马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法
【专利摘要】本发明公开了一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，使用多层滤纸床液体培养方法，用液体MS培养基，培养马铃薯脱毒试管苗，聚乙二醇做梯度水分胁迫，移苗，培养。本发明采用液体MS培养基培养马铃薯脱毒试管苗，聚乙二醇做梯度水分胁迫，可以快捷，简便，稳定的鉴定马铃薯脱毒试管苗抗旱性。
【专利说明】马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法
【技术领域】
[0001]本发明属于一种生物抗旱性的鉴定方法，特别涉及一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法。
【背景技术】
[0002]土壤干旱是一个世界性的问题，已经成为危害作物生长、土壤荒漠化和自然生态环境恶化的主要原因之一。目前，全世界干旱区面积占全球面积的24 %，我国干旱区面积超过250 km2占国土面积的1/4以上。主要分布在我国的西北内陆地区，如甘肃河西走廊、新疆、青海柴达木盆地、宁夏和内蒙古部分地区。我国水资源总量2.8亿万m3，但人均水源占有量仅2300 m3，不足世界人均水平的1/4，居世界109位，被世界水资源与环境发展联合会列为13个贫水国家之一。根据Boyer (1982)统计结果，1939~1978年间，影响作物产量的各种环境因素中干旱和盐碱造成的减产量高达40 %以上。干旱和盐碱成为农业生产稳步增长的一大障碍。
[0003]目前国内外学者在马铃薯的抗旱性评价、抗旱性生理机制、抗旱基因工程、抗旱与其他胁迫的关系、抗旱性已成等方面的研究均取得一定进展。抗旱性评价主要采用以产量为基础的抗旱系数为标准，另外还可以结合碳同位素分辨率等生理指标、形态指标进行抗旱性的综合评价。因此，选育抗旱性的马铃薯品种就显得尤为重要。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，提供一种快捷，简便，稳定的马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法。
[0005]为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案:
一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，使用多层滤纸床液体培养方法，用液体MS培养基，培养马铃薯脱毒试管苗，聚乙二醇(PEG — 6000)做梯度水分胁迫，移苗，培养。
[0006]所述多层滤纸床液体培养方法,将型号为0.5mX0.5m的定性滤纸折成6层,剪成“十”字形，将四边沿虚线向内折叠90° ,做成大小为1.5cmX5.5cmX5.5cm的滤纸床,然后在滤纸床中央打孔9个，孔径d=0.3_。并用镊子将其水平放入150mL左右的培养瓶底部。
[0007]所述液体MS培养基，为液体MS培养基。
[0008]所述聚乙二醇(PEG — 6000)做梯度水分胁迫，配置液体MS培养基，将配制好的液体MS培养基平均分成五组，各组中分别加入聚乙二醇(PEG — 6000)，充分溶解，制成含0%、5%、10%、15%、20%聚乙二醇(PEG — 6000)的五种液体MS培养基，然后将每种不同聚乙二醇(PEG- 6000)含量的液体MS培养基分别倒入到10个培养瓶中，共50个培养瓶，每个培养瓶中装液体MS培养基50 ml且面低于滤纸床面0.2cm。
[0009]所述装好液体MS培养基的培养瓶高压灭菌。
[0010]所述移苗将带测定抗旱性马铃薯脱毒试管苗在无菌条件下剪成带有2个腋芽的茎段后分别移入不同浓度梯度的聚乙二醇(PEG — 6000)液体MS培养基中。[0011 ] 所述每个培养瓶中接种5个茎段，封口。
[0012]所述将移苗成功后的培养瓶放在22°C~28°C，20001x~30001x条件下培养，培养30天。
[0013]所述培养30天后，选出未污染的培养瓶，测定马铃薯脱毒试管生根情况、即根长，试管苗株高测定，试管苗叶片数。
[0014]本发明的有益效果为:本发明采用液体MS培养基培养马铃薯脱毒试管苗，聚乙二醇做梯度水分胁迫，可以快捷，简便，稳定的鉴定马铃薯脱毒试管苗抗旱性。
【具体实施方式】
[0015]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0016]一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于，使用多层滤纸床液体培养方法，用液体MS培养基，培养马铃薯脱毒试管苗，聚乙二醇做梯度水分胁迫，移苗，培养。
[0017]多层滤纸床液体培养方法，将型号为0.5mX 0.5m的定性滤纸折成6层,剪成“十”字形，将四边沿虚线向内折叠90° ,做成大小为1.5cmX5.5cmX5.5cm的滤纸床,然后在滤纸床中央打孔9个，孔径d=0.3mm。并用镊子将其水平放入150mL左右的培养瓶底部。
[0018]液体MS培养基，为液体MS培养基。
[0019]聚乙二醇做梯度水分胁迫，配置液体MS培养基，将配制好的液体MS培养基平均分成五组，各组中分别加入聚乙二醇，充分溶解，制成含0%、5%、10%、15%,20%聚乙二醇的五种液体MS培养基，然后将每种不同聚乙二醇含量的液体MS培养基分别倒入到10个培养瓶中，共50个培养瓶，每个培养瓶中装液体MS培养基50 ml且面低于滤纸床面0.2cm。
[0020]装好液体MS培养基的培养瓶高压灭菌。
[0021]移苗将带测定抗旱性马铃薯脱毒试管苗在无菌条件下剪成带有2个腋芽的茎段后分别移入不同浓度梯度的聚乙二醇液体MS培养基中。
[0022]每个培养瓶中接种5个茎段，封口。
[0023]将移苗成功后的培养瓶放在22°C~28°C，20001x~30001x条件下培养，培养30天。
[0024]培养30天后，选出未污染的培养瓶，测定马铃薯脱毒试管生根情况、即根长，试管苗株高测定，试管苗叶片数。
[0025]上述虽然结合实施例对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性的劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于，使用多层滤纸床液体培养方法，用液体MS培养基，培养马铃薯脱毒试管苗，聚乙二醇做梯度水分胁迫，移苗，培养。
2.如权利要求1所述的一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于:所述多层滤纸床液体培养方法，将型号为0.5mX0.5m的定性滤纸折成6层，剪成“十”字形，将四边沿虚线向内折叠90° ,做成大小为1.5cmX5.5cmX5.5cm的滤纸床,然后在滤纸床中央打孔9个，孔径d=0.3mm,并用镊子将其水平放入150mL左右的培养瓶底部。
3.如权利要求1所述的一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于:所述液体MS培养基，为液体MS培养基。
4.如权利要求1所述的一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于:所述聚乙二醇做梯度水分胁迫，配置液体MS培养基，将配制好的液体MS培养基平均分成五组，各组中分别加入聚乙二醇，充分溶解，制成含0%、5%、10%、15%,20%聚乙二醇的五种液体MS培养基，然后将每种不同聚乙二醇含量的液体MS培养基分别倒入到10个培养瓶中，共50个培养瓶，每个培养瓶中装液体MS培养基50 ml且面低于滤纸床面0.2cm。
5.如权利要求3所述的一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于:所述装好液体MS培养基的培养瓶高压灭菌。
6.如权利要求1所述的一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于:所述移苗将带测定抗旱性马铃薯脱毒试管苗在无菌条件下剪成带有2个腋芽的茎段后分别移入不同浓度梯度的聚乙二醇液体MS培养基中。
7.如权利要求6所述的一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于:所述每个培养瓶中接种5个茎段，封口。
8.如权利要求7所述的一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于:所述将移苗成功后的培养瓶放在22°C~28°C，20001x~30001x条件下培养，培养30天。
9.如权利要求8所述的一种马铃薯脱毒试管苗抗旱性鉴定方法，其特征在于:所述培养30天后，选出未污染的培养瓶，测定马铃薯脱毒试管生根情况、即根长，试管苗株高测定，试管苗叶片数。
【文档编号】A01H4/00GK103636494SQ201310592142
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年11月22日 优先权日:2013年11月22日
【发明者】简玉君 申请人:简玉君