本发明属于农业植物保护技术领域，具体涉及一种木薯对根腐病的大田抗病性鉴定方法。
背景技术：
木薯(manihotesculentacrantz)，为大戟科(euphorbiaceae)木薯属灌木状多年生作物，其块根肉质，富含淀粉，是世界三大薯类(木薯、马铃薯、甘薯)之一。
木薯对根腐病是严重影响木薯产量和品质的重要病害之一，该病害分布于世界各个种植区，可由一种或多种病原物引发木薯对根腐病。据报道，引起该病害的主要病原有botryodiplodiatheobromae,nattrassiamagniferae和fusariumspp，在我国木薯产区根腐病病原由棕榈疫霉(phytophthorapalmivora)引起，能造成30％的产量损失，在印度tamilnadu地区造成50％的产量损失。郭涵等报道了杀毒矾、氟吗·乙铝和甲霜·霜霉威等对木薯对根腐病有较好的防治作用。由于有些木薯种植于荒山荒坡，化学防治加大了人工劳动强度和防治成本，增加农药残留和病害的抗药性，因此，木薯抗病品种的选育和推广是解决木薯对根腐病危害的最好方法，可有效提高木薯产业发展的经济效益。在木薯抗病品种的选育过程中，准确、快速的筛选出抗病品种尤为重要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种木薯对根腐病的大田抗病性鉴定方法，本发明的鉴定方法能够准确、快速的筛选出抗病木薯品种。
为了实现上述目的，本发明提供了以下技术方案；
本发明提供了一种木薯对根腐病的大田抗病性鉴定方法，包括以下步骤：
1)将根腐病病原菌接种于pda培养基培养7～10d，得到长有根腐病病原菌的培养基；
2)整地，种植待鉴定木薯种茎，种植4～6个月，生长出木薯块根；
3)移除步骤2)所述木薯块根的表面覆土，选取长在木薯树上的完整木薯块根进行打孔，将步骤1)所述长有根腐病病原菌的培养基接种于木薯块根的打孔处，在接种好的木薯块根上套上保鲜袋，覆盖移除的表面覆土；
4)接种后7～10d，扒开表面覆土取出接种后的薯块，从接种处横切开木薯块根，根据发病面积采用木薯对根腐病分级标准和抗性评价标准进行抗感鉴定；
所述步骤1)和步骤2)之间没有时间顺序限制。
优选的，步骤1)中所述根腐病病原菌包括分离自木薯根腐病发病块根的病原菌。
优选的，步骤1)中所述根腐病病原菌包括疫霉属的棕榈疫霉(phytophthorapalmivora)。
优选的，步骤2)中所述整地包括以下步骤：整理墒子，铺上黑色薄膜；所述墒子的宽度为1m，高度为0.4～0.45m。
优选的，步骤2)中所述木薯种植在墒子中间，株距为0.8～1.2m。
优选的，在步骤3)所述接种后，还包括用潮湿的无菌脱脂棉对接种处进行保湿。
优选的，步骤3)中所述打孔的数量为2～3个，两个孔之间的距离为4～6cm。
优选的，步骤3)中所述接种的时间为8月中下旬，所述接种的天气为晴天，白天温度28℃以上。
本发明的有益效果：本发明提供了一种木薯对根腐病的大田抗病性鉴定方法，包括以下步骤：1)将根腐病病原菌接种于pda培养基培养7～10d，得到长有根腐病病原菌的培养基；2)整地，种植待鉴定木薯种茎，生长出木薯块根；3)对木薯块根进行打孔，将步骤1)所述长有根腐病病原菌的培养基接种于木薯块根的打孔处；4)取出接种后的薯块，进行抗感鉴定。1棵木薯树会接有5～20包数量不等的木薯块根，选取其中的1包木薯块根进行接种，并采用保鲜袋对接种后的木薯块根进行包裹，既能够提供病原菌发病需要的温度和湿度，又能够保证土壤不被病原菌污染；调查时也只是把土扒开把接种后的木薯块根取出进行抗感鉴定，对木薯树本身及产量不会造成影响。接种病原菌的木薯块根调查完后集中销毁，病原菌也不会传到土里而污染环境。本发明提供的木薯对根腐病的抗病性鉴定方法能够准确、快速地筛选出抗病品种，且该方法操作简单、易学、对设备要求不高，对木薯产量不会造成影响，不会对木薯地块造成污染。
具体实施方式
本发明提供了一种木薯对根腐病的大田抗病性鉴定方法，包括以下步骤：
1)将根腐病病原菌接种于pda培养基培养7～10d，得到长有根腐病病原菌的培养基；
2)整地，种植待鉴定木薯种茎，种植4～6个月，生长出木薯块根；
3)移除步骤2)所述木薯块根的表面覆土，选取长在木薯树上的完整木薯块根进行打孔，将步骤1)所述长有根腐病病原菌的培养基接种于木薯块根的打孔处，在木薯块根上套上保鲜袋，覆盖移除的表面覆土；
4)接种后7～10d，扒开表面覆土取出接种后的薯块，从接种处横切开木薯块根，根据发病面积采用木薯对根腐病分级标准和抗性评价标准进行抗感鉴定；
所述步骤1)和步骤2)之间没有时间顺序限制。
本发明首先将根腐病病原菌接种于pda培养基培养7～10d，得到长有根腐病病原菌的培养基；所述培养温度优选为25℃～28℃。本发明中，所述根腐病病原菌优选的包括疫霉属的棕榈疫霉(phytophthorapalmivora)；所述根腐病病原菌优选的包括分离自木薯根腐病发病块根的病原菌，所述木薯根腐病发病块根来源于田间；所述分离的方法优选为真菌分离方法。
本发明进行整地，种植待鉴定木薯种茎，种植4～6个月，生长出木薯块根；所述整地优选的包括以下步骤：整理墒子，铺上黑色薄膜；所述墒子的宽度优选为1m，高度优选为0.4～0.45m，选择这样宽和高的墒子便于接种时扒开木薯块根上的覆土；所述木薯优选的种植在墒子中间，株距优选为0.8～1.2m，更优选为1m；所述种植的时间优选为2月份；所述木薯种茎优选的按斜插的方式种植；本发明具体实施过程中，种植后期按正常管理木薯，如果土干，还包括浇水；所述正常管理包括追肥、抹芽和病虫害防治；所述黑色薄膜的作用包括种植前期保水，种植后期雨季控草。
生长出木薯块根和得到长有根腐病病原菌的培养基后，本发明移除所述木薯块根的表面覆土，选取长在木薯树上的完整木薯块根进行打孔，将所述长有根腐病病原菌的培养基接种于木薯块根的打孔处，在木薯块根上套上保鲜袋，覆盖移除的表面覆土；所述接种后，优选的还包括用潮湿的无菌脱脂棉对接种处进行保湿，本发明具体实施过程中，将无菌脱脂棉覆盖在接过菌的打孔处，在无菌脱脂棉上喷无菌水至潮湿即可；所述打孔的数量优选为2～3个，两个孔之间的距离优选为4～6cm，更优选为5cm；所述孔的直径优选为6mm；所述孔的方向是沿木薯纵向成一条线排列；所述接种的时间优选为8月中下旬，所述接种的天气优选为晴天，白天温度优选为28℃以上，这一条件能够为病原菌发病提供适合的温度条件；每个待鉴定木薯品种的接种数量优选为3～5棵，每棵木薯树中分别选取1包木薯块根进行打孔接种。
本发明将保鲜袋套在木薯块根上，既提供病原菌发病需要的温度和湿度又能够保证土壤不被病原菌污染；本发明对所述保鲜袋没有特殊要求，常规市售保鲜袋即可。
本发明在接种后7～10d，优选为8～9d，取出接种后的薯块，从接种处横切开木薯块根，根据发病面积采用木薯对根腐病分级标准和抗性评价标准进行抗感鉴定；本发明具体实施过程中，所述根腐病分级标准和抗性评价标准参考现有技术进行(参见【段春芳,等.32份木薯种质对疫霉根腐病的抗性评价和农艺性状分析[j].植物保护,2017,43(01):148-152】)。
本发明具体实施过程中，1棵木薯树会接有5～20包数量不等的木薯块根，选取其中的1包木薯块根进行接种，并采用保鲜袋对接种后的木薯块根进行包裹，既能够提供病原菌发病需要的温度和湿度，又能够保证土壤不被病原菌污染；调查时也只是把土扒开把接种后的木薯块根取出进行抗感鉴定，对木薯树本身及产量不会造成影响。接种病原菌的木薯块根调查完后集中销毁，病原菌也不会传到土里而污染环境。
下面结合实施例对本发明提供的一种木薯对根腐病的大田抗病性鉴定方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1一种木薯对根腐病的大田抗病性鉴定方法
对6个木薯品种的进行棕榈疫霉根腐病抗性鉴定试验，按如下步骤进行：
1)病原菌分离与培养准备：从田间采集发病薯块，用真菌分离方法分离出根腐病病原菌，在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(pda)上培养7天，备用；
2)地块整理：2月初，根据地形在田间整理好1.0m的宽，0.4～0.45m高的墒子，并铺上黑色薄膜备用；
3)参试木薯品种种植：将准备的华南5号、华南7号、华南8号、华南9号、华南11号、华南124等木薯品种的种茎按斜插的方式在墒子中间种下，株距为1.0m，浇水，后期按正常管理木薯，种植后到8月份即可接种；
4)接种鉴定：将木薯块根表面的土扒开，露出完整的没有损坏的木薯块根，把准备的一小块长有病原菌的培养基放到打好孔的木薯上，每1包木薯上纵向打2～3个孔用来接种，一个孔与一个孔之间距离可以视木薯长短而定，一般在5cm左右，每1包木薯上接种一个没有菌的pda培养基为对照，接种处用无菌脱脂棉盖上，并喷上无菌水保湿，最后用保鲜袋套在接种好的木薯块根上，然后把原来的土覆盖好套有保鲜袋的木薯块根，每品种3棵为3次重复；
5)调查评价：调查时单独取出接种的木薯块根，从接种处横切开木薯块根，根据发病面积，采用木薯根腐病分级标准和抗性评价标准对供试木薯品种进行抗感鉴定，参考现有技术进行(【段春芳,等.32份木薯种质对疫霉根腐病的抗性评价和农艺性状分析[j].植物保护,2017,43(01):148-152】)。
6)评价完后销毁木薯块根，防止病原菌传播。
木薯根腐病分级标准：
0级，发病面积占薯块横切面积的比例小于1/16；
1级，发病面积占薯块横切面积的比例大于等于1/16，小于1/8；
2级，发病面积占薯块横切面积的比例大于等于1/8，小于1/4；
3级，发病面积占薯块横切面积的比例大于等于1/4，小于1/2；
4级，发病面积占薯块横切面积的比例大于等于1/2，小于3/4；
5级：发病面积占薯块横切面积的比例大于等于3/4。
计算出病情指数，根据病情指数将木薯种质抗病性划分为5个等级，di≤20：高抗(hr)；20.1≤di≤40：抗病(r)；40.1≤di≤60：中感(ms)；60.1≤di≤80：感病(s)；80.1≤di：高感(hs)。
试验鉴定结果见表1：
表1木薯大田根腐病抗性鉴定结果
结论：从表1中看出，表中所鉴定的6个木薯品种中，华南11号木薯对棕榈疫霉根腐病的抗性级别为“高抗”；华南8号木薯对棕榈疫霉根腐病的抗性级别为“抗病”；华南124、华南5号和华南7号木薯对棕榈疫霉根腐病的抗性级别为“感病”；华南9号木薯对对棕榈疫霉根腐病的抗性级别为“高感”。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。