一种食用菌菌种提纯复壮的方法
【专利摘要】本发明涉及食用菌菌种提纯复壮的方法，采用1号培养料：将95-97％木屑、3-5％河泥用1％高锰酸钾水溶液调节含水率；2号培养料：将95-97％木屑、3-5％河泥用0.5％托布津水溶液调节含水率；取1号和2号培养料各80g分别推入无底试管中央，两端塞入棉塞灭菌；无菌操作挑取绿豆粒大小菌块接种在1号培养料中，25℃培养4-6天，当1号培养料中菌丝到达另一端时，挑取未接种端的菌丝接入2号培养料的一端，25℃下培养4-6天，当菌丝穿透2号培养料时挑起未接种端的菌丝，接入PDA培养基，在25℃下培养4天，成为无菌母种。本方法来源简单，周期短，准确性高，快速脱去菌种所带病毒、细菌、真菌污染同时起到复壮作用的菌种提纯作用。
【专利说明】一种食用菌菌种提纯复壮的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及食用菌【技术领域】，具体的说是一种食用菌菌种提纯复壮的方法。
技术背景
[0002]随着近年来食用菌工厂化栽培的快速发展，菌种质量的控制愈见重要。连续的生产过程中食用菌的原始母种容易出现病毒、细菌、真菌污染以种性退化现象，食用菌菌种受到污染或退化后，会导致后期出菇的大量减产甚至绝产。食用菌菌种退化极难从感官上进行判断，很多食用菌工厂中发生过食用菌菌种污染退化导致减产甚至绝产的现象的事件。目前针对食用菌菌种污染及退化问题，多采用尖端脱毒及断桥脱毒的方法，在实际生产中发现尖端脱毒和断桥脱毒能力有限，无法完全保障菌种的安全可靠，同时尖端脱毒和断桥脱毒无法起到复壮食用菌种性的作用。
【发明内容】
[0003]根据上述不足之处，本发明的目的在于提供一种提纯、复壮食用菌菌种的方法，此方法周期短、准确性高，能快速脱去菌种所带病毒、细菌、真菌污染的同时还起到复壮菌种的作用。
[0004]为实现上述目的，本发明的技术方案在于:一种食用菌菌种提纯复壮的方法，它采用以下培养料:
[0005]I号培养料:木肩重量的百分比为95-97%，河泥重量的百分比为3-5%，将上述混合物使用I %高锰酸钾水溶液将含水率调节到50-58%之间；
[0006]2号培养料:木肩重量的百分比为95-97%，河泥重量的百分比为3-5%，将上述混合物使用0.5%托布津水溶液含水率调节到50-58%之间；
[0007]具体操作步骤如下:
[0008](一 )培养料制作
[0009](I)准备2支无底试管；
[0010](2)称取混合好的I号培养料和2号培养料各80g ；
[0011](3)将称量好的原材料使用小一号的试管，分别推入大试管中央；
[0012](4)无底试管两端分别塞入棉塞进行密封处理；
[0013](5)无底试管放入高压灭菌锅中121°C灭菌30min待用；
[0014](二)提纯复壮操作
[0015](I)在无菌操作台中挑取绿豆粒大小菌块接种在灭好菌装有I号培养料的试管中；
[0016](2)将接种好的试管放置在25°C培养箱中培养，培养4-6天，每隔12小时观察一次；
[0017](3)当I号培养料的食用菌菌丝穿透I号培养基到达另一端时，挑取未接种端的菌丝在无菌操作下接入灭好菌的2号培养料的一端；
[0018](4)接种好的带2号培养料的试管，放置25°C下培养4-6天，每隔12小时观察一次，当菌丝穿透2号培养料时挑起未接种端的菌丝，接入普通PDA培养基；
[0019](5)接入菌丝的普通PDA培养基，在25°C下培养4天，即成为无菌母种可用于生产或保存。
[0020]本发明的有益效果在于:本发明采用两种低毒的培养基经过两次无底试管培养可以脱去病毒、细菌、真菌污染，同时可以起到提纯、复壮食用菌菌种，解决了食用菌原始母种容易出现病毒、细菌、真菌污染以致种性退化的问题。本发明使得食用菌原始母种的种性保留效果好，且配方简单，操作容易。本方法来源简单，周期短，准确性高，快速脱去菌种所带病毒、细菌、真菌污染同时起到复壮作用的菌种提纯作用。本发明中利用高锰酸钾强氧化作用、托布津溶液强杀菌作用，分两次交替杀灭母种中的病毒、细菌、霉菌，且木肩培养基为营养贫瘠培养基，能够起到淘汰弱势菌丝复壮菌种的作用。
【具体实施方式】
[0021]下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
[0022]实施例1
[0023]金针菇提纯复壮实例:2013年4月份，青岛某公司生产的金针菇出现大量的减产，有些金针菇菌袋未发满即出现腐烂现象，经查证确认为金针菇细菌性感染，感染源为金针菇母种，为解决金针菇感染决定采用本发明方法提纯复壮金针菇菌种，具体操作如下:
[0024](一)制备培养料
[0025]I号培养料:木肩重量的百分比为97%，河泥重量的百分比为3%，将上述混合物使用I %高锰酸钾水溶液将含水率调节到58% ；
[0026]2号培养料:木肩重量的百分比为97%，河泥重量的百分比为3%，将上述混合物使用0.5%托布津水溶液含水率调节到58%之间；
[0027]( 二)培养料制作
[0028](I)准备2支无底试管；
[0029](2)称取混合好的I号培养料和2号培养料各80g ；
[0030](3)将称量好的原材料使用小一号的试管，分别推入大试管中央；
[0031](4)无底试管两端分别塞入棉塞进行密封处理；
[0032](5)无底试管放入高压灭菌锅中121°C灭菌30min待用；
[0033](三)提纯复壮操作
[0034](I)在无菌操作台中挑取绿豆粒大小菌块接种在灭好菌装有I号培养料的试管中；
[0035](2)将接种好的试管放置在25°C培养箱中培养，培养6天，每隔12小时观察一次；
[0036](3)当I号培养料的食用菌菌丝穿透I号培养基到达另一端时，挑取未接种端的菌丝在无菌操作下接入灭好菌的2号培养料的一端；
[0037](4)接种好的带2号培养料的试管，放置25°C下培养6天，每隔12小时观察一次，当菌丝穿透2号培养料时挑起未接种端的菌丝，接入普通PDA培养基；
[0038](5)接入菌丝的普通PDA培养基，在25°C下培养4天，用于生产。
[0039]通过本次提纯复壮后的金针菇菌种，应用于生产未发现细菌性感染现象。
[0040]实施例2
[0041]香菇菌种驯化:青岛某公司菌种研发中心，采集到一株种性优良的椴木香菇，通过组织分离得到5支原始母种试管，在试管培养时发现5支试管在香菇菌种生长的同时伴随了细菌、霉菌感染，而此时种性优良椴木香菇已经没有了，未了得到该株菌种，决定采用本发明方法提纯菌种，具体操作如下:
[0042](一)制备培养料
[0043]I号培养料:木肩重量的百分比为95%，河泥重量的百分比为5%，将上述混合物使用I %高锰酸钾水溶液将含水率调节到50% ；
[0044]2号培养料:木肩重量的百分比为95%，河泥重量的百分比为5%，将上述混合物使用0.5%托布津水溶液含水率调节到50%之间；
[0045]( 二 )培养料制作
[0046](I)准备2支无底试管；
[0047](2)称取混合好的I号培养料和2号培养料各80g ；
[0048](3)将称量好的原材料使用小一号的试管，分别推入大试管中央；
[0049](4)无底试管两端分别塞入棉塞进行密封处理；
[0050](5)无底试管放入高压灭菌锅中121°C灭菌30min待用；
[0051](三)提纯复壮操作
[0052](I)在无菌操作台中挑取绿豆粒大小菌块接种在灭好菌装有I号培养料的试管中；
[0053](2)将接种好的试管放置在25°C培养箱中培养，培养4天，每隔12小时观察一次；
[0054](3)当I号培养料的食用菌菌丝穿透I号培养基到达另一端时，挑取未接种端的菌丝在无菌操作下接入灭好菌的2号培养料的一端；
[0055](4)接种好的带2号培养料的试管，放置25°C下培养4天，每隔12小时观察一次，当菌丝穿透2号培养料时挑起未接种端的菌丝，接入普通PDA培养基；
[0056](5)接入菌丝的普通PDA培养基，在25°C下培养4天，用于生产。
[0057]经过一轮提纯再次接种到PDA培养基中的香菇菌丝再未发现任何污染，用于生产效果良好。
[0058]实施例3
[0059]杏鲍菇的提纯保存:青岛某公司研发的杏鲍菇品质非常好，但是在多次传代以后发现品质下降严重，因此需要将母种提纯保存，以备生产之用，具体操作如下:
[0060](一)制备培养料
[0061]I号培养料:木肩重量的百分比为96%，河泥重量的百分比为45%，将上述混合物使用I %高锰酸钾水溶液将含水率调节到55% ；
[0062]2号培养料:木肩重量的百分比为96%，河泥重量的百分比为4%，将上述混合物使用0.5%托布津水溶液含水率调节到55%之间；
[0063]( 二 )培养料制作
[0064](I)准备2支无底试管；
[0065](2)称取混合好的I号培养料和2号培养料各80g ；
[0066](3)将称量好的原材料使用小一号的试管，分别推入大试管中央；
[0067](4)无底试管两端分别塞入棉塞进行密封处理；
[0068](5)无底试管放入高压灭菌锅中121°C灭菌30min待用；
[0069](三)提纯复壮操作
[0070](I)在无菌操作台中挑取绿豆粒大小菌块接种在灭好菌装有I号培养料的试管中；
[0071](2)将接种好的试管放置在25°C培养箱中培养，培养5天，每隔12小时观察一次；
[0072](3)当I号培养料的食用菌菌丝穿透I号培养基到达另一端时，挑取未接种端的菌丝在无菌操作下接入灭好菌的2号培养料的一端；
[0073](4)接种好的带2号培养料的试管，放置25°C下培养5天，每隔12小时观察一次，当菌丝穿透2号培养料时挑起未接种端的菌丝，接入普通PDA培养基；
[0074](5)接入菌丝的普通PDA培养基，在25 °C下培养4天，用于保存。
【权利要求】
1.一种食用菌菌种提纯复壮的方法，其特征在于:它采用以下培养料: I号培养料:木肩重量的百分比为95-97%，河泥重量的百分比为3-5%，将上述混合物使用I %高锰酸钾水溶液将含水率调节到50-58%之间； 2号培养料:木肩重量的百分比为95-97%，河泥重量的百分比为3-5%，将上述混合物使用0.5%托布津水溶液含水率调节到50-58%之间； 具体操作步骤如下: (一)培养料制作 (1)准备2支无底试管； (2)称取混合好的I号培养料和2号培养料各80g； (3)将称量好的原材料使用小一号的试管，分别推入大试管中央； (4)无底试管两端分别塞入棉塞进行密封处理； (5)无底试管放入高压灭菌锅中121°C灭菌30min待用； (二)提纯复壮操作 (1)在无菌操作台中挑取绿豆粒大小菌块接种在灭好菌装有I号培养料的试管中； (2)将接种好的试管放置在25°C培养箱中培养，培养4-6天，每隔12小时观察一次； (3)当I号培养料的食用菌菌丝穿透I号培养基到达另一端时，挑取未接种端的菌丝在无菌操作下接入灭好菌的2号培养料的一端； (4)接种好的带2号培养料的试管，放置25°C下培养4-6天，每隔12小时观察一次，当菌丝穿透2号培养料时挑起未接种端的菌丝，接入普通PDA培养基； (5)接入菌丝的普通PDA培养基，在25°C下培养4天，即成为无菌母种可用于生产或保存。
【文档编号】A01G1/04GK104488557SQ201410828485
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月26日 优先权日:2014年12月26日
【发明者】巩玉辉, 李坚之, 周绍辉, 隋海周, 陈翠翠 申请人:青岛华盛绿能农业科技有限公司