一种吴茱萸的组培快速繁殖方法
【专利摘要】本发明公开了一种吴茱萸的组培快速繁殖方法，包括无菌带芽茎段的获得、芽诱导培养、丛生芽增殖培养、生根培养、炼苗等步骤。采用本发明所提供的组培技术方法对吴茱萸进行组培微繁，解决了吴茱萸遗传稳定性差，繁殖率低等技术难题，达到了增殖系数高，成活率高的要求，可以为吴茱萸的产业化生产提供一种周期短、繁殖率高的人工培育方法。
【专利说明】一种吴茱萸的组培快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种吴茱萸的组培快速繁殖方法，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 吴茱萸，芸香科，别名吴萸、茶辣、漆辣子、臭辣子树等，小 乔木或灌木，产秦岭以南各地，但海南未见有自然分布，曾引进栽培，均生长不良。生于平地 至海拔1500米山地疏林或灌木丛中，多见于向阳坡地。各地有小或大量栽种。吴茱萸对土 壤要求不严，一般山坡地、平原、房前屋后、路旁均可种植。中性，微碱性或微酸性的土壤都 能生长，但作苗床时尤以土层深厚、较肥沃、排水良好的壤土或砂壤土为佳，低洼积水地不 宜种植。是一种药用植物，治吞酸，蹶阴痰涎头痛，阴毒腹痛，疝气，血痢，喉舌口疮，现代研 究表明对中枢神经系统，消化系统，心血管系统皆有很好的疗效。常用的繁殖方式有根插繁 殖，枝插繁殖，分蘖繁殖，但繁殖效果不理想，现代组培技术应用于吴茱萸的繁殖尚无人研 究，利用组培技术可以提高繁殖效率，增加吴茱萸的利用率。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种吴茱萸的组培快速繁殖方法，由该方法所 制备得到的吴茱萸组培幼苗生长周期短，增殖系数高，生根率高，遗传性状稳定，病虫害低， 可以规模化的进行产业化生产。
[0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的： 取吴茱萸带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分钟，流水冲洗1.5小时，使 用75%酒精处理20s，0. 2%的升汞消毒7min，无菌水冲洗5-7遍，切去切口，获得的无菌的 带芽茎段接种入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中进行芽诱导，诱导出来 的吴茱萸丛生芽转接于改良DKW+TDZO. 3mg/L+NAA0. 2mg/L+ABA2mg/L上进行丛生芽增殖培 养，增殖的丛生芽处理后接入含1/3改良DKW+NAAO. lmg/L营养液的基质中进行生根诱导， 诱导出来的吴茱萸试管苗栽植于沙壤土：珍珠岩=3 :2的基质中，沙壤土和珍珠岩使用高压 灭菌锅灭菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液浇透，栽植后定期浇水，三周后添 加农家肥，湿度90%，温度25°C，遮盖两层薄膜，透光率保持在30%左右，45天后观察生长情 况，统计生根率。
[0005] 采用本发明制备的吴茱萸组培幼苗生产周期短、繁殖率高，生根率92%。
[0006] 下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施方式。
【具体实施方式】 [0007] 实施例1 取吴茱萸带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分钟，流水冲洗1.5小时，使 用75%酒精处理20s，0. 2%的升汞消毒7min，无菌水冲洗5-7遍，切去切口，获得的无菌的 带芽茎段接种入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中进行芽诱导，诱导出来 的吴茱萸丛生芽转接于改良DKW+TDZO. 2mg/L+NAA0. lmg/L+ABA2mg/L上进行丛生芽增殖培 养，增殖的丛生芽处理后接入含1/3改良DKW+NAAO. 05mg/L营养液的基质中进行生根诱导， 诱导出来的吴茱萸试管苗栽植于沙壤土：珍珠岩=3 :2的基质中，沙壤土和珍珠岩使用高压 灭菌锅灭菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液浇透，栽植后定期浇水，三周后添 加农家肥，湿度90%，温度25°C，遮盖两层薄膜，透光率保持在30%左右，45天后观察生长情 况，生根率88%。
[0008] 实施例2 取吴茱萸带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分钟，流水冲洗1.5小时，使 用75%酒精处理20s，0. 2%的升汞消毒7min，无菌水冲洗5-7遍，切去切口，获得的无菌的 带芽茎段接种入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中进行芽诱导，诱导出来 的吴茱萸丛生芽转接于改良DKW+TDZO. 5mg/L+NAA0. 3mg/L+ABA2mg/L上进行丛生芽增殖培 养，增殖的丛生芽处理后接入含1/3改良DKW+NAAO. 2mg/L营养液的基质中进行生根诱导， 诱导出来的吴茱萸试管苗栽植于沙壤土：珍珠岩=3 :2的基质中，沙壤土和珍珠岩使用高压 灭菌锅灭菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液浇透，栽植后定期浇水，三周后添 加农家肥，湿度90%，温度25°C，遮盖两层薄膜，透光率保持在30%左右，45天后观察生长情 况，生根率89%。
[0009] 实施例3 取吴茱萸带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分钟，流水冲洗1.5小时，使 用75%酒精处理20s，0. 2%的升汞消毒7min，无菌水冲洗5-7遍，切去切口，获得的无菌的 带芽茎段接种入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中进行芽诱导，诱导出来 的吴茱萸丛生芽转接于改良DKW+TDZO. 3mg/L+NAA0. 3mg/L+ABA2mg/L上进行丛生芽增殖培 养，增殖的丛生芽处理后接入含1/3改良DKW+NAAO. lmg/L营养液的基质中进行生根诱导， 诱导出来的吴茱萸试管苗栽植于沙壤土：珍珠岩=3 :2的基质中，沙壤土和珍珠岩使用高压 灭菌锅灭菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液浇透，栽植后定期浇水，三周后添 加农家肥，湿度90%，温度25°C，遮盖两层薄膜，透光率保持在30%左右，45天后观察生长情 况，生根率90%。
【权利要求】
1. 一种吴茱萸的组培快速繁殖方法，其步骤如下： (1) 无菌带芽茎段的获得：采用常规的组织培养方法对吴茱萸带芽的茎段进行消毒处 理； (2) 芽诱导培养：将步骤（1)获得的无菌的带芽茎段接种入改良DKW+IBAO. 15mg/ L+KTO. 3mg/L+0. 1%活性炭中进行芽诱导； (3) 丛生芽增殖培养：步骤（2)中诱导出来的吴茱萸丛生芽转接于改良 DKW+TDZO. 2-0. 5mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L+ABA2mg/L 上进行丛生芽增殖培养； (4) 生根诱导：将步骤（3)增殖的丛生芽处理后接入含1/3改良DKW+NAA0. 05-0. 2mg/L 营养液的基质中进行生根诱导； (5) 炼苗：将生根后的试管苗栽植于含有基质的苗床上，一个月后统计成活率。
2. 根据权利要求1所述的一种吴茱萸的组培快速繁殖方法，其特征在于：吴茱萸带芽 茎段的灭菌方法为取吴茱萸带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分钟，流水冲 洗1. 5小时，使用75%酒精处理20s，0. 2%的升汞消毒7min，无菌水冲洗5-7遍，切去切口。
3. 根据权利要求1所述的一种吴茱萸的组培快速繁殖方法，其特征在于：培养基中加 入0. 1%活性炭，可以有效防止褐化现象，且可以促进吴茱萸芽的分化。
4. 根据权利要求1所述的一种吴茱萸的组培快速繁殖方法，其特征在于：增殖培养基 中加入ΑΒΑ，ΑΒΑ有利于促进不定芽的分化。
5. 根据权利要求1所述的一种吴茱萸的组培快速繁殖方法，其特征在于：诱导增殖培 养条件采用20001χ光强下培养，蔗糖30g/L，琼脂6. 5g/L，pH值5. 8,温度25°C，光期12h， 暗期12h，生根培养条件为光照40001x，蔗糖20g/L，琼脂6. 5g/L，pH值5. 8,温度27°C，光 期16h，暗期8h。
6. 根据权利要求1所述的一种吴茱萸的组培快速繁殖方法，其特征在于：炼苗的苗床 基质选用沙壤土：珍珠岩=3 :2,沙壤土和珍珠岩使用高压灭菌锅灭菌，苗床使用前用1000 倍的甲基托布津水溶液浇透，栽植后定期浇水，三周后添加农家肥，湿度90%，温度25°C，遮 盖两层薄膜，透光率保持在30%左右。
【文档编号】A01H4/00GK104186347SQ201410463276
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月12日 优先权日:2014年9月12日
【发明者】杨存 申请人:南京通泽农业科技有限公司