一种用细胞组织学技术判定油棕幼嫩花序性别的方法与流程

文档序号:11113211阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用细胞组织学技术判定油棕幼嫩花序性别的方法,其特征在于,其具体步骤如下:

1)、取材

在油棕树上选取处于雌雄未显性期Ⅲ期的花序,先去掉先出叶和花梗苞片,然后再投入到FAA固定液中;

2)、脱水与透明

将固定好的花序样品依次在30%、50%、70%、100%的乙醇中放置2~3h;然后用正丁醇作为透明剂,在其中放置40~50h,每8h换一次透明剂;

3)、浸蜡与包埋

55~65℃下,在体积比为1:1的正丁醇和石蜡的混合液中放置10~15h,然后在纯蜡中再浸蜡10~15h,在这期间每4h换一次纯蜡;然后用KEDEE KD-M生物组织包埋机对雌雄未显性期Ⅲ期的幼嫩花序的小穗轴进行包埋;

4)、切片与烤片

将包埋好的样品进行修块,然后用Leica RM2235旋转切片机进行纵向切片,厚度为5~10μm;在KD-H烘片机上,40~50℃进行烤片,时间为6~10h;

5)、脱蜡与染色

(1)把蜡带切片用松节油浸泡20min;(2)更换新的松节油,浸泡蜡带切片20min;(3)用体积比为1:1的松节油和纯酒精的混合液浸泡3min;(4)纯酒精浸泡3min;(5)95%酒精浸泡2min;(6)85%酒精浸泡2min;70%酒精浸泡2min;(7)50%酒精浸泡2min;(8)1%的高碘酸浸泡;(9)流水冲洗5~10min,然后用蒸馏水浸洗;(10)Schiff试剂避光染色10~30min;(11)0.5%的偏重亚硫酸钠浸洗两次,每次1~2min已达到分色目的;(12)流水冲洗5~10min,蒸馏水浸洗10~20min;(13)50~60℃情况下,1%的苯胺蓝黑染色10min;(14)7%醋酸快速浸泡一下去除多余染料,空气中干燥,然后用蒸馏水洗涤;(15)纯酒精浸洗3min;(16)更换新的纯酒精,浸洗3min;(17)更换新的纯酒精,浸洗3min;(18)用体积比为1:1的纯酒精和松节油混合液浸泡3min;(19)松节油浸泡5min;(20)更换新的松节油,浸泡5min;(21)用中性树胶进行封片。最后利用装有LEICA DFC500镜头的LEICA DMLB显微镜对切片进行观察并拍照,计算花苞片原基数、花苞片数以及新的花苞片原基数、花原基分生组织数量;

6)、油棕幼嫩花序性别的判定

油棕幼嫩花序性别的判定规则:若A>50,或B>50,或C>50,则该花序为雄花序;若A<30,或B<30,或C<30,则该花序为雌花序;

A:每个小穗轴上的花苞片原基数;

B:每个小穗轴上的花苞片数以及新的花苞片原基数;

C:每个小穗轴上的花原基分生组织数。

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