本发明涉及一种芍药不同外植体愈伤组织诱导方法。
背景技术：
芍药(paeonialactiflorapall.)为芍药科(paeoniaceae)芍药属(paeonia)多年生宿根草本植物，在我国分布于江苏、东北、华北、陕西及甘肃南部一带。芍药是我国的传统名花，被人们誉为“花仙”和“花相”，又被称为“五月花神”。
芍药的繁殖方法主要以分株法为主，这种传统的繁殖方法具有周期长、效率低、繁殖系数低等缺点，尚为形成健全的产业生产机制，很难满足市场的需求。且芍药组织培养中仍存在的褐化死亡率高、污染现象严重等问题阻碍了其研究发展的进度。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种芍药不同外植体愈伤组织诱导方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明的芍药愈伤组织诱导方法，包括步骤：
在3月中旬至4月中旬，剪取芍药幼嫩外植体，洗净后装入烧杯盖上纱布，用流水冲洗，置于naclo溶液中消毒，用无菌水洗净，放入酒精中消毒，无菌水冲洗干净后，吸干外植体表面水分，接种至ms培养基中，培养室条件为：温度22℃，暗处理。
由上述本发明提供的技术方案可以看出，本发明实施提供的芍药愈伤组织诱导的方法，为之后的芍药愈伤组织分化与植株的驯化奠定良好基础，且操作简单、成本低廉，有着良好的市场前景。能为芍药的育种和生长提供良好的帮助。
具体实施方式
下面将对本发明实施例作进一步地详细描述。本发明实施例中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
本发明的芍药愈伤组织诱导方法，其较佳的具体实施方式是：
包括步骤：
在3月中旬至4月中旬，剪取芍药幼嫩外植体，洗净后装入烧杯盖上纱布，用流水冲洗，置于naclo溶液中消毒，用无菌水洗净，放入酒精中消毒，无菌水冲洗干净后，吸干外植体表面水分，接种至ms培养基中，培养室条件为：温度22℃，暗处理。上述流水冲洗时间为2h。
上述消毒用naclo浓度为2％，消毒时间为20min。
上述消毒用酒精浓度为70％，消毒时间为8-10s。
上述两次用无菌水冲洗次数为3-5遍。
所述ms培养基中还含有以下任一种或多种添加成分：6-ba、naa、2,4-d等物质。
茎段用所述ms培养基添加成分为ms+6-ba1mg/l+2,4-d2.0mg/l。
叶片用所述ms培养基添加成分为ms+6-ba1mg/l+naa1.0mg/l。
花药用所述ms培养基添加成分为ms+6-ba0.5mg/l+2,4-d1.5mg/l。
花瓣用所述ms培养基添加成分为ms+6-ba0.5mg/l+2,4-d2.0mg/l
本发明的芍药愈伤组织诱导的方法，为之后的芍药愈伤组织分化与植株的驯化奠定良好基础，且操作简单、成本低廉，有良好的市场前景，能为芍药组织培养奠定基础
具体实施：
取材时间：2018年3月中下旬至4月中上旬。
选材：芍药幼嫩外植体。
外植体灭菌及接种：
将芍药幼嫩的外植体用清水冲洗干净，再用流水2h处理，置于浓度为5％的浸泡，消毒时间为20min。
将浸泡于2％naclo溶液中的芍药外植体放入超净台中，无菌水冲洗3-5遍后，用浓度为70％的酒精浸泡8-10s，后用无菌水冲洗3-5遍。
外植体置于无菌滤纸上吸干水分，茎段切去边缘部分以及中间对切，叶片与花瓣切去边缘部分，尽可能扩大外植体与培养基的接触面积，接种于培养基上，注意避免交叉感染，启动培养。
愈伤组织诱导：
培养基配方：优选茎段培养基为ms+6-ba1mg/l+2,4-d2mg/l，叶片培养基为ms+6-ba1mg/l+naa1mg/l，花药与花瓣培养基为ms+6-ba0.5mg/l+2,4-d1.5mg/l，ph为5.8。
培养条件：温度22℃，暗处理。
结果与分析：
自由组合不同浓度的6-ba、naa、2,4-d等物质，以及每一组合浓度自由接种上适量的芍药外植体部分，茎段、叶片、花药、花瓣。
表1不同培养基配方对不同外植体诱导率的影响
试验结果表明(表1)，根据诱导率，优选茎段ms培养基为ms+6-ba1mg/l+naa2mg/l，叶片ms培养基为ms+6-ba1mg/l+naa1mg/l，花药培养基为ms+6-ba0.5mg/l+2,4-d1.5mg/l，花瓣培养基ms+6-ba0.5mg/l+2,4-d2.0mg/l。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。