度下进行连续固态厌氧发酵120小时；(4)产品活菌数可达300X IO8Cfu. g_\产品无需干燥直接饲用。
实施例3
(I)液体发酵
将经过斜面活化的副干酪乳杆菌(CICC20296)取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培 养，MRS培养基，37°C，pH自然，静置培养22h ;然后按7%接种量接种进行液体发酵培养，所 述培养基为MRS培养基，所述发酵条件为37°C，pH自然，装液量70%，静置培养60h ；
将经过斜面活化的枯草芽孢杆菌(ACCC10619)取一环斜面菌株接种到种子摇瓶 培养，LB培养基，32°C，pH7. 2，摇床转速220r / min，培养20h ;然后按8%接种量接种进行 液体发酵培养，所述培养基为LB培养基，所述发酵条件为32°C，pH7. 2，装液量30%，摇床转速 220r / min，培养 24h。
将经过斜面活化的酿酒酵母(CICC32236)取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养， PDA培养基，30°C，pH6. 8，摇床转速250rpm ;培养20h ;然后按8 %接种量接种进行液体发酵培养，所述培养基为PDA培养基，所述发酵条件为30°C，pH6.8，装液量30%，摇床转速 250rpm ;培养 34h。
(2)固体发酵
培养基主料畜禽全价料(或麦麸、玉米粉、豆饼粉等饲料原料);
接种分别取发酵液按体积比1:1:1混合，以10%接种量将发酵液与固体培养基充分混合，含水量控制在55% ；
(3)将混合好物料置于密封容器中(固体发酵可在密封的发酵罐、发酵池、塑料容器、真空袋中完成，采用两步法发酵)，在37°C发酵环境温度下进行连续固态厌氧发酵75小时；
(4)产品活菌数可达250X IO8Cfu. g'产品无需干燥直接饲用。
实施例4不同益生菌对病原菌的抑菌试验
从表I可以看出，副干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、腊状芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌这 4种试验菌对4种病原菌均具有一定的抑菌效果。其中副干酪乳杆菌对4种病原菌抑菌效果最好，枯草芽孢杆菌次之。且副干酪乳杆菌和枯草芽孢杆菌混合菌液对4种病原菌也均具有较强的抑菌作用，因此选用抑菌效果好的副干酪乳杆菌和枯草芽孢杆菌为试验菌株。
表I 单位mm
权利要求
1.一种混合菌发酵饲料的制备方法，其特征是由副干酪乳杆菌(CICC20296)、枯草芽孢杆菌(ACCC10619)、酿酒酵母(CICC32236)分别液体发酵培养，发酵液按体积比1:1:1混合后进行固体发酵培养而成。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，具体包括以下步骤 (1)液体发酵 将经过斜面活化的副干酪乳杆菌取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养，培养条件为MRS培养基，35 37°C，pH自然，静置培养18 22h ;然后按3 7%接种量接种进行液体发酵培养，所述培养基为MRS培养基，所述发酵条件为35 37°C，pH自然，装液量50 70%，静置培养36 60h ； 将经过斜面活化的枯草芽孢杆菌取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养，培养条件为LB培养基，28 32°C，pH6. 8 7. 2，摇床转速180 220r / min，培养16 20h ;然后按2 8%接种量接种进行液体发酵培养，所述培养基为LB培养基，所述发酵条件为28 32°C，pH6. 8 7. 2，装液量10 30%，摇床转速180 220r / min，培养20 24h ； 将经过斜面活化的酿酒酵母取一环斜面菌株接种到种子摇瓶培养，培养条件为PDA培养基，26 30°C，pH6. 2 6. 8，摇床转速18(T250rpm ;培养16 20h ;然后按4 8%接种量接种进行液体发酵培养，所述培养基为PDA培养基，所述发酵条件为26 3(TC，pH6. 2^6. 8，装液量10 30%，摇床转速18(T250rpm ;培养26 34h ； (2)固体发酵 分别取步骤(I)得到的三种发酵液按体积比1:1:1混合，按质量百分比3-10%的接种量将发酵液与培养基主料充分混合，含水量控制在35飞5%范围；培养基主料包括畜禽全价料或者饲料原料； (3)将步骤(2)得到的混合物料置于密封容器中，在1(T37°C发酵环境温度下静止发酵，连续固态厌氧发酵75 240小时；产品活菌数达200 300X IO8Cfu. g—1。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，饲料原料包括麦麸、玉米粉、豆饼粉中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征是，固体发酵在密封的发酵罐、发酵池、塑料容器或真空袋中完成。
5.一种发酵饲料，其特征是由权利要求1-4任一项所述的方法制备而成的饲料。
6.权利要求5所述的发酵饲料的应用方法，其特征是直接，或者添加到饲料中喂饲畜禽
7.根据权利要求6所述的发酵饲料的应用方法，其特征是在饲料或者饲料原料中添加质量浓度为5%-30%。
全文摘要
本发明公布了一种副干酪乳杆菌等混合菌生产的发酵饲料及其制备和应用方法。由副干酪乳杆菌(CICC20296)、枯草芽孢杆菌(ACCC10619)、酿酒酵母(CICC32236)先液体单独发酵培养，再将发酵液按体积比1:1:1混合，接种到固体培养基中混合均匀后，置于密封容器中厌氧发酵，10-37℃培养75~240小时，产品活菌数可达200-300×108cfu.g-1，产品无需干燥直接饲用。本发明提出的发酵饲料的制备方法减少了抗生素的使用，所得到的发酵饲料含有大量的菌体蛋白、丰富的氨基酸和维生素等营养物质，有利于促进肠道菌群平衡，提高禽畜机体免疫力，提高生产性能，降低饲养成本。
文档编号A23K1/00GK103039699SQ20131000147
公开日2013年4月17日 申请日期2013年1月5日 优先权日2013年1月5日
发明者周映华, 刘惠知, 胡新旭, 高书锋, 周小玲, 缪东, 王升平, 舒燕, 曾发娇 申请人:湖南省微生物研究所