一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方的制备及应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方的制备及应用。其特征在于包含以下营养素水平：日粮(前期/后期)：粗蛋白20-23％/19.41％、代谢能12.56MJ/kg/13.34MJ/kg、钙0.97％/0.81％、赖氨酸1.18％/0.81％、蛋氨酸0.5％/0.81％。上述配合饲料中的营养素水平可将原料通过如下方法配置得到(前期/后期)：玉米55.1％/60.8％、豆粕32.2％/23.7％、玉米蛋白粉4.5％/5.5％、豆油3.2％/5％、预混料5％、竹醋液1％、金霉素7.5-25mg/kg。本发明的利用竹醋液替代饲料抗生素促生长配方对于替代抗生素，提高生产性能和减少粪便中氨气有很好的效果。
【专利说明】一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方的制备及应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于畜禽饲料领域，涉及一种添加了竹醋液替代饲料抗生素的饲料配方的 制作及其应用。
【背景技术】
[0002] 自从抗生素被发现以来，许多微生物引起的疾病再也不为人们所担心，医疗技术 也因此而出现巨大的飞跃。抗生素有着如此多的好处，因此人们不仅用它来治病，还将其用 作饲料添加剂来预防动物疾病，促进动物生长。抗生素促生长机制早在80年代中期就以研 究透彻，主要包括以下4种机制1、抑制无症状的感染；2、减少微生物对营养成分的利用；3、 使动物肠壁变薄，增加动物对营养的吸收和利用；4、减少有害微生物的代谢产物。虽然抗生 素对动物生产作出了很大贡献，但是随着长期以及大量盲目的使用抗生素，给人类健康和 畜牧业带来的巨大影响，这给畜禽业生产及科研工作提出了新的要求，就是寻找不仅能有 效防治畜禽的疾病，而且能促进动物生长，最重要的是安全无残留，无耐药性的添加剂来替 代抗生素。
[0003] 竹醋液（bamboo vinegar)，亦称竹酢液，是竹材及其加工剩余物干馈、炭化产生的 烟气经冷凝、冷却，并分离气体和焦油后得到的具有烟熏（香）味，含有机酸等200多种有 机成分及数十种矿物质的酸性液体。其PH值2?3,主要成分有机酸、酚类、酮类、醇类等， 乙酸是最主要的成分，约占60%。竹醋液对细菌和真菌均有较强的抑菌和杀菌作用，但抑 菌、杀菌效果存在一定的差异，抑制效果的排列顺序为霉菌类 > 细菌类 >酵母菌类。竹醋 液的杀菌机制比较复杂，其组成成分有机酸中的甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸；酚类物质中的苯 酚、2-甲基苯酚以及一些醛类物质等均有杀菌作用，虽然除乙酸外其他组分含量都不高，但 这些成分间的协同作用可能大大提高了竹醋液的杀菌效果。竹醋液对耐药性细菌和病毒的 抵抗有着显著效果。Baimark和Niamsa的研究表明竹醋液在体外表现出高于乙酸和甲酸的 抗菌率，并且竹醋液中的酚类化合物也同样有着抗菌作用。此外，Nomura的研究发现竹醋 液对抗性很强的大肠杆菌0-157具有很好的杀菌效果。细菌和病毒的抵抗力会由于药物依 赖等原因而增加，因此细菌和病毒对于单一组分的药物容易产生抗药性，而对于像竹醋液 这种多组分混合物则不易产生抗药性。研究显示竹醋液具有良好的抑菌效果，对大肠杆菌 和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC)为3. 13% -6. 25%，另外其抑菌效果优于市售的 几种常用的饲用抗生素。之前的研究显示竹醋液可能具有替代抗生素的作用，因此，在大量 试验研究的基础上开发一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方，该日粮对于提高肉鸡生产 性能的作用优于添加25mg/kg的金霉素。另外还可以显著降低粪便中氨气的含量，这对于 降低养殖过程中的氨氮排放量从而改善养殖环境有着显著作用。
【发明内容】
[0004] 针对【背景技术】中提出的养殖过程过分依赖于抗生素，抗生素滥用造成了细菌耐药 性增加以及食品安全问题频发等问题，本发明的目的在于提供一种竹醋液替代饲料抗生素 促生长配方，通过竹醋液体外抑菌效果的研究以及与市售常用抗生素的抑菌效果进行比 较。结合前期的研究结果，确定添加到肉鸡日粮中竹醋液的含量，从而根据NRC1994标准配 制饲料配方，通过对肉鸡生产性能，免疫器官指数，血清生化指标，消化道和食糜PH值，以 及食糜中消化酶活力，粪便中氨气含量这几个方面对该配方的可行性进行探讨。
[0005] 本发明的目的可以通过以下技术方案实现
[0006] -种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方，其特征在于包含以下营养素和水平，前 期日粮：粗蛋白20-23%、代谢能12. 56MJ/kg、钙0· 97%、有效磷0· 33%、赖氨酸L 18%、蛋 氨酸0. 5 %、蛋氨酸+胱氨酸0. 87 %。上述配合饲料中的营养素水平和比例将原料通过如 下配置方法得到：玉米55. 1 %、豆柏32. 2%、玉米蛋白粉4. 5%、豆油3. 2%、预混料5%、竹 醋液1%、金霉素7. 5-25mg/kg。
[0007] 后期日粮：粗蛋白19. 41 %、代谢能13. 34MJ/kg、钙(λ 81 %、有效磷(λ 39%、赖氨 酸1. 06 %、蛋氨酸0. 43 %、蛋氨酸+胱氨酸0. 76 %。上述配合饲料中营养素水平和比例将 原料通过如下配置方法得到：玉米60. 8%、豆柏23. 7、玉米蛋白粉5. 5%、豆油5%、预混料 5%、竹醋液1%、金霉素7.5-2511^/1^。
[0008] 本发明中的一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方制成配合饲料的方法可以通 过以下加工工艺和步骤实现
[0009] 本发明一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方中各组分的优选重量百分比取前 期日粮：玉米55. 1%、豆柏32. 2%、玉米蛋白粉4. 5%、豆油3. 2%、预混料5%、竹醋液1%、 金霉素7. 5-25mg/kg ;后期日粮：玉米60. 8%、豆柏23. 7、玉米蛋白粉5. 5%、豆油5%、预 混料5%、竹醋液1 %、金霉素7. 5-25mg/kg。该饲料中的营养成分种类和组成比例为前期 日粮：粗蛋白20?23%、代谢能12. 56MJ/kg、钙0· 97 %、有效磷0· 33%、赖氨酸L 18%、 蛋氨酸〇. 5 %、蛋氨酸+胱氨酸0. 87 % ;后期日粮：粗蛋白19. 41 %、代谢能13. 34MJ/kg、钙 0.81%、有效磷0.39%、赖氨酸L 06%、蛋氨酸0.43%、蛋氨酸+胱氨酸0.76%。一种竹 醋液替代饲料抗生素促生长配方制成配合饲料，即将玉米蛋白粉、豆油、预混料、竹醋液和 金霉素进行初步预混合，然后再放入混匀机与玉米豆柏一起混合均匀。
[0010] 本发明的有益效果
[0011] 本配方在本实验室前期研究的基础上筛选出较适宜的竹醋液添加量，在该添加量 下饲料不会由于水分含量过高而导致营养物质的流失，不会产生因此而产生霉变，且日粮 PH值降低，对幼龄动物胃酸分泌不足起到很好的调节作用。另外替代金霉素部分我们最高 添加量选用了 25mg/kg的金霉素，在该浓度下其在鸡体内的残留低于0. 05mg/kg，符合残留 安全标准。
[0012] 经过与市售肉鸡配合饲料的配方和营养成分进行对比分析测定，证明该配合饲料 具有以下优点（一）减少畜禽养殖过程中抗生素的使用量，对于保护生态环境，提高食品安 全有着积极的作用。（二）我国竹类资源丰富，其种生长周期短、成材快、更新易、再生能力 强，易于实现可持续生产，其利用价值日益为人们所重视。竹醋液生产原料丰富，价廉易得， 属天然产品。经肉鸡饲养试验及常规指标的分析，证明该饲料配方具有以下优点具有以下 优点（一）提高肉鸡生产性能缩短养殖周期和上市时间，增加养殖户收益。（二）可以显著 降低消化道PH值，增加食糜中消化酶活力，进而提高生产性能。（三）可以显著减少粪便中 氨气的含量，改善养殖环境。（四）替代一定比例的金霉素，有利于健康养殖。
[0013] 该配方中所用的竹醋液是竹材及其加工剩余物干馏、炭化产生的烟气经冷凝、冷 却，并分离气体和焦油后得到的具有烟熏（香）味，含有机酸等200多种有机成分及数十种 矿物质的酸性液体。含有酸类：甲酸、醋酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸；酚类：愈疮木酚、对甲 酚（C6H50H)、向甲酚（C6H50H)、2_甲氧基-4甲酚、邻甲酚（C6H50H)、乙基愈疮木酚；醛类： 2_呋喃醛、糠醛、四羟基糠醛（其中不含甲醛）；醇类（其中不含甲醇）、脂类等；不含3-4 苯并芘、二恶英等有害物质。不含黄曲霉素肉毒杆菌金黄色葡萄球菌、链球菌等；密度g/ mL彡L 010 ;pH值2. 3?2. 8 ;折光率（Brix) 2. 5?4. 0 ;总酸％彡5. 0 ;溶解焦油彡0· 12。
【专利附图】
【附图说明】
[0014] 附图1是竹醋液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果图。
[0015] 附图2是竹醋液与四种饲用抗生素的抑菌效果比较图。
[0016] 附图3是竹醋液和金霉素对肉鸡免疫器官指数影响图，η = 12。
[0017] 附图4是竹醋液和金霉素对肉鸡血清生化指标影响图，*Ρ < 0. 05 ;#Ρ < 0. 01， < 0· 001, η = 12。
[0018] 附图5是竹醋液和金霉素对发酵鸡粪中氨气产生量影响图，**Ρ < 0.01，***Ρ < 0· 001 (与25mg/kg金霉素组比较），η = 6。
【具体实施方式】
[0019] 实施例1
[0020] 大肠杆菌（Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus)由 南京农业大学动物医学院提供。其中大肠杆菌细菌型为452和048,金黄色葡萄球菌细菌型 为 563 和 187。
[0021] 将4种大肠杆菌和金黄色葡萄球菌转接于LB培养基中（50 μ L菌液+5mLLB培 养基），摇床培养5小时后，分装到2mL管中，5000g离心4分钟，洗脱除去远LB培养基后 换上新的培养基。使用酶标仪测定0D600值，计算菌液中细菌数，然后用LB培养基稀释至 IX 108CFU/mL。
[0022] 根据抗生素使用标准以及其在肉鸡生产中的推荐用量，即金霉素50-100mg/kg，黄 霉素 l-5mg/kg，杆菌肽锌25-50mg/kg，硫酸粘杆菌素2-20mg/kg，将4种饲用抗生素稀释为 推荐最大用量的2倍。
[0023] 金霉素（15% )金河生物科技股份有限公司生产，用0. lmol/L的盐酸液溶解，再用 灭菌水稀释成有效成分含量为l〇〇mg/kg ;
[0024] 黄霉素（4% )中牧集团生产，用0. lmol/L的盐酸液溶解，再用灭菌水稀释成有效 成分含量为l〇mg/kg ;
[0025] 杆菌肽锌（10%)天津新星兽药厂生产，用0. lmol/L的盐酸液溶解，再用灭菌水稀 释成有效成分含量为200mg/kg ;
[0026] 硫酸粘杆菌素（(10% )天津新星兽药厂生产，用0. lmol/L的盐酸液溶解，再用灭 菌水稀释成有效成分含量为40mg/kg。
[0027] 上述溶液用孔径为0. 2 μ m的滤菌器滤菌后放于4°C冰箱中保存。
[0028] 向96孔微量板各孔中加入100 μ L LB液体培养液，第一列保证加入竹醋液后总体 积为200 μ L,混合均匀,从第1孔取出混合液IOOyL,加至第2孔中，混合均匀,从第2孔中 取出混合液100 μ L，加至第3孔中，混合均匀，…，依次倍比稀释，直至第9孔，从第9孔中 取出混合液100 μ L，弃去。将上述浓度为IX 108CFU/mL的菌悬液加至含不同药物浓度的 96孔微量板各孔中，每孔100 μ L，置30°C温箱静止培养24h。在600nm处测定吸光度。
[0029] 向96孔微量板各孔中加入50 μ L LB液体培养液，然后载分别加入50 μ L竹醋液 和处理好的饲用抗生素，将上述浓度为I X 108CFU/mL的菌悬液加至含不同药物浓度的96 孔微量板各孔中，每孔100 μ L，置30°C温箱静止培养24h。在600nm处测定吸光度。
[0030] 实施例2
[0031] 本发明提供的一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方中各组分的重量百分比前 期日粮：玉米55. 1%、豆柏32. 2%、玉米蛋白粉4. 5%、豆油3. 2%、预混料5%、竹醋液1%、 金霉素；后期日粮：玉米60. 8%、豆柏23. 7、玉米蛋白粉5. 5%、豆油5%、预混料5%、竹醋 液1%、金霉素。其中复合预混料均购自江苏省南京华牧动物科技研究所，竹醋液购于江阴 中炬生物技术有限公司。
[0032] 本发明提一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方制成配合饲料的方法按以下步 骤进行
[0033] A、按照竹醋液替代饲料抗生素促生长配方中各组分重量百分比的要求称取上述 的各种饲料原料；
[0034] B、将玉米和豆柏两种用量最多的原料放入混匀机中进行搅拌混合；
[0035] C、将玉米蛋白粉、豆油、预混料、竹醋液和金霉素进行初步预混合，然后再放入混 匀机与玉米豆柏一起混合均匀。
[0036] D、打包备用。
[0037] 实施例3
[0038] 米用单因子完全随机化设计试验，将240只一日龄健康AA肉鸡随机分成5个处 理组，第一组在基础日粮基础上添加25mg/kg金霉素，后四组分别在基础日粮中添加试验 一确定的最适添加量（1 % )的基础上添加饲用抗生素（金霉素）7. 5mg/kg、12. 5mg/kg、 17. 5mg/kg、25mg/kg。每个处理设6个重复，每个重复8只鸡。基础日粮参照NRC1994标准 配制，试验期为42天，0-21日龄饲喂肉鸡前期日粮，22-42日龄饲喂肉鸡后期日粮。
[0039] 进雏前，对鸡舍进行彻底清洗、消毒。试验鸡采用笼养，期间24h光照（白天自然 光照，夜间白炽灯光照），自由采食和饮水。鸡舍l-7d温度控制在32°C左右，以后温度逐渐 下调至室温。于试验第12d进行鸡新城疫、鸡传染性支气管炎和传染性法氏囊病三联多价 灭活疫苗及禽流感免疫，免疫方式采用颈背侧皮下注射，试验中观察鸡群的精神状态，记录 试验肉鸡采食量、死淘汰情况。
[0040] 1.竹醋液与其他饲用抗生素抑菌效果比较
[0041] I. 1竹醋液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果
[0042] 竹醋液对大肠杆菌（563和187)和金黄色葡萄球菌（452和048)的抑菌效果如 图1，由图1可知竹醋液对大肠杆菌的抑菌效果好于金黄色葡萄球菌，最小抑菌浓度约为 3. 13% -6. 25%。
[0043] 1. 2四种饲用抗生素的抑菌效果比较
[0044] 竹醋液（50% )与杆菌肽锌（100mg/kg)、黄霉素（5mg/kg)、金霉素（100mg/kg)、硫 酸粘杆菌素（20mg/kg)对大肠杆菌（563和187)和金黄色葡萄球菌（452和048)的抑菌效 果比较如图2,由图2可知竹醋液的抑菌效果优于四种饲用抗生素。
[0045] 2.养殖结果分析
[0046] 2. 1对肉鸡生产性能的影响
[0047] 由表1-1可知，肉鸡日粮中添加竹醋液（BV)和一定比例的金霉素与仅添加金霉素 相比，体增重均有所增加，其中试验全期（0-6周）1% BV+7. 5mg/kg金霉素组肉鸡体增重显 著高于25mg/kg金霉素组（P < 0. 05);在3个阶段料重比无显著差异（P > 0. 05)。
[0048] 表1-1竹醋液和金霉素对肉鸡体增重和料重比的影响
【权利要求】
1. 一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方，其特征在于包含以下营养素和水平：前期 日粮：粗蛋白20-23%、代谢能12. 56MJ/kg、钙0.97%、有效磷0.33%、赖氨酸1. 18%、蛋 氨酸0.5%、蛋氨酸+胱氨酸0.87% ;将原料通过如下配置方法得到：玉米55. 1 %、豆柏 32. 2%、玉米蛋白粉4. 5%、豆油3. 2%、预混料5%、竹醋液1 %、金霉素7. 5mg/kg。 后期日粮：粗蛋白19. 41 %、代谢能13. 34MJ/kg、钙0? 81 %、有效磷0? 39 %、赖氨酸 1. 06%、蛋氨酸0. 43 %、蛋氨酸+胱氨酸0. 76% ;将原料通过如下配置方法得到：玉米 60. 8%、豆柏23. 7、玉米蛋白粉5. 5%、豆油5%、预混料5%、竹醋液1 %、金霉素7. 5mg/kg。
2. -种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方的制备方法，包括按重量百分比取：前期日 粮：玉米55. 1 %、豆柏32. 2%、玉米蛋白粉4. 5%、豆油3. 2%、预混料5%、竹醋液1 %、金霉 素7. 5mg/kg ;后期日粮：玉米60. 8%、豆柏23. 7、玉米蛋白粉5. 5%、豆油5%、预混料5%、 竹醋液1%、金霉素7. 5mg/kg。
3. 根据权利要求2所述的竹醋液替代饲料抗生素促生长配方的制备，其特征在于该 饲料中的营养成分种类和组成比例为：前期日粮：粗蛋白20-23 %、代谢能12. 56MJ/kg、 钙0.97%、有效磷0.33%、赖氨酸L 18%、蛋氨酸0.5%、蛋氨酸+胱氨酸0.87% ;后期日 粮：粗蛋白19. 41 %、代谢能13. 34MJ/kg、钙0? 81 %、有效磷0? 39%、赖氨酸1. 06%、蛋氨酸 0. 43 %、蛋氨酸+胱氨酸0. 76 %。
4. 根据权利要求1或者2所述的竹醋液替代饲料抗生素促生长配方制成的配合饲料， 其特征在于将玉米蛋白粉、豆油、预混料、竹醋液和金霉素进行初步预混合，然后再放入混 匀机与玉米豆柏一起混合均匀。
【文档编号】A23K1/14GK104366008SQ201410250682
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年6月9日 优先权日:2014年6月9日
【发明者】李春梅, 崔宇, 普少瑕, 李延森 申请人:江阴中炬生物科技有限公司