本发明涉及一种尾巨桉树皮乙醇提取物的制备方法及其应用，属于杀螺剂
技术领域：
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背景技术：
：福寿螺原产于南美洲，是一种严重危害农业生产及人类健康的世界性恶性外来入侵物种，也是我国环保部公布的首批入侵我国的16种“危害最大的外来物种”之一。福寿螺适应环境快、生存能力强、繁殖周期短，由于缺乏有效的竞争物种和天敌，迅速发展成为东南亚各国严重危害水稻生长的有害生物。在我国，受到福寿螺入侵灾害影响的，包括我国长江以南的十几个省区，给当地的水稻和水生作物种植造成了巨大经济损失和生态灾害；同时，福寿螺还是能引起人类嗜酸性脑膜炎的广州管圆线虫的中间宿主，严重威胁着人类健康。目前化学药剂是最主要的防治福寿螺措施，但存在很多局限性：(1)当前杀螺剂的选择极少。氯硝柳胺是1972年以来who唯一推荐使用的灭螺剂。目前我国登记用于防螺的药剂仅有杀螺胺类及四聚乙醛两种。(2)毒性大、易污染环境。氯硝柳胺对鱼类、蚌等水生生物毒性极大，致死浓度与杀螺浓度相近；百螺敌对泥鳅有剧毒；五氯酚钠对人体有致癌、生殖发育毒性和免疫毒性。(3)氯硝柳胺等化学药剂还存在易产生抗药性，价格昂贵等问题，使福寿螺防治始终是困扰人们的巨大难题。因此，寻找对环境安全、高效、低毒的天然源杀螺药物势在必行。桉树属于桃金娘科myrtaceae桉属eucalyptus植物，是全球人工林的主要树种之一，主要用于木材加工和纸浆生产。广西是我国桉树种植面积最大的省，尾巨桉(eucalyptusurophylla×eucalyptusgrandis)是广西目前主要种植的桉树树种。截止2015年，广西桉树人工林总面积近200万hm2，平均生产木材为2500万m3/年。桉树皮资源非常巨大，根据桉树皮产量为原木产量的11％计算，年产树皮275万m3；一个年生产力为5.0×105t的纸浆厂，每年将产生约1.0×105t的树皮废料。然而，目前桉树皮作为桉树加工业的主要剩余物，大部分被用作燃料焚烧或丢弃，非常缺乏桉树皮高价值的开发利用，这不但增加了环境负担，而且造成了树皮资源的过渡浪费。桉树皮是多种生物活性物质(三萜酸、酚类、黄酮和单萜等)的良好来源，目前国内外对桉树树皮生物活性研究主要集中在抗氧化和抑菌活性等方面，有关其杀螺活性研究极少有报道，尤其是尾巨桉树皮对福寿螺防治效果至今尚未见报道。因此，结合广西桉树种植优势，利用桉树皮废物开发低成本、高效、低毒的植物源杀螺剂，具有重要的研究意义和良好的应用前景。技术实现要素：本发明的目的之一，是提供一种尾巨桉树皮乙醇提取物的制备方法。本发明是以尾巨桉树皮废物为原料提取制备的，来源于植物，毒性低，来源丰富，易采集，成本低，制备工艺简单，对环境安全无污染，有利于工业化生产，具有极大的开发潜力。本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种尾巨桉树皮乙醇提取物的制备方法，包括如下步骤：取新鲜剥落的尾巨桉树皮，置于通风阴凉处阴干，粉碎，按料液比为1g:(15-40)ml的比例，加入40％(v/v)-95％(v/v)乙醇水溶液，超声波提取，抽滤后收集滤液，减压浓缩得到浸膏，再干燥、过筛后，即得到所述尾巨桉树皮乙醇提取物。在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。进一步，所述阴干后的水分含量为<5wt％。采用上述进一步的有益效果是：利于尾巨桉树皮的粉碎。进一步，所述粉碎的粒径为20目-60目。采用上述进一步的有益效果是：让原料与提取溶剂充分接触，加速尾巨桉树皮中杀螺成分的浸出或溶出，并且原料粒径越小越好。进一步，所述超声波提取的温度为40℃-60℃，时间为1h-3h，功率为500w。采用上述进一步的有益效果是：破坏植物细胞，使溶剂渗透到植物细胞中，缩短提取时间。进一步，所述抽滤采用布氏漏斗。采用上述进一步的有益效果是：使尾巨桉树皮和乙醇滤液分离，达到固液分离的目的。进一步，所述减压浓缩采用旋转蒸发仪。采用上述进一步的有益效果是：可以快速去除尾巨桉树皮乙醇提取物里的乙醇。进一步，所干燥的温度为40℃-60℃，时间为2h-6h，所述干燥采用的设备为恒温鼓风干燥箱。采用上述进一步的有益效果是：使尾巨桉树皮乙醇提取物里的水分汽化，得到干燥的块状或颗粒状尾巨桉树皮乙醇提取物。进一步，所述过筛的孔径为80目-120目。采用上述进一步的有益效果是：使上述块状或颗粒状的尾巨桉树皮乙醇提取物粉碎成粉末状,便于应用时溶解和稀释。进一步，所述尾巨桉树皮乙醇提取物为深红色粉末。本发明的目的之二，是提供一种杀螺剂。本发明的杀螺剂包括上述制备方法制备得到的尾巨桉树皮乙醇提取物，可以有效杀灭福寿螺，显著抑制福寿螺的离水上爬行为，在农业应用中开发潜力巨大。本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种杀螺剂，包括上述制备方法得到的尾巨桉树皮乙醇提取物。本发明的目的之三，是提供一种杀螺剂的制备方法。本发明的杀螺剂由上述尾巨桉树皮乙醇提取物制备得到，制备方法简单，市场前景广阔，适合规模化生产。本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种杀螺剂的制备方法，包括如下步骤：取120mg上述制备方法制备得到的尾巨桉树皮乙醇提取物，用10ml-15ml溶剂溶解后，加水至1200ml，即得到所述杀螺剂。在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。进一步，所述溶剂为甲醇、乙醇、丙酮和氯仿中的一种或多种的混合物。采用上述进一步的有益效果是：溶剂来源丰富，可以有效溶解尾巨桉树皮乙醇提取物。且本申请的发明人经过大量的试验发现，当杀螺剂中尾巨桉树皮乙醇提取物的浓度为100mg/l浓度，溶剂为甲醇时，浸杀福寿螺72h后的杀螺率可达到100％。本发明的有益效果：(1)本发明是以尾巨桉树皮废物为原料提取制备的，来源于植物，毒性低，来源丰富，易采集，成本低，制备工艺简单，对环境安全无污染，有利于工业化生产，具有极大的开发潜力。(2)本发明的杀螺剂包括上述制备方法制备得到的尾巨桉树皮乙醇提取物，可以有效杀灭福寿螺，显著抑制福寿螺的离水上爬行为，在农业应用中开发潜力巨大。(3)本发明的杀螺剂由上述尾巨桉树皮乙醇提取物制备得到，制备方法简单，市场前景广阔，适合规模化生产。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例1本实施例的尾巨桉树皮乙醇提取物的制备方法，括如下步骤：取新鲜剥落的尾巨桉树皮，置于通风阴凉处阴干至水分含量为4wt％，粉碎至20目。称取上述尾巨桉树皮粉末100g,按料液比为1g:15ml的比例，加入40％(v/v)乙醇水溶液1.5l。于40℃，功率为500w，超声波提取1h。采用布氏漏斗抽滤后，收集滤液。采用旋转蒸发仪减压浓缩得到浸膏，再采用恒温鼓风干燥箱，于40℃干燥6h，过80目筛后，即得到2.21g深红色粉末的所述尾巨桉树皮乙醇提取物。本实施例的杀螺剂，包括上述制备方法得到的尾巨桉树皮乙醇提取物。上述杀螺剂的制备方法，包括如下步骤：取120mg上述制备方法制备得到的尾巨桉树皮乙醇提取物，用10ml乙醇溶解后，加水至1200ml，即得到所述杀螺剂。实施例2本实施例的尾巨桉树皮乙醇提取物的制备方法，括如下步骤：取新鲜剥落的尾巨桉树皮，置于通风阴凉处阴干至水分含量为3wt％，粉碎至60目。称取上述尾巨桉树皮粉末100g,按料液比为1g:40ml的比例，加入60％(v/v)乙醇水溶液4l。于50℃，功率为500w，超声波提取2.5h。采用布氏漏斗抽滤后，收集滤液，采用旋转蒸发仪减压浓缩得到浸膏，再采用恒温鼓风干燥箱，于50℃干燥3.5h，过120目筛后，即得到6.59g深红色粉末的所述尾巨桉树皮乙醇提取物。本实施例的杀螺剂，包括上述制备方法得到的尾巨桉树皮乙醇提取物。上述杀螺剂的制备方法，包括如下步骤：取120mg上述制备方法制备得到的尾巨桉树皮乙醇提取物，用12ml甲醇溶解后，加水至1200ml，即得到所述杀螺剂。实施例3本实施例的尾巨桉树皮乙醇提取物的制备方法，括如下步骤：取新鲜剥落的尾巨桉树皮，置于通风阴凉处阴干至水分含量为3wt％，粉碎至20目。称取上述尾巨桉树皮粉末100g,按料液比为1g:40ml的比例，加入80％(v/v)乙醇水溶液4l。于60℃，功率为500w，超声波提取3h。采用布氏漏斗抽滤后，收集滤液，采用旋转蒸发仪减压浓缩得到浸膏，再采用恒温鼓风干燥箱，于60℃干燥2h，过120目筛后，即得到2.99g深红色粉末的所述尾巨桉树皮乙醇提取物。本实施例的杀螺剂，包括上述制备方法得到的尾巨桉树皮乙醇提取物。上述杀螺剂的制备方法，包括如下步骤：取120mg上述制备方法制备得到的尾巨桉树皮乙醇提取物，用15ml丙酮溶解后，加水至1200ml，即得到所述杀螺剂。实施例4本实施例的尾巨桉树皮乙醇提取物的制备方法，括如下步骤：取新鲜剥落的尾巨桉树皮，置于通风阴凉处阴干至水分含量为3wt％，粉碎至20目。称取上述尾巨桉树皮粉末100g，按料液比为1g:15ml的比例，加入95％(v/v)乙醇水溶液1.5l。于60℃，功率为500w，超声波提取2h。采用布氏漏斗抽滤后，收集滤液，采用旋转蒸发仪减压浓缩得到浸膏，再采用恒温鼓风干燥箱，于60℃干燥2h，过120目筛后，即得到1.14g深红色粉末的所述尾巨桉树皮乙醇提取物。本实施例的杀螺剂，包括上述制备方法得到的尾巨桉树皮乙醇提取物。上述杀螺剂的制备方法，包括如下步骤：取120mg上述制备方法制备得到的尾巨桉树皮乙醇提取物，用11ml氯仿溶解后，加水至1200ml，即得到所述杀螺剂。实施例5本实施例的尾巨桉树皮乙醇提取物的制备方法，括如下步骤：取新鲜剥落的尾巨桉树皮，置于通风阴凉处阴干至水分含量为3wt％，粉碎至20目。称取上述尾巨桉树皮粉末100g，按料液比为1g:40ml的比例，加入95％(v/v)乙醇水溶液4l。于60℃，功率为500w，超声波提取2h。采用布氏漏斗抽滤后，收集滤液，采用旋转蒸发仪减压浓缩得到浸膏，再采用恒温鼓风干燥箱，于60℃干燥2h，过120目筛后，即得到1.59g深红色粉末的所述尾巨桉树皮乙醇提取物。本实施例的杀螺剂，包括上述制备方法得到的尾巨桉树皮乙醇提取物。上述杀螺剂的制备方法，包括如下步骤：取120mg上述制备方法制备得到的尾巨桉树皮乙醇提取物，用12ml甲醇、乙醇、丙酮和氯仿的混合溶剂溶解，混合溶剂包含甲醇5ml、乙醇2ml、丙酮3ml和氯仿2ml，然后加水至1200ml，即得到所述杀螺剂。对比例1跟实施例2不同的是，本对比例1的原料为尾巨桉自然脱落树皮，其余都相同，得到尾巨桉自然脱落树皮乙醇提取物。对比例2跟实施例2不同的是，本对比例2的原料为窿缘桉树皮，其余都相同，得到窿缘桉树皮乙醇提取物。对比例3跟实施例2不同的是，本对比例3的原料为尾巨桉叶，其余都相同，得到尾巨桉叶乙醇提取物。对比例4跟实施例2不同的是，本对比例4的原料为尾巨桉叶，不是得到尾巨桉树皮乙醇提取物，而是得到尾巨桉叶油。具体是：取尾巨桉树叶，置于通风阴凉处阴干至水分含量为3wt％，粉碎至60目。称取上述尾巨桉树叶粉末100g,按料液比为1g:40ml的比例，加入60％(v/v)乙醇水溶液4l，浸泡5h，放入蒸馏容器中，加热至沸腾，保持微沸腾状态下提取5h收集冷凝馏出液，即得到尾巨桉叶油。实验例采用who的药剂浸泡法测定不同杀螺剂对福寿螺的杀螺活性。杀螺剂溶液的配置：分别称取120mg实施例2得到的尾巨桉树皮乙醇提取物、对比例1得到的尾巨桉自然脱落树皮乙醇提取物、对比例2得到的窿缘桉树皮乙醇提取物、对比例3得到的尾巨桉叶乙醇提取物和对比例4得到的尾巨桉叶油，分别用12ml甲醇溶解，加入去氯水至1200ml，分别配成100mg/l的杀螺剂溶液。以相同含量的甲醇水溶液做空白对照，同时以50mg/l茶皂素(含量为60％)作为对照组。用烧杯分别盛放200ml浓度为100mg/l的上述杀螺剂药液，每杯放入20头幼螺，杯口用纱布封口以防其逃逸,每个样品做三次平行试验。实验开始后，连续观察和记录24h内福寿螺的离水上爬情况。浸泡72h后取出福寿螺，及时用去氯水冲洗，转移到盛有去氯水的杯中，24h后检查，针刺法检测不动的螺视为死亡，按下式计算福寿螺的校正死亡率。校正死亡率(％)＝[(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)]×100％具体结果如表1所示。表1不同杀螺剂对福寿螺的杀螺效果由表1结果可见，在100mg/l浓度时，尾巨桉树皮乙醇提取物制成的杀螺剂浸杀福寿螺72h后的杀螺率可达到100％，杀螺效果优于同浓度下的尾巨桉自然脱落树皮乙醇提取物(81.03％)、窿缘桉树皮乙醇提取物(93.10％)、尾巨桉叶乙醇提取物(31.03％)和尾巨桉叶油(81.03％)；同时，100mg/l的尾巨桉树皮乙醇提取物能完全抑制福寿螺离水上爬行为，抑制效果优于同浓度下的其它杀螺剂及对照药剂茶皂素，表明尾巨桉树皮提取物具有显著的杀螺活性，可用作防治福寿螺的植物源杀螺剂。分别以100mg/l的尾巨桉树皮提取物浸泡福寿螺，另设去氯水为空白对照，20mg/l茶皂素水溶液为药剂对照。分别于40h随机取5只活福寿螺，用去氯水洗净，去壳取出福寿螺的头足和肝脏部分，参照试剂盒说明书分别测定福寿螺头足和肝脏中的ldh(乳酸脱氢酶)、akp(碱性磷酸酶)、alt/gpt(谷丙转氨酶)、ast/got(谷草转氨酶)酶活性。具体结果如表2所示。表2尾巨桉树皮乙醇提取物对福寿螺头足酶活性的影响(n＝5)尾巨桉树皮乙醇提取物对福寿螺肝脏酶活性的影响，具体结果如表3所示。表3尾巨桉树皮乙醇提取物对福寿螺肝脏酶活性的影响(n＝5)由表2、表3可见，与空白组相比，用本发明提供的尾巨桉树皮乙醇提取物制成的杀螺剂处理后的福寿螺头足中的ldh、akp和ast/got以及福寿螺肝脏中的ldh、alt/gpt和ast/got酶活性显著降低，说明尾巨桉树皮乙醇提取物扰乱了福寿螺的正常能量代谢和蛋白质代谢，从而抑制了能量代谢和蛋白质代谢相关酶的活性。实施例1-5得到的尾巨桉树皮乙醇提取物的提取率及总三萜含量，如表4所示。表4实施例1-5得到的尾巨桉树皮的提取率及总三萜含量实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5提取率/％2.216.592.991.141.59总三萜含量/％9.3011.8110.405.075.61由表4可见，实施例2的尾巨桉树皮提取物制备方法能明显提高尾巨桉树皮提取物的提取率和总三萜含量，提取效果最优。以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12