本发明涉及到三七种植技术，尤其是一种三七组织培养快繁方法。
背景技术：
三七为五加科植物，三七：Panak notpginseng（Bvrk）F.H.chen的干 燥根，主产云南、广西等地，此外，四川、贵州、江西亦产。挖出的根，除去茎叶、泥土，剪下芦头，侧根及须根，暴晒至半干，反复搓揉，以后每日边晒边搓，待至全干放入麻袋内撞至表面光滑即可，药性，根略呈纺锤形，类圆锥形或不规则块状，长1~6cm，直径1~4cm，表面灰黄或灰棕色，有断续的纵皱分级支根。中心微显放射状纹理。气微，味苦而后微甜。以个大皮细、体重质坚、表面光滑、断面色灰绿或黄绿者为佳。主要成材含多种皂苷，总量9.75~14.9%，和人参所含皂苷类似，但主为达泻脂烷系皂苷，有人参皂苷和三七皂苷等。功用主治：止血散瘀，消肿止痛，用于吐血、衄血、便血、血痢、产后血晕，瘀血胸痛，跌打肿痛，外伤出血。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种通过不定芽、丛生芽增植、试管苗生根、炼苗移栽等方法，使三七通过丛生芽的离体快繁方法获得苗壮根粗，生命力强，操作容易，成活率高达96%，工艺方法简单易行，技术可靠，操作容易。
本发明的技术解决方案是这样的，一种三七组织培养快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）诱导不定芽：选取三七带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒4秒种后，用无菌水冲洗8次后置于0.3%的升汞溶液中消毒9分钟，然后用无菌水冲洗8次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在24℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；
（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后每天光照11小时，光照强度为900lx，培养温度为24℃的条件下培养，19天转接一次；
（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在24℃条件下全暗培养6天，然后每天光照11小时，光照强度为1900lx，培养温度为24℃的条件下培养至生根；
（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗9天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质并定植于大田中。
步骤（1）所述的三七带藤茎外植体在进行不定芽诱导之前需进行预处理，处理的方法是：将从采集的三七带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.08%的高锰酸钾溶液中浸泡3小时，再用自来水冲洗8次后用胶塑料袋密封后置于6℃冰箱中过夜备用。
步骤（1）所述的诱导培养基为：以GS为基本培养基，附加1.8%蔗糖0.3%琼脂0.15%活性炭0.55%酸性水解酪蛋白以及2.1mg/L KT2.1mg/L IBA和1.1mg/L 2,4-D，pH值为5.9。
步骤（2）所述的增殖培养基为：以MS为基本培养基，附加0.32mg/L 6-BA1.8mg/L NAA 8.0mg/L核黄素0.8mg/L D-泛酸钙8.0mg/L抗坏血酸8.0mg/L L-半胱氨酸和4.0%蔗糖8.0%琼脂0.3%活性炭，pH值为5.9。
步骤（3）所述的生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，附加1.0mg/L IBA1.2mg/L GGR2.8mg/L L-半胱氨酸和2.8%蔗糖0.8%琼脂0.2%活性炭，pH值为5.9。
本发明与现有技术相比的突出效果是：运用组织培养模式获得粗壮、成活率高达96%以上的三七树苗，具有简易可行，容易操作，经济，成本低，工艺方法先进，可以规模化生产。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1
1、外植体预处理：将从采集的三七带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.02%的高锰酸钾溶液中浸泡6小时，再用自来水冲洗6次后用胶塑料袋密封后置于2℃冰箱中过夜备用。
2、培养过程：
（1）诱导不定芽：三七带节藤茎经75%酒精消毒6秒种后，用无菌水冲洗5次后经0.3%的升汞溶液中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗6次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在26℃条件下全暗培养，培养48天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+1.8mg/LKT+0.2mg/LIBA和0.3mg/L 2,4-D +3.6%蔗糖+0.25%琼脂+0.06%活性炭+0.2%酸性水解酪蛋白，pH值为5.6;
（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后每天光照12小时，光照强度为1200lx，培养温度为26℃的条件下培养，23天转接一次，增殖系数为9。所采用的增殖培养基为：MS+1.8mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA +0.8mg/L核黄素+0.3mg/L D-泛酸钙+0.8mg/L抗坏血酸+0.8mg/L L-半胱氨酸+2.5%蔗糖+0.25%琼脂+0.15%活性炭，pH值为5.6；
（3）试管苗生根：将长至1cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养5天，然后每天光照12小时，光照强度为3500lx，培养温度为26℃的条件下培养23天生根，生根率达96%。所采用的生根培养基为：1/2MS+0.25mg/L IBA+0.55mg/L GGR+0.8mg/L L-半胱氨酸+1.8%%蔗糖+0.2%琼脂+0.15%活性炭，pH值为5.6；
（4）炼苗移栽：将长至1cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质并定植于大田中，成活率达96%。
实施例2
1、外植体预处理：将从野外采集的三七带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后0.02%的高锰酸钾溶液中浸泡6小时，再用自来水冲洗5次后胶塑料袋密封后6℃冰箱中过夜备用。
2、培养过程：
（1）诱导不定芽：三七带节藤茎经75%酒精消毒8秒种后，用无菌水冲洗6次后经0.4%的升汞溶液中消毒8分钟，然后用无菌水冲洗6次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在23℃条件下全暗培养，培养41天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+1.0mg/L KT+0.15mg/L IBA和0.15mg/L 2,4-D +0.25%蔗糖+0.35%琼脂+0.15%活性炭+0.45%酸性水解酪蛋白，pH值为5.5;
（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后每天光照13小时，光照强度为1500lx，培养温度为24℃的条件下培养，28天转接一次，增殖系数为3。所采用的增殖培养基为：MS+0.5mg/L 6-BA+0.25mg/L NAA +2.5mg/L核黄素+0.25mg/L D-泛酸钙+3.3mg/L抗坏血酸+4.3mg/L L-半胱氨酸+3.3%蔗糖+0.6%琼脂+0.065%活性炭，pH值为5.5；
（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在24℃条件下全暗培养12天，然后每天光照13小时，光照强度为3000lx，培养温度为24℃的条件下培养30天生根，生根率达96%。所采用的生根培养基为：1/2MS+0.55mg/L IBA+1.25mg/L GGR+3.0mg/L L-半胱氨酸+3.0%%蔗糖+0.2%琼脂+0.02%活性炭，pH值为5.5；
（4）炼苗移栽：将长至10cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗9天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质并定植于大田中，成活率达96%。
实施例3
1、外植体预处理：将从野外采集的三七带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后0.08%的高锰酸钾溶液中浸泡3小时，再用自来水冲洗3次后用胶塑料袋密封后5℃冰箱中过夜备用。
2、培养过程：
（1）诱导不定芽：三七带节藤茎经75%酒精消毒6秒种后，用无菌水冲洗6次后置于0.15%的升汞溶液中消毒11分钟，然后用无菌水冲洗8次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在26℃条件下全暗培养，培养49天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+1.5mg/L KT+0.75mg/L IBA和0.25mg/L 2,4-D +3.25%蔗糖+0.25%琼脂+0.02%活性炭+0.25%酸性水解酪蛋白，pH值为5.3;
（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照11小时，光照强度为1100lx，培养温度为25℃的条件下培养，24天转接一次，增殖系数为8。所采用的增殖培养基为：MS+1.35mg/L 6-BA+0.55mg/L NAA +3.5mg/L核黄素+0.35mg/L D-泛酸钙+0.45mg/L抗坏血酸+2.25mg/L L-半胱氨酸+2.5%蔗糖+0.35%琼脂+0.15%活性炭，pH值为5.3；
（3）试管苗生根：将长至1cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在23℃条件下全暗培养11天，然后每天光照11小时，光照强度为3500lx，培养温度为23℃的条件下培养49天生根，生根率达96%。所采用的生根培养基为：1/2MS+0.15mg/L IBA+0.65mg/L GGR+1.35mg/L L-半胱氨酸+1.25%%蔗糖+0.35%琼脂+0.15%活性炭，pH值为5.3；
（4）炼苗移栽：将长至1cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质并定植于大田中，成活率达96%。