本发明涉及组织培养技术领域，具体涉及一种酿酒葡萄组培苗快速繁殖的方法。
背景技术：
葡萄良种苗木繁育体系建设，是我国当前葡萄产业中的突出问题。长期以来，葡萄苗木生产、销售和运输缺乏管理部门的有效监督，加之利益的驱使，导致苗木质量参差不齐，尤其是品种纯正、高质量、脱毒良种苗木生产缺乏统一标准。近年来，植物的组织培养广泛应用在酿酒葡萄快速繁殖中，通过组织培养，不仅可以加快繁殖速度，而且还可以有效地去除病毒，获得无病毒苗木。同时，酿酒葡萄外植体类型、培养基、温度与湿度、光照强度以及接种操作等内外因素都会影响组培苗的生长和繁殖速度；另外，在实际生产中，不同酿酒葡萄品种需要不同培养基来进行培养。因此，有必要针对不同酿酒葡萄品种筛选最适宜的培养条件，降低操作难度，建立酿酒葡萄组培快繁体系，为生产快速提供优质苗木。
技术实现要素：
针对酿酒葡萄组培苗生产过程中，不同品种需要不同培养基配方、培养周期长、根系弱和操作难度等问题，本发明提供了一种酿酒葡萄组培苗快速繁殖的方法，可实现同时增殖多个品种、缩短培养周期、高效率的组培快繁，为生产提供优质葡萄苗木。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种酿酒葡萄组培苗快速繁殖的方法，包括如下步骤：
s1、按培养基配方分别配制50倍大量元素母液，100倍微量元素、铁盐、有机物、iaa和青霉素母液，其中钙盐与大量元素母液分开配制，并贴上标签，冷藏保存待用；
s2、在搪瓷盆中分别加入75g蔗糖、23g琼脂，然后再加入蒸馏水4l，加热至沸腾，期间不断搅拌；
s3、加入母液至搪瓷盆中，充分混合均匀，煮沸3分～5分钟后，加蒸馏水定容至5l，然后用1.0mol/l的hcl或者1.0mol/l的naoh溶液调节ph值至5.8；
s4、将制作好的培养基均匀的分装到200ml的组培瓶中、拧紧封口盖或者150ml的三角瓶中、加棉塞、牛皮纸包裹、用棉线绳扎紧；然后放在高压灭菌锅内灭菌，条件为121℃，20分钟；取出放在推车中待用；
s5、在无菌接种室内，选用无菌培养的成株无毒苗，剪取茎段，要求茎段带有一个芽，茎段下部不能少于0.5cm，茎段上带有1～2片完整叶片，接种在上述培养基上，每瓶3～5个茎段；培养温度为25～28℃，湿度85％以上，光照强度为2500～3500lux，光源为led灯，光照培养16小时，黑暗培养8小时。
本发明具有以下有益效果；
(1)可实现同时增殖多个品种，包括赤霞珠、梅鹿辄、霞多丽和黑比诺等品种；
(2)培养周期短，经过20～30天的培养，即可进行驯化移栽。
(3)根系发达，培养第30天时，组培苗根系多、粗壮，且有较多须根，有利于驯化移栽，提高成活率。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1(以黑比诺为例)：
步骤一、培养基的选择：
b5+4.6g/l琼脂+15g/l蔗糖+0.1mg/liaa+50mg/l青霉素，ph＝5.8。
步骤二、培养基的具体制作步骤(以5l培养基熬制为例)：
(1)母液的配制，按培养基配方分别配制50倍大量元素母液，100倍微量元素、铁盐、有机物、iaa和青霉素母液，其中钙盐与大量元素母液分开配制，并贴上标签，冷藏保存待用。
(2)培养基的熬制，分别在搪瓷盆中加入75g蔗糖、23g琼脂，然后再加入蒸馏水4l，加热至沸腾，期间不断搅拌；再分别加入大量元素和钙盐母液各100ml，微量元素、铁盐、有机物、iaa和青霉素各50ml至搪瓷盆中，充分混合均匀，煮沸3分～5分钟。
(4)加蒸馏水定容至5l，然后用1.0mol/l的hcl或者1.0mol/l的naoh溶液调ph值至5.8。
(5)培养基分装与灭菌，将制作好的培养基均匀的分装到150ml的三角瓶中，每瓶50～60ml；加棉塞、牛皮纸包裹、用棉线绳扎紧；然后放在高压灭菌锅内灭菌，条件为121℃，20分钟；冷却后取出放在推车中待用。
步骤三、接种培养
在无菌接种室内，选用无菌培养的成株无毒苗，剪取茎段，要求茎段带有一个芽，茎段下部不能少于0.5cm，茎段上带有1～2片完整叶片，接种在上述培养基上，每瓶3～4个茎段；培养温度为25～28℃，湿度85％以上，光照强度为2500～3500lux，光照培养16小时，黑暗培养8小时。期间及时处理污染的组培苗。培养25～30天即可进行组培苗移栽。
以下结合相应的试验数据对本发明作进一步说明。
试验1不同浓度iaa对酿酒葡萄组培苗生长的影响：以b5为基础培养基，添加4.6g/l琼脂、15g/l蔗糖，iaa设置0mg/l、0.05mg/l、0.1mg/l和0.2mg/l4个梯度，灭菌前调节ph为5.8。培养条件为培养温度为25～28℃，湿度85％以上，光照强度为2500～3500lux，光源为led灯，光照培养16小时，黑暗培养8小时。试验结果见表1：
表1不同浓度iaa对酿酒葡萄组培苗生长的影响(培养30天的数据)
试验2不同浓度青霉素对酿酒葡萄组培苗生长的影响：在试验1的基础上，以b5为基础培养基，添加4.6g/l琼脂、15g/l蔗糖，青霉素设置0mg/l、10mg/l、25mg/l、50mg/l和75mg/l5个梯度，灭菌前调节ph为5.8。培养条件为培养温度为25～28℃，湿度85％以上，光照强度为2500～3500lux，光照培养16小时，黑暗培养8小时。试验结果见表2：
表2不同浓度青霉素对酿酒葡萄组培苗生长的影响(培养30天的数据)
实施例2(以赤霞珠为例)：
步骤一、培养基的选择：
b5+4.6g/l琼脂+15g/l蔗糖+0.1mg/liaa+50mg/l青霉素，ph＝5.8。
步骤二、培养基的具体制作步骤(以5l培养基熬制为例)：
(1)母液的配制，按培养基配方分别配制50倍大量元素母液，100倍微量元素、铁盐、有机物、iaa和青霉素母液，其中钙盐与大量元素母液分开配制，并贴上标签，冷藏保存待用。
(2)培养基的熬制，分别在搪瓷盆中加入75g蔗糖、23g琼脂，然后再加入蒸馏水4l，加热至沸腾，期间不断搅拌；再分别加入大量元素和钙盐母液各100ml，微量元素、铁盐、有机物、iaa和青霉素各50ml至搪瓷盆中，充分混合均匀，煮沸3分～5分钟。
(4)加蒸馏水定容至5l，然后用1.0mol/l的hcl或者1.0mol/l的naoh溶液调ph值至5.8。
(5)培养基分装与灭菌，将制作好的培养基均匀的分装到200ml的组培瓶中，每瓶70～80ml；拧紧封口盖；然后放在高压灭菌锅内灭菌，条件为121℃，20分钟；冷却后取出放在推车中待用。
步骤三、接种培养
在无菌接种室内，选用无菌培养的成株无毒苗，剪取茎段，要求茎段带有一个芽，茎段下部不能少于0.5cm，茎段上带有1～2片完整叶片，接种在上述培养基上，每瓶4～5个茎段；培养温度为25～28℃，湿度85％以上，光照强度为2500～3500lux，光照培养16小时，黑暗培养8小时。期间及时处理污染的组培苗。培养20～30天即可进行组培苗移栽。
采用上述实例的组织培养方法得到的酿酒葡萄组培苗不仅根系发达，利于驯化移栽；而且也缩短了培养周期，降低了生产成本，获得了优质、无毒、高质量苗木，能满足生产的需要。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。