本发明属于娃娃鱼养殖技术领域，具体涉及一种娃娃鱼精液稀释剂及其制备方法。
背景技术：
大鲵隶属隐腮鲵科，大鲵属，是世界上现存最大的也是最珍贵的两栖动物；它的叫声像婴儿的哭声，因此人们又叫它“娃娃鱼”；大鲵俗称“大山椒鱼”，源于其身有山椒味道；大鲵是代表鱼类和爬行类的过渡类型，有古老“活化石”之称，同时大鲵肉质洁白鲜嫩，肥而不腻，味道特鲜，含有丰富的营养物质，被誉为水中“活人参”；野生大鲵资源已濒临灭绝，开展人工规模养殖是恢复大鲵自然资源，满足社会需求的必由之路，大鲵在自然环境中由于外界多种因素的影响，其成活率不高，这是大鲵不能很快自然增殖的原因；在人工饲养条件下，很难发生自然交配产卵的情况。
由于娃娃鱼的观赏价值和食用价值都特别高市场上对娃娃鱼的需求特别大，人们开始研究大规模的人工养殖娃娃鱼，但是娃娃鱼的精液粘稠，不易流动，在受精过程中，由于流动范围小，因此导致与卵子的结合面积变小，从而使得精液在受精过程中会出现重复受精的问题，导致活力不强的精子与卵子结合，从而出现病弱与活力不强的残体得到受精出现孵化出的娃娃鱼健康状况不佳的情况。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种娃娃鱼精液稀释剂，利用组合药物对娃娃鱼精液进行稀释，扩大精子在浴液中游动的范围，使之与卵子的结合面大大增强，节省纯精液在每次受精中使用的数量。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种娃娃鱼精液稀释剂，以重量份数计算，由以下原料制成：0.9%氯化钠注射液100份，纯水10-20份，10%氯化钾注射液1-3份，绿原酸1-2份，甘油1-3份，葡萄糖1-3份，柠檬酸钠1-2份，柠檬酸1-3份，乙二胺四乙酸0.5-2份，青霉素0.5-1份、聚乙烯醇0.2-0.5份。
优选地，本发明娃娃鱼精液稀释剂，以重量份数计算，由以下原料制成：0.9%氯化钠注射液100份，纯水15份，10%氯化钾注射液1.5份，绿原酸1份，甘油1.5份，葡萄糖1.5份，柠檬酸钠1份，柠檬酸3份，乙二胺四乙酸1份，青霉素0.5份、聚乙烯醇0.2份。
本发明娃娃鱼精液稀释剂的制备方法如下：
（1）按原料称取各原料；
（2）将青霉素溶于纯水中，搅拌均匀后倒入0.9%氯化钠注射液，再倒入10%氯化钾注射液，搅拌搅拌均匀；得到混合液；
（3）最后将其他原料倒入步骤（2）得到的混合液中，搅拌均匀，得到稀释剂。
本发明娃娃鱼精液稀释剂的使用方法为：使用时先用稀释剂对精液进行稀释，然后将稀释后的精液与卵子进行受精，受精时稀释的精液淹没卵子高于1cm即可。
优选地，使用时混合后的精液温度控制在15-17℃之间，温度过高，精子会死亡，温度过低，精子的活动能力有限。
本发明利用组合药物对娃娃鱼精液进行稀释，扩大精子在浴液中游动的范围，使之与卵子的结合面大大增强，节省纯精液在每次受精中使用的数量，又能使活力不强的精子不会钻入卵膜与卵了受精，大大降底了畸形或者病弱的残体在受精前就做到了优胜劣汰，有效提高了受精的质量。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
娃娃鱼精液稀释剂，以重量份数计算，由以下原料制成：0.9%氯化钠注射液100份，纯水15份，10%氯化钾注射液1.5份，绿原酸1份，甘油1.5份，葡萄糖1.5份，柠檬酸钠1份，柠檬酸3份，乙二胺四乙酸1份，青霉素0.5份、聚乙烯醇0.2份。
对比例1
对比例1与实施例1的区别在于精液稀释剂的不同，稀释剂中没有添加绿原酸，配方如下：0.9%氯化钠注射液100份，纯水15份，10%氯化钾注射液1.5份，甘油1.5份，葡萄糖1.5份，柠檬酸钠1份，柠檬酸3份，乙二胺四乙酸1份，青霉素0.5份、聚乙烯醇0.2份。
实施例2
娃娃鱼精液稀释剂，以重量份数计算，由以下原料制成：0.9%氯化钠注射液100份，纯水16份，10%氯化钾注射液2份，绿原酸2份，甘油2份，葡萄糖2份，柠檬酸钠1.5份，柠檬酸1.5份，乙二胺四乙酸1.5份，青霉素1份、聚乙烯醇0.3份。
实施例3
娃娃鱼精液稀释剂，以重量份数计算，由以下原料制成：0.9%氯化钠注射液100份，纯水17份，10%氯化钾注射液1份，绿原酸2份，甘油3份，葡萄糖1份，柠檬酸钠2份，柠檬酸2份，乙二胺四乙酸2.5份，青霉素0.7份、聚乙烯醇0.2份。
实施例4
娃娃鱼精液稀释剂，以重量份数计算，由以下原料制成：0.9%氯化钠注射液100份，纯水18份，10%氯化钾注射液1份，绿原酸2份，甘油3份，葡萄糖1份，柠檬酸钠1份，柠檬酸1份，乙二胺四乙酸0.9份，青霉素0.9份、聚乙烯醇0.2份。
实施例5
娃娃鱼精液稀释剂，以重量份数计算，由以下原料制成：0.9%氯化钠注射液100份，纯水12份，10%氯化钾注射液3份，绿原酸2份，甘油2份，葡萄糖2份，柠檬酸钠1份，柠檬2份，乙二胺四乙酸0.7份，青霉素0.8份、聚乙烯醇0.2份。
实施例6
娃娃鱼精液稀释剂，以重量份数计算，由以下原料制成：0.9%氯化钠注射液100份，纯水15份，10%氯化钾注射液1.9份，绿原酸1.7份，甘油1.8份，葡萄糖1.9份，柠檬酸钠1.7份，柠檬酸2.7份，乙二胺四乙酸1.7份，青霉素0.56份、聚乙烯醇0.2份。
以上实施例、对比例的制备方法如下：
娃娃鱼精液稀释剂的制备方法如下：（1）按原料称取各原料；
（2）将青霉素溶于纯水中，搅拌均匀后倒入0.9%氯化钠注射液，再倒入10%氯化钾注射液，搅拌搅拌均匀；得到混合液；
（3）最后将其他原料倒入步骤（2）得到的混合液中，搅拌均匀，得到稀释剂。
使用时先用稀释剂对精液进行稀释，然后将稀释后的精液与卵子进行受精，受精时稀释的精液淹没卵子高于1cm即可；混合后的精液温度控制在16℃左右。
将实施例1-6和对比例1进行分组试验，对相同质量、相同体积的精液进行稀释，然后选取相同质量、相同体积的卵子与其受精，然后对受精时间、精子与卵子的结合量以及受精灵活度等进行观察，对比试验结果，得出表1。
表1
通过上表分析可知，本发明稀释剂能有效提高受精率，以及增加精子的灵活度，使之与卵子的结合面大大增强，节省纯精液在每次受精中使用的数量，又能使活力不强的精子不会钻入卵膜与卵了受精，大大降底了畸形或者病弱的残体在受精前就做到了优胜劣汰，有效提高了受精的质量。
实施例1的具体应用试验如下：
一种娃娃鱼的人工繁殖方法，依次包括如下步骤：
（1）种鲵的选择：用于人工催产的种鲵必须是达性成熟个体，选择体质健壮无伤，腹部膨大而柔软，用手轻摸其腹部有饱满松软之感的雌鲵，此鲵腹内卵已成熟，可做人工催产；
（2）人工催产：将种鲵放入光线暗弱的拱洞水池内，水深为35cm，池底铺设洗净的小卵石，水质清洁透明；催产激素采用绒毛膜促性腺激素(hcg)和促黄体生成素释放素类似物(简称lrh～a)；其用量在hcg为30mg/kg，lrh～a为32mg/kg；两种激素可以混用；注射激素水溶液的量以0.7ml/kg计算，注射部位在后背侧肋沟间进针，进针深度以穿过肌肉层为宜；
（3）人工托卵和受精：注射催产素的大鲵，当雌鲵开始产出卵带时，随即用布蒙上雌鲵的眼睛，并轻轻放入布担架内，然后用左手将其尾部向上稍稍提起，右手轻托卵带，让卵徐徐自然托入盆中；当盆中有一定的卵带后，即要抓紧时间，轻压雄鲵腹部挤取精液，用4ml稀释剂稀释后与卵带混合，轻轻摇动使其精卵充分结合；10分钟后，再加少量清水，过30分钟后换水两次，即可分盆进行孵化；
所述稀释剂，以重量份数计算，由以下原料制成：0.9%氯化钠注射液100份，纯水15份，10%氯化钾注射液1.5份，绿原酸1份，甘油1.5份，葡萄糖1.5份，柠檬酸钠1份，柠檬酸3份，乙二胺四乙酸1份，青霉素0.5份；
卵的受精率可达97%；
（4）人工孵化方法和管理：将受精卵分放在盆内清水中，每盆装100粒，水质要清新而无泥沙，每天换水4次，换水时动作要轻，不宜振动，以避免卵粒浮动易使卵子破裂，造成胚胎天亡；此外，分阶段采用0.2%的孔雀石绿溶液浸洗卵胚3～5分钟，防止水霉病的发生；根据大鲵的畏光习性，孵化盆宜放在阴凉、光线暗弱的地方；在水温为20-25℃的条件下，历经30-32天孵化，其孵化率可达90%；
刚孵化出的幼体全长2.9cm，体重约0.3g，口部未开，不能进食，幼体发育营养仍靠吸收卵黄，从孵化至卵黄耗尽大约需时30天左右，此期内不必投放饵料；
（5）幼鲵的饲养：幼体孵化之后已到冬季，气温和水温逐渐下降，为了提高成活率，幼体需在水温15-20℃的室内饲养；孵化出膜30天以后的幼鲵即开始摄食，但消化功能较弱，可饲喂水蚤、孑孓和水蚯蚓等；此时，一般全长4.5～4.8cm，体重0.5～0.8g；经过56天左右的饲养，幼鲵全长可达4.9～5.7cm，体重1.3～2g，这时可加喂小虾、水生昆虫、蚯蚓等饵料；1龄幼鲵全长12～17cm，体重31g，其成活率可达98%；在饲养幼鲵中，每天换水2次，保持水质清新是幼鲵成活率高的重要因素；当幼鲵全长10cm，体重20g以上即可转入2m2左右的池内饲养，每池可放养10尾，水深25cm，除投放鲜活小动物外，也可以傍晚饲喂牛羊肉碎片；
（6）大鲵的生长：全长15～30cm的个体，其全长每增长5cm，体重只增加50g左右；全长35～50cm的个体，每增长5cm，体重可增加100g左右；体全长50～65cm之间的个体，每增长5cm，体重则增加500g；由此可以看出，大鲵在幼体时全长比体重的增长快。
对比例1
对比例1与实施例1的区别在于精液稀释剂的不同，稀释剂中没有添加绿原酸。
该对比例娃娃鱼的人工繁殖方法，依次包括如下步骤：
（1）种鲵的选择：用于人工催产的种鲵必须是达性成熟个体，选择体质健壮无伤，腹部膨大而柔软，用手轻摸其腹部有饱满松软之感的雌鲵，此鲵腹内卵已成熟，可做人工催产；
（2）人工催产：将种鲵放入光线暗弱的拱洞水池内，水深为35cm，池底铺设洗净的小卵石，水质清洁透明；催产激素采用绒毛膜促性腺激素(hcg)和促黄体生成素释放素类似物(简称lrh～a)；其用量在hcg为30mg/kg，lrh～a为32mg/kg；两种激素可以混用；注射激素水溶液的量以0.7ml/kg计算，注射部位在后背侧肋沟间进针，进针深度以穿过肌肉层为宜；
（3）人工托卵和受精：注射催产素的大鲵，当雌鲵开始产出卵带时，随即用布蒙上雌鲵的眼睛，并轻轻放入布担架内，然后用左手将其尾部向上稍稍提起，右手轻托卵带，让卵徐徐自然托入盆中；当盆中有一定的卵带后，即要抓紧时间，轻压雄鲵腹部挤取精液，用4ml稀释剂稀释后与卵带混合，轻轻摇动使其精卵充分结合；10分钟后，再加少量清水，过30分钟后换水两次，即可分盆进行孵化；
卵的受精率可达70%；
（4）人工孵化方法和管理：将受精卵分放在盆内清水中，每盆装100粒，水质要清新而无泥沙，每天换水4次，换水时动作要轻，不宜振动，以避免卵粒浮动易使卵子破裂，造成胚胎天亡；此外，分阶段采用0.2%的孔雀石绿溶液浸洗卵胚3～5分钟，防止水霉病的发生；根据大鲵的畏光习性，孵化盆宜放在阴凉、光线暗弱的地方；在水温为20-25℃的条件下，历经30-32天孵化，其孵化率可达60%；
刚孵化出的幼体全长2.9cm，体重约0.3g，口部未开，不能进食，幼体发育营养仍靠吸收卵黄，从孵化至卵黄耗尽大约需时30天左右，此期内不必投放饵料；
（5）幼鲵的饲养：幼体孵化之后已到冬季，气温和水温逐渐下降，为了提高成活率，幼体需在水温15-20℃的室内饲养；孵化出膜30天以后的幼鲵即开始摄食，但消化功能较弱，可饲喂水蚤、孑孓和水蚯蚓等；此时，一般全长4.5～4.8cm，体重0.5～0.8g；经过56天左右的饲养，幼鲵全长可达4.9～5.7cm，体重1.3～2g，这时可加喂小虾、水生昆虫、蚯蚓等饵料；1龄幼鲵全长12～17cm，体重31g，其成活率可达90%；在饲养幼鲵中，每天换水2次，保持水质清新是幼鲵成活率高的重要因素；当幼鲵全长10cm，体重20g以上即可转入2m2左右的池内饲养，每池可放养10尾，水深25cm，除投放鲜活小动物外，也可以傍晚饲喂牛羊肉碎片；
（6）大鲵的生长：全长15～30cm的个体，其全长每增长5cm，体重只增加40g左右；全长35～50cm的个体，每增长5cm，体重可增加80g左右；体全长50～65cm之间的个体，每增长5cm，体重则增加400g。
以上对比可见，实施例1的精子与卵子的结合量大，孵化率高，成活率高。
以上内容描述了本发明的基本原理和主要特征，本发明不受上述实施例的限制，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。