本发明属于农药技术领域，具体涉及一种含有苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物的杀虫组合物及其制备方法与应用。
背景技术：
近年来，高毒、高残留化学农药成为污染生态环境、危害食品安全和民众健康的重要问题。随着人们对化学农药危害的认识，世界发达国家和部分发展中国家均已限制有毒化学农药的使用，许多国家制定了减少化学农药使用的对策，提出化学农药的替代产品。中国是一个农业大国，农药在我国的农业生产中发挥着十分重要的作用。严格限制使用化学农药，解决农药残留超标，提高农产品的安全性及我国农产品在国际市场的竞争力需求迫切。
为适应我国农业可持续发展策略，农药的发展方向将是从非选择性农药转向选择性农药，从传统的有机化学物质转向“生态合理农药”和“环境和谐农药”，以利于保护环境，促进农业的可持续发展。因此，许多生物农药由于具有选择性强，对人畜安全，对非靶标生物的影响较小，能保持自然生态平衡；在自然环境中易于降解，无残留，不污染环境；多种因素和成分发挥作用，有害生物难以产生抗药性等优点而日益受到重视(徐汉虹，张志祥，程东美。生物农药的发展优势及存在问题。世界农药，2004，26(2)：5-10)。
植物源农药是人类历史上最古老的生物农药之一，它来源于自然、在自然环境中易降解、安全无公害，现已成为绿色生物农药首选之一。植物天然产物苦皮藤素来源于传统杀虫植物卫矛科南蛇藤属苦皮藤(Celastrus angulatus Max.) (吴文君，1991)。自然资源丰富，广泛分布在黄河、长江流域的山区和丘陵，贮量丰富，据调查湖北宣恩县的苦皮藤分布面积占全县山地面积的23.12%，在陕西华县苦皮藤贮量以干根皮计达2000 t左右，种子至少年产500 t，而且苦皮藤在粘土、砂土及石渣中都能正常生长。据测定，平均每100 kg鲜根可得26.2 kg干根皮，其根系发达，环境适应力和再生能力都非常强，采挖主根后第二年从留在土壤中的细根可萌发出许多新的植株（王云峰，石伟勇。中国杀虫植物资源的开发利用。资源科学，2001，23（2）：62-64）。并且目前其人工繁育技术已经成熟(卢令娴，南玉生，柯治国，万才淦，徐惠珠，吴冬云。杀虫植物苦皮藤引种繁殖研究初报。湖北林业科技，1987，61(3)：8-10)。
申请人结合国际先进技术和国内外市场的巨大需求，积极研制了植物源农药—天然苦皮藤素LS20030503。植物源农药天然苦皮藤素对麦蚜、枸杞木虱、枸杞蚜虫等蚜虫科昆虫有一定的防治效果，但是其单剂速效性较差，存在着对害虫药效慢，田间药效一般，喷药次数多，稀释倍数较低等缺陷。杀虫剂联合使用被认为是克服或延缓害虫抗性的有效措施之一，农药混配是利用和改造农药老品种，提高其防治效果的一种有效途径，具有重要的实践意义。因此，本研究室提出以活性成分组和组分配伍理念研究、筛选具有特定功效的天然成分组，以此理念进行新型植物源农药的开发，能够较好的发挥植物源天然活性成分组多成分、多靶点、协同增效优势，解决植物源农药活性偏低、速效性差的难题。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种杀虫效果好、用药成本低、无残留、无污染、对人畜安全、不易产生抗药性的含有苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物的杀虫组合物，利用两种植物源农药优势互补，充分改善苦皮藤根皮提取物速效性差，药效缓慢，击倒速率偏低等缺陷，同时提供其制备方法与应用是本发明的又一发明目的。
基于上述目的，本发明采取了如下技术方案：一种杀虫组合物，其活性成分为苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物。
苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物的重量配比为1～4:1～4。
所述苦皮藤根皮提取物经由以下步骤获得：将苦皮藤根皮粉碎，得苦皮藤根皮粉，加入苦皮藤根皮粉重量3～5倍的乙醇，在60～80℃超声提取1～4h，过滤后减压浓缩即得；所述冬青根提取物经由以下步骤获得：将冬青根粉碎，加入冬青根粉重量3～6倍的乙酸乙酯，在50～80℃超声提取3～5h，过滤后减压浓缩即得。
所述杀虫组合物为水乳剂，其重量百分比组成为：活性成分5～15%、环己酮15～30%、苯甲酸钠0.5～1.2%、乙二醇0.5～1.2%、1，2—丁二醇0.5～1.5%、农乳2201为3～5%，其余为水。
所述水乳剂的重量百分比组成为：苦皮藤根皮提取物5%、冬青根提取物5%、环己酮为30%、苯甲酸钠0.9%、乙二醇为0.8%、1，2—丁二醇为1.2%、农乳2201为4.2%，其余为水。
所述的杀虫组合物的制备方法，包括以下步骤：
1）将苦皮藤根皮提取物、冬青根提取物与环己酮混合得油相；
2）将农乳2201、苯甲酸钠、乙二醇、1，2—丁二醇和水用量的1/2混合得水相；
3）将水相加入到油相中混合，同时补加剩余的水，即得水乳剂。
步骤1）和步骤2）中混合时均以800～1000 r/min的速度搅拌10～30 min；步骤3）混合时在10000～12000 r/min的高速下搅拌10～30min，同时补充余量的水，即可。
所述的杀虫组合物的应用，将其应用于对枸杞害虫的防治。
本发明中，各组分所起的作用为：环己酮为溶剂；苯甲酸钠为防腐剂；乙二醇，为防冻剂；1，2—丁二醇为稳定剂；农乳2201为乳化剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明是针对苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物单剂存在速效性较差、对害虫药效慢、 田间药效一般、喷药次数多等缺陷，引入传统中药理论，对苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物进行活性成分组配伍，以达到两种植物源农药优势互补的目的，充分改善苦皮藤根皮提取物速效性差，药效缓慢，击倒速率偏低等缺陷。至目前为止，未见苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物复配报道。且本发明并经多次反复试验，取得了良好的效果；
1、所制得的水乳剂以水为基质，对环境安全，不易燃烧，贮运方便；
2、与单剂相比，药效高、持效期长、延缓了害虫抗药性的产生；
3、对抗性蚜虫、木虱具有很好的防治效果；
4、有效成分可在自然中降解，与环境相容性好，无残留、无污染，安全、环保，对人畜安全等特点。
具体实施方式
以下将通过具体实施例来对本发明进行说明，但这些具体实施方案不以任何方式限制本发明的保护范围。需要说明的是，为表述方便，以下各实施例中均采用“苦·冬青”来表示“苦皮藤根皮提取物·冬青根提取物”
实施例1：5%苦·冬青水乳剂
一种杀虫组合物，为水乳剂，其重量百分比组成为：苦皮藤根皮提取物4%、冬青根提取物1%、环己酮15%、苯甲酸钠0.5%、乙二醇0.5%、1，2—丁二醇0.5%、农乳2201为3%，其余为水。
所述的杀虫组合物的制备方法，包括以下步骤：
1）将苦皮藤根皮提取物、冬青根提取物与环己酮混合得油相；
2）将农乳2201、苯甲酸钠、乙二醇、1，2—丁二醇和水用量的1/2混合得水相；
3）将水相加入到油相中混合，同时补加剩余的水，即得水乳剂。
步骤1）和步骤2）中混合时均以900 r/min的速度搅拌20 min；步骤3）混合时在11000 r/min的高速下搅拌20min，同时补充余量的水，即可。在其他实施例中，步骤1）和步骤2）中混合时采用800～1000 r/min的速度搅拌10～30 min均可；步骤3）混合时在10000～12000 r/min的高速下搅拌10～30min均可。
其中，苦皮藤根皮提取物经由以下步骤获得：将苦皮藤根皮粉碎，得苦皮藤根皮粉，加入苦皮藤根皮粉重量4倍的乙醇（所述的乙醇的质量浓度为95%），在70℃超声提取2h，过滤后减压浓缩成膏状粗提物即得；所述冬青根提取物经由以下步骤获得：将冬青根粉碎，加入冬青根粉重量5倍的乙酸乙酯，在70℃超声提取3 h，过滤后减压浓缩至膏状粗提物即得。
实施例2：8%苦·冬青水乳剂
一种杀虫组合物，为水乳剂，其重量百分比组成为：苦皮藤根皮提取物6%、冬青根提取物2%、环己酮16%、苯甲酸钠0.8%、乙二醇0.7%、1，2—丁二醇0.8%、农乳2201为3.5%，其余为水。
所述的杀虫组合物的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤1）和步骤2）中混合时均以800 r/min的速度搅拌30 min；步骤3）混合时在10000 r/min的高速下搅拌30min。苦皮藤根皮提取物制备时，加入苦皮藤根皮粉重量3倍的乙醇，在60℃超声提取4 h；冬青根提取物制备时：加入冬青根粉重量3倍的乙酸乙酯，在50℃超声提取5h。其余同实施例1。
实施例3：6%苦·冬青水乳剂
一种杀虫组合物，为水乳剂，其重量百分比组成为：苦皮藤根皮提取物4%、冬青根提取物2%、环己酮24%、苯甲酸钠0.7%、乙二醇0.6%、1，2—丁二醇0.7%、农乳2201为3.8%，其余为水。
所述的杀虫组合物的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤1）和步骤2）中混合时均以1000 r/min的速度搅拌10 min；步骤3）混合时在12000 r/min的高速下搅拌10min。苦皮藤根皮提取物制备时，加入苦皮藤根皮粉重量5倍的乙醇，在80℃超声提取1 h；冬青根提取物制备时：加入冬青根粉重量6倍的乙酸乙酯，在80℃超声提取3h。其余同实施例1。
实施例4：10%苦·冬青水乳剂
一种杀虫组合物，为水乳剂，其重量百分比组成为：苦皮藤根皮提取物5%、冬青根提取物5%、环己酮30%、苯甲酸钠0.9%、乙二醇0.8%、1，2—丁二醇1.2%、农乳2201为4.2%，其余为水。
所述的杀虫组合物的制备方法同实施例1。
实施例5：9%苦·冬青水乳剂
一种杀虫组合物，为水乳剂，其重量百分比组成为：苦皮藤根皮提取物为3%、冬青根提取物为6%、环己酮为27%、苯甲酸钠为0.8%、乙二醇为0.8%、1，2—丁二醇为0.9%、农乳2201为4%，其余为水。
所述的杀虫组合物的制备方法同实施例1。
实施例6：12%苦·冬青水乳剂
一种杀虫组合物，为水乳剂，其重量百分比组成为：苦皮藤根皮提取物3%、冬青根提取物9%、环己酮30%、苯甲酸钠0.9%、乙二醇0.9%、1，2—丁二醇1%、农乳2201为4.5%，其余为水。
所述的杀虫组合物的制备方法同实施例1。
实施例7： 15%苦·冬青水乳剂
一种杀虫组合物，为水乳剂，其重量百分比组成为：苦皮藤根皮提取物3%、冬青根提取物12%、环己酮30%、苯甲酸钠1.2%、乙二醇1.2%、1，2—丁二醇1.5%、农乳2201为5%，其余为水。
所述的杀虫组合物的制备方法同实施例1。
实施例8 效果实验
为验证本发明所得产品的技术效果，发明人进行了多次反复试验，具体如下。
实验方法：取苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物按重量配比分别为4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4，苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物的提取方法同上述实施例1，每个配比分别用蒸馏水稀释成5个浓度，每处理重复4次，并设空白对照。
8.1对枸杞蚜虫室内毒力测定：
试虫处理采用浸渍法。采新鲜的带有蚜虫的枸杞嫩梢，剔除有翅蚜虫和多余蚜虫，使蚜虫大小基本一致，密度适中，然后将其在药液中浸渍5 s，取出晾干后，放入已垫有滤纸的直径为9 cm的培养皿中，培养皿加水保湿，置入RXZ智能人工光照气候箱中，温度(25±0.5)℃，相对湿度(RH)60%，光照L∶D为16 h∶8 h。24 h后检查各处理死亡虫数，并计算校正死亡率。死亡标准以毛笔轻触蚜体，以蚜足不能动者即为死亡（杜玉宁，张宗山，沈瑞清，高丽。4种生物农药对枸杞蚜虫的室内毒力测定[J]。林业科技，2007，32(6):29-30）。
所得死亡率用Abbott 公式进行校正，根据药剂浓度对数值与校正死亡率机率值的直线回归法，计算毒力回归方程、致死中浓度(LC50)。混剂采用孙云沛等(1960)公式求出共毒系数(CTC)(Sun Y P， E R Johnnson. Analysis of joint action of pesticides against house files[J]. Ecological Entomology， 1960， 53: 887-891)。增效判断标准：共毒系数(CTC)大于200为显著增效，150～200为增效作用较小，70～150为相加作用，小于70为拮抗作用(谭福杰，沈晋良，尤子平。杀虫剂混合应用的研究[J]。南京农业大学报，1987，4(增)：93-99)。
式中：A表示A单剂毒力指数；AC表示A在混剂中所占百分率；B表示B单剂毒力指数；BC表示B在混剂中所占百分率。
苦皮藤根皮提取物与冬青根提取物对枸杞蚜虫的毒力与共毒系数测定计算结果见表1：
表1 苦皮藤根皮提取物与冬青根提取物对枸杞蚜虫的毒力与共毒系数测定结果
。
表1的测定结果表明：苦皮藤根皮提取物与冬青根提取物两种有效成分组按表1中的比例复配后对枸杞蚜虫有显著的增效作用，苦皮藤根皮提取物与冬青根提取物1:1时，增效作用最强，共毒系数为265.27；比例为4:1、3:1、2:1、1:2、1:3、1:4时，共毒系数依次为191.76、210.68、232.85、228.87、199.73、183.57。
8.2对枸杞木虱室内毒力测定：
取附有木虱的枸杞叶，用毛笔挑选个体大小相近的木虱，均匀摆放在叶片正面上并使每个小片上存有木虱20～30头，将叶片浸入已配制好的农药药液中，浸渍5 s后取出，用吸水纸吸去多余的药液并晾干，然后放入铺有3层湿吸水纸的90 mm的培养皿中，用2层湿纱布封口后盖上培养皿盖子，室内温度保持在(26±1)℃。每处理重复3次，以清水为对照。24 d后调查总虫数和死虫数。死亡标准为用小毛笔轻触虫体及附肢，无任何反应则视为死亡（关晓庆。枸杞木虱生物药剂的筛选与天敌敏感性研究。安徽农业科学，2009，37（10）：4541-4542）。计算毒力回归方程、致死中浓度(LC50)及共毒系数。
苦皮藤根皮提取物与冬青根提取物对枸杞木虱的毒力与共毒系数测定计算结果见表2。
表2苦皮藤根皮提取物与冬青根提取物对枸杞木虱的毒力与共毒系数测定结果
。
表2的测定结果表明：苦皮藤根皮提取物与冬青根提取物两种有效成分组按表2中的比例复配后对枸杞木虱有显著的增效作用，苦皮藤根皮提取物与冬青根提取物1:1时，增效作用最强，共毒系数为261.03；比例为4:1、3:1、2:1、1:2、1:3、1:4时，共毒系数依次为194.39、213.62、232.67、227.34、201.00、186.07。
8.3实施例2，4，5，7防治枸杞蚜虫田间药效试验：
试验共分两批进行，分别设实施例2和实施例5为第一组，实施例4和实施例7为第二组，其中实施例2的对照样是6%苦皮藤根皮提取物和2%冬青根提取物，实施例5的对照样是3%苦皮藤根皮提取物和6%冬青根提取物，实施例4的对照样是5%苦皮藤根皮提取物和5%冬青根提取物，实施例7的对照样是3%苦皮藤根皮提取物和12%冬青根提取物，同时以清水为空白对照。其中各对照样的具体制备方法参照其对应的各实施例，不同的是，将各实施例中的活性成分替换为相应的对照样的活性成分，例如实施例2的对照样分别为6%苦皮藤根皮提取物和2%冬青根提取物，对照样6%苦皮藤根皮提取物则是将实施例2中的活性成分苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物替换为苦皮藤根皮提取物，其他组分不变，补加水使活性成分苦皮藤根皮提取物含量为6%。
选3年生枸杞苗，于枸杞蚜虫第1代幼龄若虫始盛期用背负式机动喷雾喷粉机喷施。每处理重复3次，完全随机区组排列，并设保护行。50 kg水/667 m2，选择晴天16：00后，将配置好的药剂实施全株喷雾，重点喷洒树冠梢部和叶片正反面，做到均匀、细致、全面覆盖。每小区选择10 株树，每棵树上选择蚜虫较多的2 个枝条作为固定样枝，用标签标记，注明编号、药剂名称、浓度。施药前调查固定样枝上的虫口基数。从喷药后3 d、7 d、15 d 分别调查每小区固定样枝上的活蚜数（郭蕊，严林，金生英，陈生翠。徳令哈枸杞蚜虫毒力测定及田间药效试验。北方园艺，2012，（10）：148-151）。
应用SPSS22.0软件进行数据分析。结果见表3和表4所示。
防治效果是将药效调查的数据与空白对照区比较，计算防治效果（虫口减退率），计算公式如下：
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表3第一组实施例及对照组制剂防治枸杞蚜虫田间药效试验
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表4 第二组实施例及对照组制剂防治枸杞蚜虫田间药效试验
。
由表3和表4可知，本发明两种有效成分组复配的制剂对枸杞蚜虫防治效果明显提高，明显优于两种有效成分组单独使用，并且有较好的速效性。处理药剂为8%、9%、10%和15%苦·冬青500倍的稀释倍数，防效均在76%～97%；在苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物比例为1：1时（即实施例4），防效最佳，处理后3 d、7 d、15 d，防效分别高达97.67%、98.43%和98.42%，并且在本试验用药范围内对靶标作物及有益生物安全。
8.4实施例2，4，5，7防治枸杞木虱田间药效试验：
试验共分两批进行，分别设实施例2和实施例5为第一组，实施例4和实施例7为第二组。并分别制备各实施例的对照样，其中实施例2的对照样是6%苦皮藤根皮提取物和2%冬青根提取物，实施例5的对照样是3%苦皮藤根皮提取物和6%冬青根提取物，实施例4的对照样是5%苦皮藤根皮提取物和5%冬青根提取物，实施例7的对照样是3%苦皮藤根皮提取物和12%冬青根提取物。同时以清水为空白对照。各对照样的制备方法同8.3。
试验于2014年7 月在宁夏枸杞生产基地进行。每种药剂分设2个浓度处理，以清水为对照。每处理选取3 株树，随机区组排列，重复3次，用手动背负式喷雾器将每株植物充分喷药达不滴液为宜。施药前调査枸杞木虱基数，分别挂牌标记。分别于施药后3 d、5 d、7 d调查每枝上的木虱数，计算枸杞木虱虫口减退率和防治效果（陈培民，王建平，钟延平，苏慧明，张力军。几种植物源药剂防治枸杞木虱药效试验。内蒙古农业科技，2013（5）： 66-67）。
表5第一组实施例及对照样制剂防治枸杞木虱田间药效
。
表6 第二组实施例及对照样制剂防治枸杞木虱田间药效
。
由表5和表6可知，本发明两种有效成分组复配的制剂对枸杞木虱防治效果明显提高，明显优于两种有效成分组单独使用，并且有较好的速效性。处理药剂为8%、9%、10%和12%苦·冬青500倍的稀释倍数，3 d的防效均在71%～98%；在苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物比例为1：1时（即实施例4），防效最佳，处理后3 d、7 d、15 d，防效分别高达98.64%、97.96%和98.29%。
此外，我们对苦皮藤根皮提取物和冬青根提取物增效作用最显著的配比1:1进行了小白鼠的急性毒性试验，回归方程为Y=-1.29+1.64x，急性口服LD50值为6834.07 mg/kg，在微毒范围内。
综上所述，本发明的杀虫组合物具有对枸杞蚜虫、枸杞木虱防治效果增强，速效性好、持效性长的优点，与现有的单一制剂相比，除具有显著的杀虫效果外，可以有效的降低施药成本，减缓抗性的产生，减少制剂残留量，对作物无污染、安全性好，符合农药制剂的安全性要求。