本发明涉及医药生物
技术领域：
，尤其是涉及一种铁皮石斛的快速繁技术。
背景技术：
：铁皮石斛为兰科（Orchidaceae）石斛属（DendrobiumSw）植物，全世界兰科约有500属，15000多种；石斛属是兰科中最大的属之一。中国兰科约有150属，1000种，茎圆柱形，高15～50cm，粗4～8mm。叶鞘带肉质，矩圆状披针形，长3～6.5cm，宽0.8～2cm，顶端略钩。总状花序生于具叶或无叶茎的中部，有花2～4朵；花淡黄绿色，稍有香气；萼片长1.2～2cm；花瓣短于萼片，唇瓣卵状披针形，长1.3～1.6cm宽7～9mm，先端渐尖或短渐尖，近上部中间有圆形紫色斑块，近下部中间有黄色胼胝体。花期4～6月。表面黄色，基部稍有光泽，具纵纹，节上有花序柄痕及残存叶鞘；叶鞘短于节间，常与节间上部留下环状间隙，褐色，鞘口张开。质硬而脆，易折断，断面纤维状。鲜品茎直径3～6mm，表面黄绿色或黑绿色，叶鞘灰白色。气微，嚼之有粘性。主要分布于秦岭和长江流域以南省区；石斛属植物大多数种类都集中分布在北纬15°30′～25°12′之间，且越向北延而种类则逐渐减少。中国铁皮石斛主要分布于浙江、广西、湖南、云南、贵州等地。它是一种名贵的中药材，是多年生草本植物，茎丛生，圆柱型，高10--30厘米，粗3—8毫米，在民间，被誉为“救命仙草”药界的“大熊猫”。由于新鲜铁皮石斛不宜保存，鲜药由于其汁多鲜嫩，容易腐烂变质，特别是霉雨季节，更不易保存，因此在大多数中药店和医院中药房中很少配有鲜类药材，，铁皮石斛加工后干品称铁皮枫斗，其药效成分主要是石斛多糖、石斛碱和总氨基酸等。能提高人体免疫能力，增强记忆力，补五脏虚劳，抗衰老，抑制肿瘤，改善糖尿病症状，抗缺氧，对放化疗以及夜生活、烟酒过度者有显著效果。铁皮石斛种子无胚乳，需与某些真菌共生才能萌发，自然繁殖率低，虽分布广，但生境窄，加上长年无节制采掘，自然资源日渐枯竭，产量不能满足目前市场需求。本发明的首要目的在于提供一种胚萌发率高、成活率好的铁皮石斛的快速繁育技术。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种铁皮石斛的快速繁育技术方法，包括以下步骤：1.种子的诱导培养：去掉朔果干枯部分，用自来水冲洗干净后，用70%酒精浸泡10-60，再用0.1%升汞消毒5-12min，最后用无菌水冲洗1-5次。在无菌条件下切开朔果，把种子播种于诱导培养基上。培养基加入椰油酰谷氨酸二钠1-5g•Ｌ－１、蔗糖10-50g·Ｌ－１，琼脂5-15g·Ｌ－１，PH4.5-5.5，盖上瓶盖,置于培养室内进行培养.1.壮苗及生根培养:将上述获得的铁皮石斛幼芽从组培瓶中取出，在无菌条件下移入增殖和壮苗培养基中，盖上瓶盖，置于培养室内进行培养；3.组培苗移栽:将铁皮石斛幼苗经过常规炼苗处理后移栽于温室大棚，移栽后按常规管理，湿度保持在70～90%，作为优选，上述步骤1中，种子用70%酒精浸泡20-50s，再用0.1%升汞消毒6-10min，最后用无菌水冲洗3-4次。作为优选，上述步骤1中，播种量为种子覆盖培养基表面50％.作为优选，上述步骤1中，培养基加入椰油酰谷氨酸二钠1-5g•Ｌ－１、蔗糖20-40g·Ｌ－１，琼脂8-12g·Ｌ－１，马铃薯提取液100-300mg·Ｌ－１,PH4.8-5.2。作为优选，上述培养基为MS培养基、1/2MS培养基、B5培养基、LS培养基、N6培养基。作为优选，上述步骤2中，每瓶接8株铁皮石斛幼芽，高0.3-0.6cm作为优选，上述培养条件为温度26-28℃，光照强度1600-2000Ｌx。作为优选，上述步骤2中，铁皮石斛幼苗为具有2-5条根，高2-3cm。作为优选，上述步骤3中，温室大棚以木屑、泥炭土作为基质，且木屑：泥炭土为1:1-1:3。本发明具有以下有益效果：1.本发明在种子诱导培养，壮苗及生根培养，组培苗移栽过程中不会对周围环境产生影响，是一种环境友好型的快速繁育技术。2.本发明克服了野生铁皮石斛植株生长的质量低、增殖慢及长势不一致等的问题，从而提高培养效率及减少生产成本。本发明具有技术工艺易操作、流程少、繁育快速等优点。具体实施方式下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通或改变都将落入本发明保护范围。实施例11.种子的诱导培养：去掉朔果干枯部分，用自来水冲洗干净后，用70%酒精浸泡20-50s，再用0.1%升汞消毒6-10min，最后用无菌水冲洗3-4次。在无菌条件下切开朔果，把种子播种于诱导培养基上,以MS作为基本培养基,培养基加入椰油酰谷氨酸二钠1-5g•Ｌ－１、蔗糖20-40g·Ｌ－１，琼脂8-12g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl调pH4.8-5.2,在121℃高压灭菌锅灭菌25min；盖上瓶盖,置于培养室内进行培养.2.壮苗及生根培养:将上述获得的铁皮石斛幼芽从组培瓶中取出，在无菌条件下移入增殖和壮苗培养基中，盖上瓶盖，置于培养室内进行培养,温度26-28℃，光照强度1600-2000Ｌｘ。3.组培苗移栽:将铁皮石斛幼苗经过常规炼苗处理后移栽于温室大棚，温室大棚以木屑、泥炭土作为基质，且木屑：泥炭土为1:1-1:3，移栽后按常规管理，湿度保持在70～90%。实施例21.种子的诱导培养：去掉朔果干枯部分，用自来水冲洗干净后，用70%酒精浸泡30s，再用0.1%升汞消毒7min，最后用无菌水冲洗3次。在无菌条件下切开朔果，把种子播种于诱导培养基上,以MS作为基本培养基,培养基加入椰油酰谷氨酸二钠4g•Ｌ－１、蔗糖30g·Ｌ－１，琼脂8g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl调pH4.8,在121℃高压灭菌锅灭菌25min；盖上瓶盖,置于培养室内进行培养.2.壮苗及生根培养:将上述获得的铁皮石斛幼芽从组培瓶中取出，在无菌条件下移入增殖和壮苗培养基中，盖上瓶盖，置于培养室内进行培养,温度28℃，光照强度2000Ｌｘ。3.组培苗移栽:将铁皮石斛幼苗经过常规炼苗处理后移栽于温室大棚，温室大棚以木屑、泥炭土作为基质，且木屑：泥炭土为1:1，移栽后按常规管理，湿度保持在70-90%。实施例31.种子的诱导培养：去掉朔果干枯部分，用自来水冲洗干净后，用70%酒精浸泡40s，再用0.1%升汞消毒5min，最后用无菌水冲洗4次。在无菌条件下切开朔果，把种子播种于诱导培养基上,以MS作为基本培养基,培养基加入椰油酰谷氨酸二钠3g•Ｌ－１、蔗糖20g·Ｌ－１，琼脂12g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl调pH5.2,在121℃高压灭菌锅灭菌25min；盖上瓶盖,置于培养室内进行培养.油酰谷氨酸二钠和蔗糖配伍能提高铁皮石斛幼芽的成活率。2.壮苗及生根培养:将上述获得的铁皮石斛幼芽从组培瓶中取出，在无菌条件下移入增殖和壮苗培养基中，盖上瓶盖，置于培养室内进行培养,温度27℃，光照强度1800Ｌｘ。组培苗移栽:将铁皮石斛幼苗经过常规炼苗处理后移栽于温室大棚，温室大棚以木屑、泥炭土作为基质，且木屑：泥炭土为1:2移栽后按常规管理，湿度保持在70～90%。实施例41.种子的诱导培养：去掉朔果干枯部分，用自来水冲洗干净后，用70%酒精浸泡30s，再用0.1%升汞消毒7min，最后用无菌水冲洗3次。在无菌条件下切开朔果，把种子播种于诱导培养基上,以MS作为基本培养基,培养基加入椰油酰谷氨酸二钠1g•Ｌ－１、蔗糖30g·Ｌ－１，琼脂8g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl调pH4.8,在121℃高压灭菌锅灭菌25min；盖上瓶盖,置于培养室内进行培养.2.壮苗及生根培养:将上述获得的铁皮石斛幼芽从组培瓶中取出，在无菌条件下移入增殖和壮苗培养基中，盖上瓶盖，置于培养室内进行培养,温度28℃，光照强度2000Ｌｘ。3.组培苗移栽:将铁皮石斛幼苗经过常规炼苗处理后移栽于温室大棚，温室大棚以木屑、泥炭土作为基质，且木屑：泥炭土为1:1移栽后按常规管理，湿度保持在70～90%，培养６个月后调查成活率、平均新芽数及大于３ｃｍ的平均新芽数。项目成活率平均新发芽数大于３ｃｍ的平均新芽数结果100%1.741.11由上表可知，该方案下，培养６个月的铁皮石斛成活率为100%，平均新发芽数为1.74，大于3cm的平均发芽数为1.11。实施例51.种子的诱导培养：去掉朔果干枯部分，用自来水冲洗干净后，用70%酒精浸泡40s，再用0.1%升汞消毒5min，最后用无菌水冲洗4次。在无菌条件下切开朔果，把种子播种于诱导培养基上,以MS作为基本培养基,培养基加入椰油酰谷氨酸二钠1g•Ｌ－１、蔗糖20g·Ｌ－１，琼脂12g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl调pH5.2,在121℃高压灭菌锅灭菌25min；盖上瓶盖,置于培养室内进行培养.2.壮苗及生根培养:将上述获得的铁皮石斛幼芽从组培瓶中取出，在无菌条件下移入增殖和壮苗培养基中，盖上瓶盖，置于培养室内进行培养,温度27℃，光照强度1800Ｌx。组培苗移栽:将铁皮石斛幼苗经过常规炼苗处理后移栽于温室大棚，温室大棚以木屑、泥炭土作为基质，且木屑：泥炭土为1:2移栽后按常规管理，湿度保持在70～90%。培养６个月后调查成活率、平均新芽数及大于３ｃｍ的平均新芽数。项目成活率平均新发芽数大于３ｃｍ的平均新芽数结果100%2.201.31由上表可知，该方案下，培养６个月的铁皮石斛成活率为100%，平均新发芽数为2.20，大于3cm的平均发芽数为1.31。当然，上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本
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