菲油果的茎尖离体快速培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种菲油果的茎尖离体快速培养方法，其特征在于，具体步骤为：选取当年萌发的半木质化的新枝，剪去已展平的叶片，依次用洗衣粉、自来水冲洗，然后在无菌室超净台上将枝条消毒；在超净台上剥取长度0.5mm以下的茎尖，切下茎尖连同0.5cm长度的茎段进行新芽培养，进行丛生芽诱导从而培育成无菌系；将丛生芽切成单芽，进行生根培养；第四步：将生根的试管苗移入泥炭和珍珠岩混合基质中进行炼苗，30天后移栽至灌满纯泥炭的塑料穴盘中，经3个月培养后直接移栽至土壤或大的容器中。采用本发明提供的培养方法繁殖菲油果，具有繁殖速度快、繁殖率高、脱病毒及提纯复壮等优点，可在短时间内工厂化生产优质种苗。
【专利说明】菲油果的茎尖离体快速培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种菲油果的茎尖离体快速培养方法，属于菲油果培养方法【技术领域】。【背景技术】
[0002]菲油果是一种多用途经济树木，可作绿化、盆花，四季常绿，观赏性强花色粉红，4-5月开花，适应性强，耐零下10度低温。花谢后结椭圆形果实，重约75-100g，营养丰富，甜中带酸，且可加工成果酱、果汁等。其种苗主要靠扦插等常规方法繁殖，但周期长且生根率低，无法满足生产用种苗之需。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的是现有菲油果繁殖方法周期长、生根率低，无法满足生产需要的技术问题。
[0004]为了解决上述问题，本发明的技术方案是提供一种菲油果的茎尖离体快速培养方法，其特怔在于，具体步骤为:
[0005]第一步:选取当年萌发的半木质化的新枝，剪去已展平的叶片，用洗衣粉溶液冲洗三遍，置自来水龙头下冲洗3h，在无菌室超净台上将枝条消毒，先用75vol %乙醇溶液消毒Imin,然后用0.2vol %的洁尔敏溶液消毒15min,最后用IOvol %次氯酸钠溶液消毒15min,用无菌水冲洗三遍后无菌滤纸吸干水份；
[0006]第二步:在超净台上剥取长度0.5mm以下的茎尖，切下茎尖连同0.5cm长度的茎段接种于第一培养基上进行新芽培养，所述第一培养基是在1/2MS培养基的基础上添加了玉米素(ZT)和吲哚丁酸(IBA);待茎尖伸长至0.5cm以上时，将茎尖新芽切下接种至第二培养基上诱导丛生芽，所述第二培养基是在WP培养基(木本培养基)的基础上添加了细胞分裂素、荼乙酸；
[0007]第三步:将丛生芽切成单芽，接种至第三培养基中进行生根培养，所述第三培养基是在1/2MS培养基的基础上添加了吲哚丁酸和活性炭；
[0008]第四步:将生根的试管苗移栽至由重量比为3:1的泥炭和珍珠岩混合而成的基质中，浇足水后用塑料薄膜覆盖保温保湿防失水萎蔫，7天后揭开薄膜炼苗，每天叶面喷水3-5次，15天后施肥料液；30天后移栽至灌满纯泥炭的塑料穴盘中，经3个月培养后直接移栽至土壤或大的容器中。
[0009]优选地，所述第二步中第一培养基的pH值为5.6，其中玉米素的浓度为3mg/L，吲哚丁酸的浓度为0.2mg/L，琼脂浓度为6.5g/L，蔗糖浓度为30g/L。
[0010]优选地，所述第二步中第二培养基中细胞分裂素的浓度为2mg/L，萘乙酸的浓度为0.2mg/L。
[0011]优选地，所述第三步中第三培养基中吲哚丁酸的浓度为0.5mg/L，活性炭的浓度为2mg/L。[0012]优选地，所述第二步中生芽培养是在温度24°C、光照强度为3000LX及每天光照时间为12小时的条件下进行。
[0013]优选地，所述第二步中丛生芽培养是在温度24°C、光照强度为3000LX及每天光照时间为12小时的条件下进行。
[0014]优选地，所述第三步中生根培养是在温度24°C、光照强度为3000LX及每天光照时间为12小时的条件下进行。
[0015]优选地，所述第四步中肥料液含有以重量百分比计的0.lwt%硝酸铵、0.lwt%磷酸二氢钾、0.1wt %硫酸镁。
[0016]采用本发明提供的培养方法繁殖菲油果，具有繁殖速度快、繁殖率高、脱病毒及提纯复壮等优点，可在短时间内工厂化生产优质种苗。
【具体实施方式】
[0017]为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，作详细说明如下。
[0018]实施例
[0019]一、材料准备
[0020]1、洗衣粉溶液
[0021]2、第一培养基:在1/2MS培养基的基础上添加了玉米素(ZT)和吲哚丁酸(IBA)；其中玉米素的浓度为3mg/L，吲哚丁酸的浓度为0.2mg/L，琼脂浓度为6.5g/L，蔗糖浓度为30g/L ;将第一培养基的pH调节至5.6。
[0022]3、第二培养基:在WP培养基(木本培养基)的基础上添加了细胞分裂素、荼乙酸；其中细胞分裂素的浓度为2mg/L,萘乙酸的浓度为0.2mg/Lo
[0023]4、第三培养基:在1/2MS培养基的基础上添加了吲哚丁酸和活性炭；其中吲哚丁酸的浓度为0.5mg/L，活性炭的浓度为2mg/L。
[0024]5、肥料液:其中硝酸铵的含量为0.1wt%、磷酸二氢钾的含量为0.1wt%、氯化镁的含量为0.1wt%。
[0025]二、具体步骤
[0026]第一步:选取当年萌发的半木质化的新枝，剪去已展平的叶片，用洗衣粉溶液冲洗三遍，置自来水龙头下冲洗3h，在无菌室超净台上将枝条消毒，先用75vol %乙醇溶液消毒Imin,然后用0.2vol %的洁尔敏溶液消毒15min,最后用IOvol %次氯酸钠溶液消毒15min,用无菌水冲洗三遍后无菌滤纸吸干水份。
[0027]第二步:在超净台上剥取长度0.5mm以下的茎尖，切下茎尖连同0.5cm长度的茎段接种于第一培养基上进行新芽培养；待茎尖伸长至0.5cm以上时，将茎尖新芽切下接种至第二培养基上诱导丛生芽，生芽培养与丛生芽均是在温度24°C、光照强度为3000LX及每天光照时间为12小时的条件下进行；经过连续继代增殖不断扩大繁殖系数，每40-45天增殖一次，增殖率为1:3-5。
[0028]第三步:将丛生芽切成单芽，接种至第三培养基中进行生根培养，生根培养是在温度24°C、光照强度为3000LX及每天光照为时间12小时的条件下进行。
[0029]第四步:将生根的试管苗移栽至由重量比为3:1的泥炭和珍珠岩混合而成的基质中，浇足水后用塑料薄膜覆盖保温保湿防失水萎蔫，7天后揭开薄膜炼苗，每天叶面喷水3-5次，15天后施肥料液。
[0030]第五步:30天后移栽至灌满纯泥炭的塑料穴盘中，经3个月培养后直接移栽至土壤或大的容器中，存活率可达100%且缓苗期短生长快。
[0031]三、试验结果
[0032]由上述试验可知，本发明提供的菲油果的茎尖立体快速培养方法生根培养时间只需20天，生根率达96 %，试管苗炼苗成活率达98 %，一段茎段一年内可繁育10000株种苗；而常规扦插生根时间长达100天以上，生根成活率只有30%。相较于常规培养方法，本发明具有繁殖速度快、繁殖 率高的优点。
【权利要求】
1.一种菲油果的茎尖离体快速培养方法，其特怔在于，具体步骤为: 第一步:选取当年萌发的半木质化的新枝，剪去已展平的叶片，用洗衣粉溶液冲洗三遍，置自来水龙头下冲洗3h，在无菌室超净台上将枝条消毒，先用75vol %乙醇溶液消毒Imin,然后用0.2vol %的洁尔敏溶液消毒15min,最后用IOvol %次氯酸钠溶液消毒15min,用无菌水冲洗三遍后无菌滤纸吸干水份； 第二步:在超净台上剥取长度0.5_以下的茎尖，切下茎尖连同0.5cm长度的茎段接种于第一培养基上进行新芽培养，所述第一培养基是在1/2MS培养基的基础上添加了玉米素和吲哚丁酸；待茎尖伸长至0.5cm以上时，将茎尖新芽切下接种至第二培养基上诱导丛生芽，所述第二培养基是在WP培养基的基础上添加了细胞分裂素、荼乙酸； 第三步:将丛生芽切成单芽，接种至第三培养基中进行生根培养，所述第三培养基是在1/2MS培养基的基础上添加了吲哚丁酸和活性炭，第三培养基中吲哚丁酸的浓度为0.5mg/L，活性炭的浓度为2mg/L; 第四步:将生根的试管苗移栽至由重量比为3:1的泥炭和珍珠岩混合而成的基质中，浇足水后用塑料薄膜覆盖保温保湿防失水萎蔫，7天后揭开薄膜炼苗，每天叶面喷水3-5次，15天后施肥料液；30天后移栽至灌满纯泥炭的塑料穴盘中，经3个月培养后直接移栽至土壤或大的容器中。
2.如权利要求1所 述的菲油果茎尖离体快速培养方法，其特怔在于，所述第二步中第一培养基的PH值为5.6，其中玉米素的浓度为3mg/L，吲哚丁酸的浓度为0.2mg/L,琼脂浓度为6.5g/L,鹿糖浓度为30g/L。
3.如权利要求1所述的菲油果茎尖离体快速培养方法，其特怔在于，所述第二步中第二培养基中细胞分裂素的浓度为2mg/L，萘乙酸的浓度为0.2mg/L。
4.如权利要求1所述的菲油果茎尖离体快速培养方法，其特怔在于，所述第三步中第三培养基中吲哚丁酸的浓度为0.5mg/L，活性炭的浓度为2mg/L。
5.如权利要求1所述的菲油果茎尖离体快速培养方法，其特怔在于，所述第二步中生芽培养是在温度24°C、光照强度为3000LX及每天光照时间为12小时的条件下进行。
6.如权利要求1所述的菲油果茎尖离体快速培养方法，其特怔在于，所述第二步中丛生芽培养是在温度24°C、光照强度为3000LX及每天光照时间为12小时的条件下进行。
7.如权利要求1所述的菲油果茎尖离体快速培养方法，其特怔在于，所述第三步中生根培养是在温度24°C、光照强度为3000LX及每天光照时间为12小时的条件下进行。
8.如权利要求1所述的菲油果茎尖离体快速培养方法，其特怔在于，所述第四步中肥料液含有以重量百分比计的0.lwt%硝酸铵、0.lwt%磷酸二氢钾、0.lwt%硫酸镁。
【文档编号】A01H4/00GK103461140SQ201310450183
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月27日 优先权日:2013年9月27日
【发明者】姚德彪, 顾建平 申请人:上海旭东园艺有限公司