本发明涉及芦竹培育技术领域，尤其涉及三倍体芦竹的培育方法。
背景技术：
芦竹(arundodonax)禾本科、芦竹属多年生植物，具发达根状茎，秆粗大直立、坚韧，具多数节，常生分枝，可用于饲料、乙醇、造纸、发电和环境修复等多种行业。
现有芦竹繁殖有播种、分株、扦插等方法，一般以分株方法为主；通常是早春时用快揪沿植物四周切成有4-5个芽一丛，然后移植；这种方法繁殖速度慢、种苗易带毒，且劳动强度大、运输不便，造林成本高，难以在短时间内解决种苗供应紧缺的问题，不利于芦竹的产业化生产。相对于传统的方法，利用组培技术对芦竹进行繁殖，能够短时间内获得大量整齐一致的无病毒种苗，种苗生长优势明显，是芦竹种苗产业化繁育的一种有效途径。
多倍体育种是植物新品种培育的重要手段，多倍体育种起源于20世纪初，现在已广泛应用于植物新品种的培育中。多倍体由于基因组倍性的增加，往往表现出形态上的巨大性和抗性增强等特点。其中三倍体还具有不育特点，即可作为永久杂种，也有利于商业保护；通过基因组三倍化，可以获得具有多倍体和杂交种双重优势的三倍体，其优势表现出具有巨大性和不可替代性。
技术实现要素：
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了三倍体芦竹的培育方法，所得的芦竹具有很强的抗逆性。
本发明提出的三倍体芦竹的培育方法，方法步骤如下：
s1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；
s2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2ms+naa0.1-0.15mg/l+蔗糖6-8g/l+椰乳5-10g/l+萘乙酸0.05-0.1mg/l+海泡石0.5-1.5g/l+活性炭0.8-2.0g/l；
s3：二倍体细胞的融合分化：采用s2所得的原球茎制备原生质体，并进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：ms-6-ba(2-4mg/l)+iba(0.1-0.3mg/l)+naa0.1-0.15mg/l+蔗糖6-8g/l+椰乳5-10g/l+2、4-d(1-3mg/l)；
s4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；
s5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；
s6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。
优选地，所述s2中光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为10-14h/d，光照强度2000-3000lux，色温4500-5500k。
优选地，所述s2中培养基的ph为5-6。
优选地，所述s3中原生质体的制备方法为酶解法。
优选地，所述s3中细胞融合的方法为采用细胞融合仪或聚乙醇peg方法进行融合。
优选地，所述s3中四倍体愈伤组织的检测方法为常规染色镜检办法。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明先对二倍体芦竹的原生质体进行细胞融合，然后再用培养基培养成愈伤组织，然后进行诱导分化得到四倍体芦竹幼苗，再把二倍体芦竹作为父本、四倍体芦竹作为母本进行有性杂交，从而获得三倍体芦竹，所得的三倍体芦竹具有很强的抗逆性，且具有多倍体和杂交种的双重优势。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例1
本发明提出的三倍体芦竹的培育方法，方法步骤如下：
s1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；
s2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为10h/d，光照强度2000lux，色温4500k，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2ms+naa0.1mg/l+蔗糖6g/l+椰乳5g/l+萘乙酸0.05mg/l+海泡石0.5g/l+活性炭0.8g/l，培养基的ph为5；
s3：二倍体细胞的融合分化：对s2所得的原球茎采用酶解法制备原生质体，并通过细胞融合仪或聚乙醇peg方法进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并通过常规染色镜检办法对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：ms-6-ba(2mg/l)+iba(0.1mg/l)+naa0.1mg/l+蔗糖6g/l+椰乳5g/l+2、4-d(1mg/l)；
s4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；
s5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；
s6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。
实施例2
s1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；
s2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为14h/d，光照强度3000lux，色温5500k，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2ms+naa0.15mg/l+蔗糖8g/l+椰乳10g/l+萘乙酸0.1mg/l+海泡石1.5g/l+活性炭2.0g/l，培养基的ph为6；
s3：二倍体细胞的融合分化：对s2所得的原球茎采用酶解法制备原生质体，并通过细胞融合仪或聚乙醇peg方法进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并通过常规染色镜检办法对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：ms-6-ba(4mg/l)+iba(0.3mg/l)+naa0.15mg/l+蔗糖8g/l+椰乳10g/l+2、4-d(3mg/l)；
s4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；
s5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；
s6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。
实施例3
s1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；
s2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为12h/d，光照强度2500lux，色温5000k，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2ms+naa0.12mg/l+蔗糖7g/l+椰乳8g/l+萘乙酸0.08mg/l+海泡石1.0g/l+活性炭1.4g/l，培养基的ph为5.5；
s3：二倍体细胞的融合分化：对s2所得的原球茎采用酶解法制备原生质体，并通过细胞融合仪或聚乙醇peg方法进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并通过常规染色镜检办法对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：ms-6-ba(2-4mg/l)+iba(0.1-0.3mg/l)+naa0.1-0.15mg/l+蔗糖6-8g/l+椰乳5-10g/l+2、4-d(1-3mg/l)；
s4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；
s5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；
s6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。
实施例4
s1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；
s2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为10h/d，光照强度3000lux，色温5500k，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2ms+naa0.1mg/l+蔗糖8g/l+椰乳10g/l+萘乙酸0.05mg/l+海泡石0.5g/l+活性炭1.0g/l，培养基的ph为5；
s3：二倍体细胞的融合分化：对s2所得的原球茎采用酶解法制备原生质体，并通过细胞融合仪或聚乙醇peg方法进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并通过常规染色镜检办法对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：ms-6-ba(2mg/l)+iba(0.2mg/l)+naa0.15mg/l+蔗糖6g/l+椰乳10g/l+2、4-d(1mg/l)；
s4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；
s5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；
s6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。
实施例5
s1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；
s2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为12h/d，光照强度3000lux，色温4500k，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2ms+naa0.15mg/l+蔗糖6g/l+椰乳10g/l+萘乙酸0.1mg/l+海泡石0.5g/l+活性炭1.5g/l，培养基的ph为5；
s3：二倍体细胞的融合分化：对s2所得的原球茎采用酶解法制备原生质体，并通过细胞融合仪或聚乙醇peg方法进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并通过常规染色镜检办法对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：ms-6-ba(4mg/l)+iba(0.2mg/l)+naa0.1mg/l+蔗糖8g/l+椰乳5g/l+2、4-d(2mg/l)；
s4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；
s5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；
s6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。
移栽试验
以实施例3作为移栽对象，在田间移栽400株三倍体芦竹幼苗，之后按常规管理方式进行管理，移栽成活率达98.75％。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。