一种石蒜再生植株的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种石蒜再生植株的快速繁殖方法。包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、愈伤组织的分化、炼苗培养。本发明可以在短期内获得大量的愈伤组织和再生植株，为石蒜药用成分的开发利用奠定基础。
【专利说明】一种石蒜再生植株的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物组织培养的快繁方法，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 石蒜，rat/iaia 」ZferA.,又名龙爪花、老鸦蒜、彼岸花、曼珠沙华， 石蒜科，多年生草本，初冬出叶。花茎先叶抽出，顶生4飞朵花；花鲜红色或有白色边缘，花 被筒极短，上部6裂，裂片狭披针形，边缘皱缩，向外反卷。蒴果背裂。种子多数。花期9~10 月，果期l(Tll月。生于阴湿山地或丛林下，也有栽培。产华东、中南及西南。花有红色，黄 色，蓝色，紫色和白色。具有较强的观赏性。野生品种生长于阴森潮湿地，其着生地为红壤， 因此耐寒性强，喜阴，能忍受的高温极限为日平均温度24°C ;喜湿润，也耐干旱，习惯于偏酸 性土壤，以疏松、肥沃的腐殖质土最好。有夏季休眠习性，球根含有生物碱利克林毒，可引致 呕吐、痉挛等症状，对中枢神经系统有明显影响，可用于镇静、抑制药物代谢及抗癌作用。用 分球、播种、鳞块基底切割等方法繁殖，以分球法为主。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种石蒜的快速繁殖方法，由该方法所制备得 到的石蒜成活率高，品质优良，可以在短期内获得大量的愈伤组织和再生植株。
[0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的： 选用石蒜幼嫩的叶片，用肥皂水中浸泡三分钟，用10%次氯酸钠消毒l〇min，无菌水 冲洗2次，再用0. 1%升汞消毒2min，无菌水冲洗5次消毒处理后的无菌叶片接种入培养 基WPM+6-BA2. Omg/L+2，4-DO. 5mg/L进行愈伤组织的诱导，条件为温度27 ± 1 °C，暗光照， 湿度60%，30天后，转接入培养基WPM+NAAO. 5mg/L+KT2. Omg/L+1. 0mg/L6-BA进行愈伤组 织的增殖培养，条件为温度27土 1°C，光强20001x，光照12h/d，湿度60%，增殖两代后加入 3/4WPM+IBA0. 5-0. 8mg/L+6-BA2-2. 5mg/L+0. 5mg/LKT+GA3l. 0-1. 5mg/L 诱导愈伤组织分化， 条件为温度27 ± 1 °C，湿度60%，光照强度40001x，光期16h/d，待分化出来的幼苗根长至2cm 左右，苗长至5cm，在室温和自然光下炼苗两周，打开封口膜，洗去根部培养基，移栽到高压 灭菌过的森林腐殖土 ：蛭石=2:1的花盆中，基质用0. 1%的高锰酸钾浸透，待长出新根后每 隔3天喷洒一次改良藿格兰营养液，湿度85%，光照强度50001x，光期15h/d，一个月后统计 成活率。
[0005] 采用本发明制备的石蒜幼苗成活率高，周期短，能耗少，利于大规模种植。
[0006] 下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施方式。 【具体实施方式】 [0007] 实施例1 选用石蒜幼嫩的叶片，用肥皂水中浸泡三分钟，用10%次氯酸钠消毒lOmin，无菌水 冲洗2次，再用0. 1%升汞消毒2min，无菌水冲洗5次消毒处理后的无菌叶片接种入培养 基WPM+6-BA2. Omg/L+2,4-DO. 5mg/L进行愈伤组织的诱导，条件为温度27土 1°C，暗光照， 湿度60%，30天后，转接入培养基WPM+NAAO. 5mg/L+KT2. Omg/L+1. 0mg/L6-BA进行愈伤组 织的增殖培养，条件为温度27 土 TC，光强20001x，光照12h/d，湿度60%，增殖两代后加入 3/4WPM+IBA0. 5mg/L+6-BA2. Omg/L+O. 5mg/LKT+GA3l. Omg/L 诱导愈伤组织分化，条件为温度 27 ± 1 °C，湿度60%，光照强度40001x，光期16h/d，待分化出来的幼苗根长至2cm左右，苗长 至5cm，在室温和自然光下炼苗两周，打开封口膜，洗去根部培养基，移栽到高压灭菌过的森 林腐殖土 ：蛭石=2:1的花盆中，基质用0. 1%的高锰酸钾浸透，待长出新根后每隔3天喷洒 一次改良藿格兰营养液，湿度85%，光照强度50001x，光期15h/d，再生植株成活率90%。 [0008] 实施例2 选用石蒜幼嫩的叶片，用肥皂水中浸泡三分钟，用10%次氯酸钠消毒lOmin，无菌水 冲洗2次，再用0. 1%升汞消毒2min，无菌水冲洗5次消毒处理后的无菌叶片接种入培养 基WPM+6-BA2. Omg/L+2，4-DO. 5mg/L进行愈伤组织的诱导，条件为温度27 ± 1 °C，暗光照， 湿度60%，30天后，转接入培养基WPM+NAAO. 5mg/L+KT2. Omg/L+1. 0mg/L6-BA进行愈伤组 织的增殖培养，条件为温度27土 1°C，光强20001x，光照12h/d，湿度60%，增殖两代后加入 3/4WPM+IBA0. 8mg/L+6-BA2. 5mg/L+0. 5mg/LKT+GA3l. 5mg/L 诱导愈伤组织分化，条件为温度 27 ± 1 °C，湿度60%，光照强度40001x，光期16h/d，待分化出来的幼苗根长至2cm左右，苗长 至5cm，在室温和自然光下炼苗两周，打开封口膜，洗去根部培养基，移栽到高压灭菌过的森 林腐殖土 ：蛭石=2:1的花盆中，基质用0. 1%的高锰酸钾浸透，待长出新根后每隔3天喷洒 一次改良藿格兰营养液，湿度85%，光照强度50001x，光期15h/d，再生植株成活率91%。 [0009] 实施例3 选用石蒜幼嫩的叶片，用肥皂水中浸泡三分钟，用10%次氯酸钠消毒lOmin，无菌水 冲洗2次，再用0. 1%升汞消毒2min，无菌水冲洗5次消毒处理后的无菌叶片接种入培养 基WPM+6-BA2. Omg/L+2，4-DO. 5mg/L进行愈伤组织的诱导，条件为温度27 ± 1 °C，暗光照， 湿度60%，30天后，转接入培养基WPM+NAAO. 5mg/L+KT2. Omg/L+1. 0mg/L6-BA进行愈伤组 织的增殖培养，条件为温度27土 1°C，光强20001x，光照12h/d，湿度60%，增殖两代后加入 3/4WPM+IBA0. 7mg/L+6-BA2. 5mg/L+0. 5mg/LKT+GA3l. Omg/L 诱导愈伤组织分化，条件为温度 27 ± 1 °C，湿度60%，光照强度40001x，光期16h/d，待分化出来的幼苗根长至2cm左右，苗长 至5cm，在室温和自然光下炼苗两周，打开封口膜，洗去根部培养基，移栽到高压灭菌过的森 林腐殖土 ：蛭石=2:1的花盆中，基质用0. 1%的高锰酸钾浸透，待长出新根后每隔3天喷洒 一次改良藿格兰营养液，湿度85%，光照强度50001x，光期15h/d，再生植株成活率88%。
【权利要求】
1. 一种石蒜再生植株的快速繁殖方法，其特征是：石蒜的叶片经消毒处理，接种入 培养基WPM+6-BA2. Omg/L+2，4-DO. 5mg/L进行愈伤组织的诱导，30天后，转接入培养基 WPM+NAAO. 5mg/L+KT2. Omg/L+1. 0mg/L6-BA进行愈伤组织的增殖培养，增殖两代后加入 3/4WPM+IBA0. 5-0. 8mg/L+6-BA2-2. 5mg/L+0. 5mg/LKT+GA3l. 0-1. 5mg/L 诱导愈伤组织分化， 待分化出来的幼苗根长至2cm左右，苗长至5cm，取出炼苗移栽，统计成活率。
2. 根据权利要求1所述的一种石蒜再生植株的快速繁殖方法，其特征是：所述的消毒 处理为：选用石蒜幼嫩的叶片，用肥皂水中浸泡三分钟，用10%次氯酸钠消毒lOmin，无菌水 冲洗2次，再用0. 1%升萊消毒2min,无菌水冲洗5次。
3. 根据权利要求1所述的一种石蒜再生植株的快速繁殖方法，其特征是：愈伤组织诱 导的条件为温度27 ± 1 °C，暗光照，湿度60%。
4. 根据权利要求1所述的一种石蒜再生植株的快速繁殖方法，其特征是：愈伤组织增 殖的条件为温度27±1°C，光强20001x，光照12h/d，湿度60%。
5. 根据权利要求1所述的一种石蒜再生植株的快速繁殖方法，其特征是：愈伤组织分 化的条件为温度27±1°C，湿度60%，光照强度40001x，光期16h/d。
6. 根据权利要求1所述的一种石蒜再生植株的快速繁殖方法，其特征是：石蒜炼苗移 栽的方法为在室温和自然光下炼苗两周，打开封口膜，洗去根部培养基，移栽到高压灭菌过 的森林腐殖土 ：蛭石=2:1的花盆中，基质用0. 1%的高锰酸钾浸透，待长出新根后每隔3天 喷洒一次改良藿格兰营养液，湿度85%，光照强度50001x，光期15h/d。
【文档编号】A01H4/00GK104206274SQ201410463052
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月12日 优先权日:2014年9月12日
【发明者】杨存 申请人:南京通泽农业科技有限公司