一种鲜活白花败酱的保鲜储存方法与流程

本发明属于生物技术领域，涉及一种鲜活白花败酱的保鲜储存方法。

背景技术：

白花败酱其根茎、根及全草均可人药，性味苦、辛、凉，具清热利湿、解毒排脓、活血化瘀、清心安神等功效，常用于治疗阑尾炎、痢疾、肝炎、扁桃体炎、痈肿疮毒等症；随着经济的发展，生活水平的提高，人们的保健意识和返璞归真、崇尚自然观念日益增强，膳食结构和饮食口味发生了根本性的改变，绿色无公害保健食品越来越为人们所青睐。

研究不同贮藏条件下(纸箱、泡沫箱、冰箱、自然摊放)，白花败酱生理生化指标的变化对白花败酱种植和运输，以及其他草本植物的种植和运输都具有积极的意义。

技术实现要素：

本发明的目的是针对现有的技术存在的上述问题，提供一种鲜活白花败酱的保鲜储存方法，本发明所要解决的技术问题是通过对鲜活白花败酱在不同储存方式中生理生化反应的检测，寻求适于保鲜的白花败酱的储存方法。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：一种鲜活白花败酱的保鲜储存方法，其特征在于，本方法包括如下步骤：

通过检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，相同时间内的各时间段内白花败酱外观品质的变化，并获得外管变化程度的表示数据i；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对鲜活白花败酱呼吸作用的影响，并获得数据a；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对鲜活白花败酱鲜重的影响,并获得数据b；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对白花败酱叶绿素含量的影响,并获得数据c；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对白花败酱呼吸作用和可溶性糖的影响，并获得数据d；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对白花败酱的cat和sod活性的影响，并获得数据e；

建立以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，鲜活白花败酱的数据i、数据a、数据b、数据c、数据c、数据d、数据e和时间的多维度数据库，根据储存要求的侧重点，选择适于储存目的的储存方式。

检测环境和检测样品的选定：选取大小一致的白花败酱苗若干株，于3月中旬定植于试验田内，肥水管理一致，四个月后进行采收，去除黄叶、虫叶，等份分别放置于纸箱、泡沫箱、冰箱(4℃低温)及自然摊放条件下，每隔3天取样观察，并测定其生理生化指标，取样检测三次；

测定方法：

1)含水量测定：取5g白花败酱鲜样，105℃烘30min，75℃烘至恒重，测定重量(m)，含水量＝(5-m)/5×100％。

2)叶绿素含量测定：取白花败酱鲜叶0.5g放入研钵中加入80％的丙酮5ml，少许碳酸钙和石英砂研磨成匀浆，再加80％丙酮5ml，将其传入离心管，并用适量80％丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后去掉沉淀取上清液，用80％丙酮定容至20ml；取上述色素提取液1ml，用分光光度计分别测定在波长645nm、663nm下的od值，以80％丙酮液为空白对照。

ca＝12.72×a663-2.59×a645,cb＝22.88×a645-4.67×a663，ct＝ca+cb，其中，ca和cb分别为叶绿素a和叶绿素b的浓度；

叶绿体色素含量(mg/g)＝ct×v/w/1000，其中v为浸提液体积(ml)，w为取样鲜重(g)；每组实验重复三次。

3)可溶性糖测定：用tba法测定可溶性糖,取白花败酱叶片0.5g加入5ml5％tca(三氯乙酸)研磨，以3000r/min离心10min，然后取上清液2ml，再加2mltba(0.67％硫代巴妥酸)于1o0℃水浴30min，冷却后离心。取上清液5ml在450nm波长下测定其od值，以清水为对照。

c1(mmol/l)＝11.71d450

式中：c1为可溶性糖的浓度；d450为450nm波长下的吸光度值。

4)酶活性的测定：

酶液提取：取白花败酱叶片1g于预冷的研钵中，加入2ml预冷的磷酸缓冲液，在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为10ml，于4℃3000r/min下离心30min，上清液为保护酶粗提液，保存于冰箱中用来测定sod和cat活性。

sod活性的测定方法：

(1)显色反应：取透明的5ml试管4支，2支为测定管，另2支为对照管；

按试剂(酶)——用量(ml)——终浓度(比色时)加入各溶液：0.05mol/l磷酸缓冲液1.5ml；130mmol/lmet溶液0.3ml；750umol/lnbt溶液0.3ml；100umol/ledta-na2液0.3ml，20umol/l核黄素0.3ml；酶液0.05ml，2支对照管以缓冲液代替酶液；蒸馏水0.25ml，混匀后将1支对照管置暗处，其它各管于人工箱的相同光照下反应2.5小时。

(2)sod活性测定与计算：至反应结束后，以不照光的对照管做空白，分在560nm下分别测定其它各管的吸光值。

sod总活性＝(ack-ae)×v/(ack×0.5×w×v1)

式中：sod总活性以每克鲜重酶单位表示；ack为照光对照管的吸光度；ae为样品管的吸光度；v为样品提取液总体积(ml)；v1为测定时取粗酶液量(ml)；w为样品鲜重(g)。

(3)cat活性测定方法：

取50ml三角瓶4个(两个测定，另两个为对照)，测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml0.1mol/l双氧水，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％硫酸2.5ml。用0.1mol/lkmno4标准溶液滴定，至出现粉红色(在30min内不消失)为终点。

(4)cat活性计算：酶活性用每g鲜重样品1min内分解双氧水的mg数表示：过氧化氢酶活性(h2o2mg/g/min)＝(a-b)×vt/(w×vs×1.7×t)；

式中：a对照kmno4滴定ml数；b酶反应后kmno4滴定ml数；vt提取酶液总量(ml)；vs反应时所用酶液量(ml)；w样品鲜重(g)；t反应时间(min)；1.7为1ml0.1mol/lkmno4相当于1.7mgh2o2。

(5)呼吸作用的检测：用二氧化碳测定仪检测白花败酱的呼吸强度。

附图说明

图1是不同贮藏方式对白花败酱鲜重的影响趋势图。

图2是不同贮藏方式对白花败酱呼吸作用的影响趋势图。

图3是不同贮藏方式对白花败酱可溶性糖的影响趋势图。

图4是不同贮藏方式对白花败酱cat活性的影响趋势图。

图5是不同贮藏方式对白花败酱sod活性的影响趋势图。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。

通过检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，相同时间内的各时间段内白花败酱外观品质的变化，并获得外管变化程度的表示数据i；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对鲜活白花败酱呼吸作用的影响，并获得数据a；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对鲜活白花败酱鲜重的影响,并获得数据b；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对白花败酱叶绿素含量的影响,并获得数据c；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对白花败酱呼吸作用和可溶性糖的影响，并获得数据d；

检测以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，对白花败酱的cat和sod活性的影响，并获得数据e；

建立以纸箱储存方式、泡沫箱储存方式、冰箱储存方式、自然摊放储存方式下，鲜活白花败酱的数据i、数据a、数据b、数据c、数据c、数据d、数据e和时间的多维度数据库，根据储存要求的侧重点，选择适于储存目的的储存方式。

检测环境和检测样品的选定：选取大小一致的白花败酱苗若干株，于3月中旬定植于试验田内，肥水管理一致，四个月后进行采收，去除黄叶、虫叶，等份分别放置于纸箱、泡沫箱、冰箱(4℃低温)及自然摊放条件下，每隔3天取样观察，并测定其生理生化指标，取样检测三次；

测定方法：

1)含水量测定：取5g白花败酱鲜样，105℃烘30min，75℃烘至恒重，测定重量(m),含水量＝(5-m)/5×100％。

2)叶绿素含量测定：取白花败酱鲜叶0.5g放入研钵中加入80％的丙酮5ml，少许碳酸钙和石英砂研磨成匀浆，再加80％丙酮5ml，将其传入离心管，并用适量80％丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后去掉沉淀取上清液，用80％丙酮定容至20ml；取上述色素提取液1ml，用分光光度计分别测定在波长645nm、663nm下的od值，以80％丙酮液为空白对照。

ca＝12.72×a663-2.59×a645,cb＝22.88×a645-4.67×a663，ct＝ca+cb，其中，ca和cb分别为叶绿素a和叶绿素b的浓度；

叶绿体色素含量(mg/g)＝ct×v/w/1000，其中v为浸提液体积(ml)，w为取样鲜重(g)；每组实验重复三次。

3)可溶性糖测定：用tba法测定可溶性糖,取白花败酱叶片0.5g加入5ml5％tca(三氯乙酸)研磨，以3000r/min离心10min，然后取上清液2ml，再加2mltba(0.67％硫代巴妥酸)于1o0℃水浴30min，冷却后离心。取上清液5ml在450nm波长下测定其od值，以清水为对照。

c1(mmol/l)＝11.71d450

式中：c1为可溶性糖的浓度；d450为450nm波长下的吸光度值。

4)酶活性的测定：

酶液提取：取白花败酱叶片1g于预冷的研钵中，加入2ml预冷的磷酸缓冲液，在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为10ml，于4℃3000r/min下离心30min，上清液为保护酶粗提液，保存于冰箱中用来测定sod和cat活性。

sod活性的测定方法：

(1)显色反应：取透明的5ml试管4支，2支为测定管，另2支为对照管；

按试剂(酶)——用量(ml)——终浓度(比色时)加入各溶液：0.05mol/l磷酸缓冲液1.5ml；130mmol/lmet溶液0.3ml；750umol/lnbt溶液0.3ml；100umol/ledta-na2液0.3ml，20umol/l核黄素0.3ml；酶液0.05ml，2支对照管以缓冲液代替酶液；蒸馏水0.25ml，混匀后将1支对照管置暗处，其它各管于人工箱的相同光照下反应2.5小时。

(2)sod活性测定与计算：至反应结束后，以不照光的对照管做空白，分在560nm下分别测定其它各管的吸光值。

sod总活性＝(ack-ae)×v/(ack×0.5×w×v1)

式中：sod总活性以每克鲜重酶单位表示；ack为照光对照管的吸光度；ae为样品管的吸光度；v为样品提取液总体积(ml)；v1为测定时取粗酶液量(ml)；w为样品鲜重(g)。

(3)cat活性测定方法：

取50ml三角瓶4个(两个测定，另两个为对照)，测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml0.1mol/l双氧水，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％硫酸2.5ml。用0.1mol/lkmno4标准溶液滴定，至出现粉红色(在30min内不消失)为终点。

(4)cat活性计算：酶活性用每g鲜重样品1min内分解双氧水的mg数表示：过氧化氢酶活性(h2o2mg/g/min)＝(a-b)×vt/(w×vs×1.7×t)；

式中：a对照kmno4滴定ml数；b酶反应后kmno4滴定ml数；vt提取酶液总量(ml)；vs反应时所用酶液量(ml)；w样品鲜重(g)；t反应时间(min)；1.7为1ml0.1mol/lkmno4相当于1.7mgh2o2。

(5)呼吸作用的检测：用二氧化碳测定仪检测白花败酱的呼吸强度。

外观品质是评价蔬菜质量最直观的方式，图1为贮藏7d后白花败酱的外观品质。用冰箱贮藏的效果最好，贮藏期间基本未出现萎蔫现象，只有极少叶片变褐；其次为泡沫箱贮藏，也未出现萎蔫现象，有少量叶片变褐；自然摊放和纸箱贮藏条件下叶片枯萎褐化严重。可见，冰箱贮藏和泡沫箱贮藏对白花败酱外观品质影响较小。

不同贮藏方式对白花败酱含水量及鲜重的影响：失重是导致果蔬在贮藏期间失水、萎蔫及腐烂变质的重要原因。由图1可知，随着贮藏时间的延长，白花败酱采后含水量均呈下降趋势,下降速度为自然摊放>纸箱>泡沫箱>冰箱，贮藏7d后鲜重分别显著下降了50％、35％、22％和15％。冰箱贮藏和泡沫箱贮藏处理虽也有下降趋势，但变化趋于平缓。表明冰箱低温贮藏和泡沫箱密封贮藏有利于维持白花败酱的鲜重。

下表为不同贮藏条件对白花败酱叶绿素含量的影响。随着贮藏时间的延长，各处理叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量均呈现下降趋势，下降速度为自然摊放>纸箱>泡沫箱>冰箱。表明冰箱低温贮藏和泡沫箱密封贮藏有利于缓解叶绿素的降解。

不同的贮藏方式对白花败酱呼吸作用和可溶性糖的影响：

呼吸强度是反应果蔬贮藏性能的一个重要指标。随着处理时间的延长，冰箱贮藏下，呼吸强度一直维持在较低的水平，且变化幅度不大，说明低温抑制了呼吸作用；泡沫箱处理的呼吸强度呈先升高后下降趋势且一直处在最高水平，这可能是由于泡沫箱透气性差、密闭性好，呼吸作用产生的呼吸热导致泡沫箱温度升高，增强了呼吸速率；其他2个处理的呼吸强度也呈先升高后下降趋势，其中自然摊放呼吸作用变化最为剧烈，7d后降到最低，由(图2)可见，冰箱低温贮藏能够有效抑制白花败酱叶片的呼吸作用，延长了贮藏期。

果蔬中可溶性糖含量的变化能直接反应果蔬的品质状况。由图3可知，不同贮藏方式下，可溶性糖含量的变化均呈先上升后下降的趋势，这可能是由于中大分子物质的分解，致使可溶性糖的含量略有上升，之后随着白花败酱的呼吸消耗，可溶性糖含量逐渐下降。各组的可溶性糖含量在贮藏第4d上升到了最高值，冰箱贮藏下的可溶性糖含量最高，显著高于其他处理；而后随着贮藏时间的延长，各处理可溶性糖含量呈下降趋势，下降速度为冰箱〉纸箱〉泡沫箱>自然摊放。从上可知，冰箱贮藏可以减缓可溶性糖含量的分解，这是由于低温能有效减缓了白花败酱因采收造成的呼吸加快，使贮藏过程中生理代谢速度降低，对于自身的消耗减少，较好的保存了糖类物质。

不同的贮藏方式对cat和sod活性的影响

sod能将o2^-生成h2o2，cat能催化分解植物体内积累的高浓度过氧化氢,将其分解为水和分子氧,从而使h2o2控制在较低水平,减少对果蔬组织可能造成的氧化伤害。从图4和图5可知，在贮藏初期(0-4d)，cat活性呈现下降趋势，随后逐渐上升。冰箱低温处理sod(超氧歧化酶)活性一直升高，4d以前升高较慢，4d后升高较快，而其他处理sod活性先不同程度下降，4d后逐渐上升，但活性均低于冰箱贮藏。

总结：

从白花败酱的表型来看，冰箱和泡沫箱贮藏能较好的维持白花败酱的外观品质，基本未出现褐化萎蔫现象。从生理生化指标也可以看出，低温和泡沫箱密封有利于保持白花败酱的水分和叶绿素不被降解。冰箱低温条件下，叶片蒸腾作用减弱，叶绿素降解减慢，泡沫箱密封贮藏能保持较高的湿度和较黑暗的环境，能有效降低蒸腾作用和叶绿素的降解，相反，高温会加速白花败酱的新陈代谢和蒸腾作用，加速营养物质和水分损失。因此，冰箱和泡沫箱贮藏外观品质要比纸箱和自然摊放要好。

自由基学说认为衰老过程即活性氧代谢失调与累积的过程。植物在自身新陈代谢过程中以及外界逆境胁迫下,体内会产生大量活性氧，这类物质在植物体内如不能及时清除,将加速植物衰老。植物体内的抗氧化酶能有效清除自由基，延长植物保鲜期。本试验中冰箱贮藏的cat活性明显低于其他三个处理，这是因为cat为诱导酶，低温抑制了呼吸速率，产生的过氧化氢少，从而也抑制了酶的活性；冰箱低温处理sod(超氧歧化酶)活性始终高于其他处理，说明在低温贮藏下能更好的清除活性氧自由基，减缓衰老。在贮藏前期，cat和sod呈现下降趋势，这与刘程惠等对西兰花贮藏过程中cat和sod活性变化研究结果相似。

白花败酱的贮藏，既要考虑贮藏效果，又要考虑贮藏成本，低温虽然贮藏效果好，但是大量白花败酱贮藏要建冷库，同时要耗电维持冷库，因此如果大量长时间贮藏可以采取低温，如果是短时间贮藏建议采用泡沫箱或纸箱，以节约贮藏成本。

本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。