三七不定根的诱导及组织培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物的不定根组织培养及生产方法，特别是涉及一种三七不定根 的诱导及组织培养方法。
【背景技术】
[0002] 三七（Panaxnotoginseng)是五加科人参属植物，是我国传统的名贵中药和云南 省重要的特色资源，也是发展中药和天然药物产业的重要原料。三七在心血管、脑血管、神 经、免疫等系统具有多方面的药理活性，还具有对肝损伤的保护作用和抗肿瘤、抗炎等作 用。以三七皂苷为主要原料开发的中成药除血塞通外，还有血栓通、复方丹参滴丸、片仔癀 和云南白药等多种品牌的中成药。据统计，目前我国医药健康产品中，用三七为原料的产品 至少有200种，其年销售额在50亿元以上。三七产业在我国医药健康事业中具有重要的意 义。然而，三七为多年生植物，适宜于冬暖夏凉的气候，喜半阴和潮湿的生态环境。三七的 自然属性决定了适于其生长的范围仅限于少数特殊环境条件的地区，导致三七资源严重缺 乏，对以三七为原料的产业存在着潜在的威胁。
[0003] 通过组织培养的方法可以获得有效成分含量高、生长周期短的三七培养物，已解 决土地及三七资源严重缺乏的问题。具有重要的经济意义与社会意义。其中不定根培养 是80年代发展起来的一项新技术。不定根是由植物的愈伤组织诱导出来的根，和药用植物 的悬浮细胞相比，其活性成分的含量稳定；和大田栽培生长的植物相比，其生长速度要快上 千百倍且其活性成分含量高。因此，比较适合药用植物的组织培养以获取有效成分或作为 替代原料，特别是用药部位为其根部的药用植物。
[0004] 中国专利号为CN103923874A公开的三七悬浮细胞的培养方法，该方法所获得的 皂苷含量为2. 31±0. 35。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供三七不定根的诱导及组织培养方 法。
[0006] 本发明的技术方案概述如下：
[0007] -种三七不定根的诱导及组织培养方法，包括以下步骤：
[0008] (1)三七不定根的诱导：取三七的愈伤组织，接种于固体培养基上，在无菌、 23-25°C及避光的条件下培养3-5周，得到带有愈伤组织的三七不定根；
[0009] (2)三七不定根的继代培养：将带有愈伤组织的三七不定根转接到液体培养基 中，在转速为110_130r?mirT1的摇床上，在无菌、23-25°C及光照条件下连续培养4-5周；继 代3-5次。
[0010] 固体培养基为在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖和琼脂，使吲哚丁酸的 终浓度为3. 0-5.Omg/L、萘乙酸的终浓度为0. 5-1.Omg/L、蔗糖的终浓度为30-40g/L、琼脂 的终浓度为 6-7g/L，pH= 5. 8-6. 0。
[0011] 液体培养基为在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸和蔗糖，使吲哚丁酸的终浓 度为3. 0-5.Omg/L、萘乙酸的终浓度为0? 5-1.Omg/L、蔗糖的终浓度为30-40g/L，pH= 5. 8~6. 0〇
[0012] 本发明的优点：
[0013] 本发明利用组织培养方法培养三七不定根，其生长速率与三七自然生长相比较 快，并且其活性次级代谢产物的含量高且比较稳定，培养物较均一，同时，培养条件在人工 控制下不受外界多变天气及病虫害的影响。工艺过程简单，成本低廉，诱导率高，重复性好， 不定根生长速率快。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0015] 实施例1
[0016] 固体培养基的制备：在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖和琼脂，使吲哚丁 酸的终浓度为3.Omg/L、萘乙酸的终浓度为1.Omg/L、蔗糖的终浓度为40g/L、琼脂的终浓度 为6g/L，混合加热至完全溶解，调pH= 5. 8,在121 °C，0.IMP压力下灭菌25分钟，冷却至常 温，备用。
[0017] 实施例2
[0018] 固体培养基的制备：在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖和琼脂，使吲哚丁 酸的终浓度为5.Omg/L、萘乙酸的终浓度为1.Omg/L、蔗糖的终浓度为30g/L、琼脂的终浓度 为7g/L，混合加热至完全溶解，调pH= 5. 9,在121 °C，0.IMP压力下灭菌25分钟，冷却至常 温，备用。
[0019] 实施例3
[0020] 固体培养基的制备：在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖和琼脂，使吲哚丁 酸的终浓度为3. 0mg/L、萘乙酸的终浓度为0. 5mg/L、蔗糖的终浓度为35g/L、琼脂的终浓度 为7g/L，混合加热至完全溶解，调pH= 6. 0,在121 °C，0.IMP压力下灭菌25分钟，冷却至常 温，备用。
[0021] 实施例4
[0022] 液体培养基的制备：在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸和L蔗糖，使吲哚丁酸 的终浓度为3. 0mg/L、萘乙酸的终浓度为1. 0mg/L、蔗糖的终浓度为40g/L，调pH= 5. 8,在 121°C，0?IMP压力下灭菌25分钟备用。
[0023] 实施例5
[0024] 液体培养基的制备：在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸和L蔗糖，使吲哚丁酸 的终浓度为5. 0mg/L、萘乙酸的终浓度为1. 0mg/L、蔗糖的终浓度为30g/L，调pH= 5. 9,在 121°C，0?IMP压力下灭菌25分钟备用。
[0025] 实施例6
[0026] 液体培养基的制备：在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸和L蔗糖，使吲哚丁酸 的终浓度为3. 0mg/L、萘乙酸的终浓度为0. 5mg/L、蔗糖的终浓度为35g/L，调pH= 6. 0,在 121°C，0?IMP压力下灭菌25分钟备用。
[0027]SH培养基配方见表1.
[0028]表1SH培养基配方表
【主权项】
1. 一种三七不定根的诱导及组织培养方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 三七不定根的诱导：取三七的愈伤组织，接种于固体培养基上，在无菌、23-25?及 避光的条件下培养3-5周，得到带有愈伤组织的三七不定根； (2) 三七不定根的继代培养：将带有愈伤组织的三七不定根转接到液体培养基中，在 转速为110_130r MirT1的摇床上，在无菌、23-25°C及光照条件下连续培养4-5周；继代3-5 次。
2. 根据权利要求1所述的一种三七不定根的诱导及组织培养方法，其特征是所述固 体培养基为在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖和琼脂，使吲哚丁酸的终浓度为 3. 0-5. Omg/L、萘乙酸的终浓度为0. 5-1. Omg/L、蔗糖的终浓度为30-40g/L、琼脂的终浓度 为 6-7g/L，pH = 5. 8-6. 0。
3. 根据权利要求1所述的一种三七不定根的诱导及组织培养方法，其特征是所述液体 培养基为在SH培养基中加入吲哚丁酸、萘乙酸和蔗糖，使吲哚丁酸的终浓度为3. 0-5. Omg/ L、萘乙酸的终浓度为0. 5-1. Omg/L、蔗糖的终浓度为30-40g/L，pH = 5. 8-6. 0。
【专利摘要】本发明公开了一种三七不定根的诱导及组织培养方法，包括以下步骤:(1)三七不定根的诱导：取三七的愈伤组织，接种于固体培养基上，在无菌、23-25℃及避光的条件下培养3-5周，得到带有愈伤组织的三七不定根；(2)三七不定根的继代培养:将带有愈伤组织的三七不定根转接到液体培养基中，在转速为110-130r·min-1的摇床上，在无菌、23-25℃及光照条件下连续培养4-5周；继代3-5次。本发明利用组织培养方法培养三七不定根，其生长速率快，并且其活性次级代谢产物的含量高且比较稳定，培养物较均一，同时，培养条件在人工控制下不受外界多变天气及病虫害的影响。工艺过程简单，成本低廉，诱导率高，重复性好。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104620986
【申请号】CN201510075978
【发明人】高文远, 王娟, 李金鑫, 李静, 李建丽, 刘书杰
【申请人】天津大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月12日