1.一种枳的组织培养再生苗的培养方法,其特征在于,选取枳的茎段作为组培用的外植体;对茎段进行愈伤组织诱导;成功诱导后通过切割愈伤组织进行进一步继代培养、增大并逐渐分化形成不定芽;再通过光下诱导不定芽再分化形成茎和叶;最后,经生根培养形成不定根后进行驯化移栽,然后正常培养。
2.根据权利要求1所述的枳的组织培养再生苗的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1、外植体的选择及处理:选取枳的茎段为起始材料,消毒后作为组培用的外植体;
步骤2、愈伤组织的诱导培养:将经过消毒的外植体接种于愈伤组织诱导培养基MS+6-BA1.0-2.0mg/L+IBA0.1-0.2mg/L+GA30.25-0.5mg/L上进行暗培养,茎段切口处逐渐形成愈伤组织。
步骤3、愈伤组织的增殖培养:
形成的愈伤组织经切割后转接到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA0.5-1.0mg/L+IBA0.1-0.2mg/L+GA30.25-0.5mg/L上进行暗培养,愈伤组织较为迅速的生长膨大;
步骤4、愈伤组织的分化及再分化培养:
将增殖后的愈伤组织转移到光下培养,通过光诱导,迅速分化形成不定芽,而后缓慢分化为茎和叶;
步骤5、生根成苗及驯化移栽:
将再分化形成的茎和叶转移到生根培养基1/2MS+IBA0.25-0.5mg/L上进行培养,20~30天后,长出1-2条肉质不定根,生根成苗成为新的植株,炼苗、缓苗后正常培养。
3.根据权利要求2所述的枳的组织培养再生苗的培养方法,其特征在于,愈伤组织的诱导及增殖的培养条件均为:培养温度23-27℃,避光进行暗培养;愈伤组织分化及再分化培养、再生苗的生根培养条件均为23-27℃,光照时间为10~12h/d,光照强度为2500-3000lux。
4.根据权利要求2所述的枳的组织培养再生苗的培养方法,其特征在于,愈伤组织诱导培养基、愈伤组织增殖及分化培养基及再生苗的生根培养基均为MS培养基,蔗糖用量为20~40g/L,凝固剂为琼脂粉、用量为6~7g/L,培养基pH为5.7-5.9。
5.根据权利要求2所述的枳的组织培养再生苗的培养方法,其特征在于,所述炼苗、缓苗具体为:先在组培室打开瓶盖炼苗3天,然后将其移至温室或荫棚,再炼苗3天;然后将组培苗从培养瓶中取出,洗净其表面的琼脂,移栽到培养基质中进行缓苗,然后正常培养。
6.根据权利要求5所述的枳的组织培养再生苗的培养方法,其特征在于,所述培养基质为蛭石与珍珠盐。
7.根据权利要求5或6所述的枳的组织培养再生苗的培养方法,其特征在于,所述培养基质含水量25%以内,空气相对湿度60~80%,遮光50%。