一种华榛诱导丛生芽快繁方法与流程

文档序号:11879709阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种华榛诱导丛生芽快繁方法,其特征在于,包括如下步骤:

茎段快繁体系的建立

外植体选择:分别采集3月、4月、5月华榛播种出苗后7-10d健壮实生小苗,去除根部,保留子叶并摘去其上部2片叶,自来水清洗植株表面灰尘,洗衣粉浸泡8min后自来水冲洗1h,放置超净工作台,用75%酒精浸泡30s,再用0.1%升汞消毒15min,无菌水清洗5-6遍,切成2cm带芽茎段,置于无菌滤纸上吸干表面水分备用;

茎段诱导萌发:将带芽茎段接种于启动培养基中,在温度26±1℃、湿度80±5%、光照14h/L、光照强度1800-2000lx下培养,一周后定芽开始萌动,培养三周后节间抽长,每株有2-3片新叶展开,叶色呈翠绿色;

种胚快繁体系的建立

外植体预处理:采集9-10月份华榛成熟种子,将进行实验的华榛成熟种子提前7d处理,钳子去除外果皮,坚硬的内果皮,先进行80℃水中浸泡24h的热处理,再进行0℃冷藏室5d冷藏的冷处理,然后取出种子,放入GA35.0mg·L-1浸泡1h.

外植体采集:将预处理后的华榛种子用洗衣粉浸泡6min,自来水冲洗1h,放置超净工作台上;采用二次消毒法,先用75%酒精浸泡30s,0.1%升汞消毒8min,无菌水清洗5-6遍,再去除内种皮,0.05%升汞消毒3min,无菌水清洗5-6遍,置于无菌滤纸上吸干材料表面水分备用;启动培养:

在超净工作台上将消毒好华榛种子,将胚乳切去1/2(保留含胚芽部分),接种于启动培养基上,在暗培养15d后,再在温度26±1℃、湿度80±5%、光照14h/L、光照强度1800-2000lx下培养,7d后胚乳膨大、胚根长出、子叶展开,10-20d,形成单芽且有2-3片新叶展开,叶色呈翠绿色;

丛生芽诱导:

将茎段和种胚诱导的单芽,切成3cm接至诱导培养基上,通过10d培养,定芽基部产生愈伤组织,连续培养20d后由胚性愈伤团逐步形成丛生芽,快速建立华榛诱导丛生芽快繁再生体系。

2.权利要求1所述的华榛诱导丛生芽快繁方法,其特征在于,茎段快繁体系中,启动培养基为MS+KT1.0mg·L-1+IBA0.05mg·L-1+GA31.0mg·L-1+琼脂5.8g·L-1+蔗糖25g·L-1+AC0.1g·L-1

3.权利要求1所述的华榛诱导丛生芽快繁方法,其特征在于,种胚快繁体系中,诱导培养基为MS+KT1.5mg·L-1+IBA0.05mg·L-1+GA31.0mg·L-1+胰蛋白胨0.1g·L-1+琼脂5.8g·L-1+蔗糖25g·L-1+AC0.1g·L-1

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