专利名称：一种适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物繁殖领域，即一种适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方。
背景技术：
在现有技术中，杜鹃是世界著名观赏植物，也是我国十大传统名花之一。我国野生杜鹃花资源十分丰富，特别是野生高山杜鹃野生资源较多。但国内外对野生杜鹃花的引种、人工繁育、栽培和育种等研究开展缓慢，大多处于研究的初级阶段。目前，杜鹃花组织培养研究较多，但基本培养基各不相同，大多属于在现有培养基基础上进行的改良，没有一种具有可靠、规范、高效、稳定、广谱等特性的标准培养基。
发明内容
本发明的目的是针对上述不足而提供一种所含组分用量少且价格低廉，适合杜鹃花的快速生长的适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方。本发明的技术 解决方案是一种适合于杜醇花组织培养的基本培养基配方，其培养基成分和含量包括
(1)大量元素:375mg · L-1NH4NO3,180 mg · L^1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg · L-1MgSO4 · 7H20，436 mg · L-1KH2PO4 ；
(2)铁盐18.4 mg · L-1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · L-1Na2 · EDTA · 2H20 ；
(3)微量元素12.4 mg · L-1MnSO4 · 4Η20，7· 2 mg · L-1ZnSO4 · 7Η20，5· 7 mg · L-1H3BO3,
O.05 mg · L 1Na2MO4 · 2H20 ；
(4)有机成分0.3 mg · L—1盐酸硫胺素(VB1) ,75 mg · L—1肌醇；
(5)其它琼脂粉7.8 g · L—1，添加蔗糖15. O g · ΙΛ ρΗ5. 6。还包括玉米素(ZT)(1. 00 3. 50 mg · I71);反式玉米素(Trans-zeatin)(1. 00 3. 50 mg · Γ1) ；2-异戊烯腺嘌呤(2_iP) (1. 00 3. 00 mg · L—1)、苯基噻二唑基脲(TDZ) (1.00 3. 00 mg.r1)、吲哚乙酸(IAA) (O. 40 1.60 mg·!/1)、吲哚丁酸(IBA)(O. 401. 50 mg .L-1)、萘乙酸(NAA) (O. 15 O. 90 mg .Γ1)和 2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)(O. 10 O. 50 mg · L-1);适合愈伤组织诱导。还包括玉米素(ZT)(1. 50 4. 50 mg · I71)、反式玉米素(Trans-zeatin)(1. 50 4.50 mg.L-1)、〗-异戊烯腺嘌呤(2-1P) (1. 30 3. 50 mg ·Γ1)、苯基噻二唑基脲(TDZ) (1. 00 2. 50 mg · L—1)、吲哚乙酸(IAA) (O. 10 O. 60 mg · Γ1)、吲哚丁酸(IBA)(O. 08 O. 50 mg · L—1)和萘乙酸(NAA) (O. 05 O. 30 mg · L—1);适合愈伤组织再分化。还包括玉米素(ZT)(2. 10 4. 00 mg · I71)、反式玉米素(Trans-zeatin)(2. 10 4. 00 mg · Ι^)、2-异戊烯腺嘌呤(2_iP) (1. 80 3. 00 mg · L—1)、吲哚乙酸(IAA)(O. 05 O. 10 mg.171)、吲哚丁酸(IBA) (O. 03 O. 06 mg .171)和萘乙酸(NAA) (O. 01 O. 05mg · L-1);适合嫩茎尖或嫩茎基部直接再生。
还包括玉米素(ZT)(2. 50 3. 80 mg · I71)、反式玉米素(Trans-zeatin)(2. 50 3. 80 mg · L—1)、2-异戊烯腺嘌呤(2_iP) (2. 20 3. 30 mg · L—1)、吲哚乙酸(IAA)(O. 04 0.08 mg·!/1)、吲哚丁酸(IBA) (O. 03 O. 06 mg 七1)和萘乙酸(NAA) (O. 01 O. 03mg · L—1)、赤霉素 GA3 (1. 00 3. 00 mg · L—1);适合腋芽丛生。还包括玉米素(ZT)(O. 07 O. 12 mg · I71)、反式玉米素(Trans-zeatin)(O. 07 O. 12 mg · Ι^)、2-异戊烯腺嘌呤(2_iP) (O. 02 O. 06 mg · L—1)、吲哚乙酸(IAA)(O. 05 O. 15 mg.171)、吲哚丁酸(IBA) (O. 05 O. 13 mg .171)和萘乙酸(NAA) (O. 01 O. 03mg · L—1)、赤霉素 GA3 (O. 701. 60 mg · L—1);适合腋芽生长。还包括玉米素(ZT)(O. 01 O. 05 mg · I71)、反式玉米素(Trans-zeatin)(O. 01 O. 05 mg · Γ1)、吲哚乙酸(IAA) (O. 01 O. 20 mg · Γ1)、吲哚丁酸(IBA)(O. 01 O. 20 mg · Γ1)、萘乙酸(NAA) (O. 01 O. 15 mg · Γ1)、激动素 KT (O. 02 O. 10
mg · L—1);适合芽苗生根。还包括苯基噻二唑基脲(TDZ) (1. 50 4.00 mg · 1^),2,4-二氯苯氧乙酸(2，4-D) (O. 50 2. 80 mg · Γ1);适合杜鹃花组织培养诱导突变体育种。本发明的优点是在近20年的试验研究中，总结前人研究的基础上，结合自身在杜鹃花研究过程中发现的问题及不足，经过大量实验探索获得了一种适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方，通过在全国各地区大多数杜鹃花品种的验证实验，确定了此配方在杜鹃花组织培养中的准确性、广谱性和标准性。可作为杜鹃花的愈伤组织诱导、愈伤组织再分化、嫩茎尖或嫩茎基部直接再生、腋芽丛生、腋芽生长、芽苗生根和组织培养诱导突变体培育新品种等培养的基本培养基。该基本培养基特点是所含组分用量少且价格低廉，适合杜鹃花的快速生长和发育。而且形态特征均正常。下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。
具体实施例方式I培养基成分和含量1.1 大量元素:375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L^1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg · L-1MgSO4 · 7H20，436 mg · L-1KH2PO4 ；1.2 铁盐18. 4 mg · L-1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · L-1Na2 · EDTA · 2H20 ；1.3 微量元素12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20, 5. 7 mg · L-1H3BO3,O. 05 mg · L 1Na2MO4 · 2H20 ；1.4有机成分0. 3 mg · L—1盐酸硫胺素(VB1) ,75 mg · L—1肌醇；
1.5其它琼脂粉7. 8 g · ΙΛ添加蔗糖15. O g · ΙΛ调节5. 6。2应用的植物生长调节物质
2.1愈伤组织诱导
附加细胞分裂素种类玉米素(ZT) (1. 00 3. 50 mg吨―1);反式玉米素(Trans-zeatin)(1. 00 3. 50 mg · Γ1) ；2-异戊烯腺 嘌呤(2_iP) (1. 00 3. 00 mg · L—1)、苯基噻二唑基脲(TDZ) (1. 00 3. 00 mg · L-1)。附加生长素种类吲哚乙酸(IAA) (0.401. 60 mg · L—1)、吲哚丁酸(IBA)(O. 401. 50 mg .L-1)、萘乙酸(NAA) (O. 15 O. 90 mg .Γ1)和 2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)(O. 10 O.SOmg·!/1)。例如利用牛皮杜鹃、短果杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、大字杜鹃、兴安杜鹃、迎红杜鹃、毛毡杜鹃和苞叶杜鹃等嫩茎段工厂化育苗，用量可根据品种不同选择适当浓度。2.2愈伤组织再分化
附加细胞分裂素种类玉米素(ZT) (1. 50 4. 50 mg · L—1)、反式玉米素(Trans-zeatin) (1. 50 4. 50 mg异戍烯腺嘌呤(2_iP) (1. 30 3. 50 mg .L-1)、
苯基噻二唑基脲(TDZ) (1. 00 2. 50 mg · Γ1)。附加生长素种类吲哚乙酸(IAA) (O. 10 0.60 mg· L—1)、吲哚丁酸(IBA)(O. 08 O. 50 mg · L-1)和萘乙酸(NAA) (O. 05 O. 30 mg · Γ1)。例如利用牛皮杜鹃、短果杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、大字杜鹃、兴安杜鹃、迎红杜鹃、毛毡杜鹃和苞叶杜鹃等嫩茎段工厂化育苗，用量可根据品种不同选择适当浓度。2. 3嫩茎尖或嫩茎基部直接再生
附加细胞分裂素种类玉米素(ZT) (2. 10 4. 00 mg · L—1)、反式玉米素(Trans-zeatin) (2. 10 4. 00 mg异戍烯腺嘌呤(2_iP) (1. 80 3. 00 mg .L-1)。附加生长素种类吲哚乙酸(IAA) (0.05 O. 10 mg · L—1)、吲哚丁酸(IBA)(O. 03 O. 06 mg · L-1)和萘乙酸(NAA) (O. 01 O. 05 mg · Γ1)。例如利用牛皮杜鹃、短果杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、大字杜鹃、兴安杜鹃、迎红杜鹃、毛毡杜鹃和苞叶杜鹃等嫩茎段工厂化育苗，用量可根据品种不同选择适当浓度。2. 4腋芽丛生
附加细胞分裂素种类玉米素(ZT) (2. 50 3. 80 mg · L—1)、反式玉米素(Trans-zeatin) (2. 50 3. 80 mg .Γ1)、〗-异戊烯腺嘌呤(2_iP) (2. 20 3. 30 mg .171)。附加生长素种类吲哚乙酸(IAA) (0.04 O. 08 mg · L—1)、吲哚丁酸(IBA)(O. 03 O. 06 mg · L-1)和萘乙酸(NAA) (O. 01 O. 03 mg · Γ1)。其它植物生长调节物质赤霉素GA3 (1. 00 3. 00 mg · Γ1)
例如利用牛皮杜鹃、短果杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、大字杜鹃、兴安杜鹃、迎红杜鹃、毛毡杜鹃和苞叶杜鹃等嫩茎段工厂化育苗，用量可根据品种不同选择适当浓度。2. 5腋芽生长
附加细胞分裂素种类玉米素(ZT) (O. 07 O. 12 mg · L—1)、反式玉米素(Trans-zeatin) (O. 07 O. 12 mg异戍烯腺嘌呤(2_iP) (O. 02 O. 06 mg .L-1)。附加生长素种类吲哚乙酸(IAA) (0.05 O. 15 mg · L—1)、吲哚丁酸(IBA)(O. 05 O. 13 mg · L-1)和萘乙酸(NAA) (O. 01 O. 03 mg · Γ1)。其它植物生长调节物质赤霉素GA3 (O. 701. 60 mg · Γ1)
例如利用牛皮杜鹃、短果杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、大字杜鹃、兴安杜鹃、迎红杜鹃、毛毡杜鹃和苞叶杜鹃等嫩茎段工厂化育苗，用量可根据品种不同选择适当浓度。2.6芽苗生根
附加细胞分裂素种类玉米素(ZT) (O. 01 O. 05 mg · L—1)、反式玉米素(Trans-zeatin) (O. 01 O. 05 mg · I71)。附加生长素种类吲哚乙酸(IAA) (0.01 O. 20 mg · L—1)、吲哚丁酸(IBA)(O. 01 O. 20 mg · Γ1)、萘乙酸(NAA) (O. 01 O. 15 mg · Γ1)。
其它植物生长调节物质激动素KT (O. 02 O. 10 mg · Γ1)
例如利用牛皮杜鹃、短果杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、大字杜鹃、兴安杜鹃、迎红杜鹃、毛毡杜鹃和苞叶杜鹃等嫩茎段工厂化育苗，用量可根据品种不同选择适当浓度。2. 7杜鹃花组织培养诱导突变体育种
附加细胞分裂素种类苯基噻二唑基脲(TDZ) (1. 50 4. 00 mg · L—1)。附加生长素种类2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D) (O. 50 2. 80 mg · Γ1)。例如利用牛皮杜鹃、短果杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、大字杜鹃、兴安杜鹃、迎红杜鹃、毛毡杜鹃和苞叶杜 鹃等花瓣培育杜鹃花新品种，用量可根据品种不同选择适当浓度。
权利要求
1.一种适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方，其特征在于培养基成分和含量包括:(1)大量元素:375mg · [1NH4NO3,180 mg · L^1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245 mg · L-1MgSO4 · 7H20，436 mg · L-1KH2PO4 ；(2)铁盐18.4 mg · L-1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · L-1Na2 · EDTA · 2H20 ；(3)微量元素12.4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L-1H3BO3,0.05 mg · L 1Na2MO4 · 2H20 ；(4)有机成分0.3 mg · L—1盐酸硫胺素(VB1), 75 mg · L—1肌醇；(5)其它琼脂粉7.8 g · L_\添加蔗糖15. O g · ΙΛ调节5. 6。
2.按照权利要求1所述的适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方，其特征在于包括玉米素1.00 3. 50 mg ;反式玉米素1. 00 3. 50 mg · L—1 ;2_异戊烯腺嘌呤 LOO 3. 00 mg · Γ1、苯基噻二唑基脲 L 00 3. 00 mg · Γ1、吲哚乙酸 O. 401. 60 mg · L'n引哚丁酸 O. 401. 50 mg .L'萘乙酸 O. 15 O. 90 mg · L4 和 2，4-二氯苯氧乙酸O. 10 O. 50 mg · L-1 ;适合愈伤组织诱导。
3.按照权利要求1所述的适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方，其特征在于包括玉米素1.50 4.50 mg·!/1、反式玉米素1. 50 4. 50 mg · L'2-异戊烯腺嘌呤1.30 3. 50 mg *L\苯基喔二唑基服1. 00 2. 50 mg *L 1J引噪乙酸 O. 10 O. 60 mg *L \ 吲哚丁酸O. 08 O. 50 mg · Γ1和萘乙酸O. 05 O. 30 mg · Γ1 ;适合愈伤组织再分化。
4.按照权利要求1所述的适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方，其特征在于包括玉米素2.10 4.00 mg· L'反式玉米素2. 10 4. 00 mg · L'2_异戊烯腺嘌呤1.80 3. 00 mg · Γ1、卩引哚乙酸 O. 05 O. 10 mg · L'卩引哚丁酸 O. 03 O. 06 mg · Γ1 和萘乙酸O. 01 O. 05 mg · Γ1 ;适合嫩茎尖或嫩茎基部直接再生。
5.按照权利要求1所述的适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方，其特征在于包括玉米素2.50 3.80 mg· L'反式玉米素2. 50 3. 80 mg · L'2_异戊烯腺嘌呤2.20 3. 30 mg · Γ1、卩引哚乙酸 O. 04 O. 08 mg · L'卩引哚丁酸 O. 03 O. 06 mg · Γ1 和萘乙酸O. 01 O. 03 mg · I71、赤霉素1. 00 3. 00 mg · L-1 ;适合腋芽丛生。
6.按照权利要求1所述的适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方，其特征在于包括玉米素0.07 O. 12 mg · L'反式玉米素O. 07 O. 12 mg · L'2_异戊烯腺嘌呤O.02 O. 06 mg · L—1、吲哚乙酸 O. 05 O. 15 mg · L'吲哚丁酸 O. 05 O. 13 mg · Γ1 和萘乙酸O. 01 O. 03 mg · I71、赤霉素O. 701. 60 mg · L-1 ;适合腋芽生长。
7.按照权利要求1所述的适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方，其特征在于包括玉米素0.01 O. 05 mg .L'反式玉米素O. 01 O. 05 mg · Γ1、吲哚乙酸O. 01 O. 20 mg .L'卩引哚丁酸 O. 01 0.20 mg .L'萘乙酸 O. 01 O. 15 mg .L'激动素 ΚΤ0. 02 O. 10 mg · L—1 ;适合芽苗生根。
8.按照权利要求1所述的适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方，其特征在于包括苯基噻二唑基脲1. 50 4. 00 mg · L_\2，4- 二氯苯氧乙酸O. 50 2. 80 mg · L—1 ;适合杜鹃花组织培养诱导突变体育种。
全文摘要
本发明涉及一种植物繁殖领域，即一种适合于杜鹃花组织培养的基本培养基配方。其培养基成分和含量包括(1)大量元素375mg·L-1NH4NO3，180mg·L-1KNO3，320mg·L-1CaCl2·2H2O，245mg·L-1MgSO4·7H2O，436mg·L-1KH2PO4；(2)铁盐18.4mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；(3)微量元素12.4mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7mg·L-1H3BO3，0.05mg·L-1Na2MO4·2H2O；(4)有机成分0.3mg·L-1盐酸硫胺素(VB1)，75mg·L-1肌醇；(5)其它琼脂粉7.8g·L-1，添加蔗糖15.0g·L-1，pH5.6，及附加细胞分裂素种类、生长素种类成份。具有所含组分用量少且价格低廉，适合杜鹃花的快速生长的特点。
文档编号A01H4/00GK103039367SQ20131001896
公开日2013年4月17日 申请日期2013年1月18日 优先权日2013年1月18日
发明者顾地周, 顾川岳 申请人:通化师范学院