一种黑三棱组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种黑三棱组织培养的快速繁殖方法，包括黑三棱无菌芽的获得、芽的诱导、丛生芽的增殖、室外生根炼苗移栽等步骤，本发明方法建立了黑三棱的组培快繁体系，为开发和保护黑三棱野生资源提供一定的材料来源和技术方法。
【专利说明】一种黑三棱组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及黑三棱组织培养的快繁方法，属于植物栽培【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 黑三棱，黑三棱科，又名三棱、泡三棱，5· io/ofli/kra? (Graebn.) Buch.-Ham. ex Juz.，多年生水生或沼生草本，通常生于海拔1500米以下的湖泊、河沟、沼 泽、水塘边浅水处，仅在我国西藏见于3600米高山水域中。产黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、 河北、山西、陕西、甘肃、新疆、江苏、江西、湖北、云南等省区。阿富汗、朝鲜、日本、中亚地区 和西伯利亚及远东其他地区亦有分布。善喜暖湿润气候，宜在向阳、低湿的环境中生长。对 土壤要求不严，可栽种在沟渠、池塘的浅水处，也可栽在水田里。本种块茎是我国常用的中 药，即"三棱"，具破瘀、行气、消积、止痛、通经、下乳等功效，是本科中重要经济植物；亦用于 花卉观赏。用块茎繁殖。冬季收获的块茎，放于客中贮藏，翌春用贮存的块茎或临时挖取的 块莖为繁殖材料，按30cm开穴、深约10cm,每穴平放块莖2-3个,栽后烧灌清水，经常保持有 水。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种黑三棱的快速繁殖方法，该方法建立了黑 三棱的组培快繁体系，为开发和保护黑三棱野生资源提供一定的材料来源和技术方法。
[0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的： 选取黑三棱块茎的幼嫩芽，流水冲洗30min，超净工作台上70%的酒精处理30s，0. 15% 的升萊处理18min，无菌水冲洗5次，用含500mg/L的头孢霉素的无菌水浸泡30min，无 菌水冲洗2次，置于无菌滤纸上吸干水分，消毒处理过的黑三棱芽接入B 6+6-BA2. 5mg/ L+IBAO. 4mg/L+ZT0. 8mg/L+500mg/L水解乳蛋白培养基中进行芽的诱导，附加蔗糖30g/L， 琼脂6. 5g/L，温度28°C，光照强度20001x，每天光照时间10h，PH5. 8,湿度85%，诱导出来 的芽放入培养基B6+6-BAl. 5-2. 0mg/L+IBA0. 3-0. 4mg/L进行丛生芽的增殖培养，附加蔗糖 50g/L，琼脂6. 5g/L，温度28°C，光照强度50001x，每天光照时间12h，PH5. 8-6. 0,湿度85%， 长约3cm的芽苗取出，洗去基部培养基，形态学下端2-3cm浸泡于1/2MS溶液中10min， 栽植于灭菌过的田园土 ：蛭石：锯末=3 :1 :1基质中，使用自动喷水装置，每三天喷洒一次 70-100ppmNAA溶液，每两周喷施600倍的多菌灵溶液，一个月后统计生根成活率。
[0005] 采用本发明制备的黑三棱成活率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。
[0006] 下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施方式。
【具体实施方式】 [0007] 实施例1 选取黑三棱块茎的幼嫩芽，流水冲洗30min，超净工作台上70%的酒精处理30s，0. 15% 的升萊处理18min，无菌水冲洗5次，用含500mg/L的头孢霉素的无菌水浸泡30min，无 菌水冲洗2次，置于无菌滤纸上吸干水分，消毒处理过的黑三棱芽接入B6+6-BA2. 5mg/ L+IBAO. 4mg/L+ZT0. 8mg/L+500mg/L水解乳蛋白培养基中进行芽的诱导，附加蔗糖30g/L， 琼脂6. 5g/L，温度28°C，光照强度20001x，每天光照时间10h，PH5. 8,湿度85%，诱导出来的 芽放入培养基B6+6-BAl. 5mg/L+IBA0. 3mg/L进行丛生芽的增殖培养，附加蔗糖50g/L，琼脂 6. 5g/L，温度28°C，光照强度50001x，每天光照时间12h，PH5. 8-6. 0,湿度85%，长约3cm的 芽苗取出，洗去基部培养基，形态学下端2-3cm浸泡于1/2MS溶液中lOmin，栽植于灭菌过的 田园土 ：蛭石：锯末=3 :1 :1基质中，使用自动喷水装置，每三天喷洒一次70ppmNAA溶液，每 两周喷施600倍的多菌灵溶液，一个月后统计生根成活率，成活率88%。
[0008] 实施例2 选取黑三棱块茎的幼嫩芽，流水冲洗30min，超净工作台上70%的酒精处理30s，0. 15% 的升萊处理18min，无菌水冲洗5次，用含500mg/L的头孢霉素的无菌水浸泡30min，无 菌水冲洗2次，置于无菌滤纸上吸干水分，消毒处理过的黑三棱芽接入B 6+6-BA2. 5mg/ L+IBAO. 4mg/L+ZT0. 8mg/L+500mg/L水解乳蛋白培养基中进行芽的诱导，附加蔗糖30g/L， 琼脂6. 5g/L，温度28°C，光照强度20001x，每天光照时间10h，PH5. 8,湿度85%，诱导出来的 芽放入培养基B6+6-BA2. 0mg/L+IBA0. 4mg/L进行丛生芽的增殖培养，附加蔗糖50g/L，琼脂 6. 5g/L，温度28°C，光照强度50001x，每天光照时间12h，PH5. 8-6. 0,湿度85%，长约3cm的 芽苗取出，洗去基部培养基，形态学下端2-3cm浸泡于1/2MS溶液中10min，栽植于灭菌过的 田园土 ：蛭石：锯末=3 :1 :1基质中，使用自动喷水装置，每三天喷洒一次90ppmNAA溶液，每 两周喷施600倍的多菌灵溶液，一个月后统计生根成活率，成活率90%。
[0009] 实施例3 选取黑三棱块茎的幼嫩芽，流水冲洗30min，超净工作台上70%的酒精处理30s，0. 15% 的升萊处理18min，无菌水冲洗5次，用含500mg/L的头孢霉素的无菌水浸泡30min，无 菌水冲洗2次，置于无菌滤纸上吸干水分，消毒处理过的黑三棱芽接入B 6+6-BA2. 5mg/ L+IBAO. 4mg/L+ZT0. 8mg/L+500mg/L水解乳蛋白培养基中进行芽的诱导，附加蔗糖30g/L， 琼脂6. 5g/L，温度28°C，光照强度20001x，每天光照时间10h，PH5. 8,湿度85%，诱导出来的 芽放入培养基B6+6-BA2. 0mg/L+IBA0. 4mg/L进行丛生芽的增殖培养，附加蔗糖50g/L，琼脂 6. 5g/L，温度28°C，光照强度50001x，每天光照时间12h，PH5. 8-6. 0,湿度85%，长约3cm的 芽苗取出，洗去基部培养基，形态学下端2-3cm浸泡于1/2MS溶液中10min，栽植于灭菌过的 田园土 ：蛭石：锯末=3 :1 :1基质中，使用自动喷水装置，每三天喷洒一次lOOppmNAA溶液， 每两周喷施600倍的多菌灵溶液，一个月后统计生根成活率，成活率91%。
【权利要求】
1. 一种黑三棱组织培养的快速繁殖方法，包括黑三棱无菌芽的获得、芽的诱导、丛生 芽的增殖、室外生根炼苗移栽，其主要步骤如下： (1) 取黑三棱块茎的芽，进行消毒处理； (2) 取步骤（1)消毒处理过的黑三棱芽接入Β6+6-ΒΑ2· 5mg/L+IBA0· 4mg/L+ZIU 8mg/ L+500mg/L水解乳蛋白培养基中进行芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6. 5g/L，温度28°C，光 照强度20001x，每天光照时间10h，PH5. 8,湿度85% ; (3) 取步骤（2)诱导出来的芽放入培养基Β6+6-ΒΑ1· 5-2. Omg/L+IBAO. 3-0. 4mg/L进行 丛生芽的增殖培养，附加蔗糖50g/L，琼脂6. 5g/L，温度28°C，光照强度50001x，每天光照时 间 12h，PH5. 8,湿度 85% ; (4) 取步骤（3)培养出来的丛生芽取出进行室外生根炼苗移栽。
2. 按照权利要求1所述的一种黑三棱组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤 (1)中所述黑三棱无菌芽的获得为，选取黑三棱块茎的幼嫩芽，流水冲洗30min，超净工作台 上70%的酒精处理30s，0. 15%的升汞处理18min，无菌水冲洗5次，用含500mg/L的头孢霉 素的无菌水浸泡30min，无菌水冲洗2次，置于无菌滤纸上吸干水分。
3. 按照权利要求1所述的一种黑三棱组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤 (4)中一枝黄花的生根炼苗培养方法为长约3cm的芽苗取出，洗去基部培养基，形态学下端 2-3cm浸泡于1/2MS溶液中lOmin，栽植于灭菌过的田园土 ：蛭石：锯末=3 :1 :1基质中，使 用自动喷水装置，每三天喷洒一次70-100ppmNAA溶液，每两周喷施600倍的多菌灵溶液，一 个月后统计生根成活率。
【文档编号】A01H4/00GK104206273SQ201410463051
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月12日 优先权日:2014年9月12日
【发明者】杨存 申请人:南京通泽农业科技有限公司