专利名称:一种升高葡萄白藜芦醇含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种升高葡萄叶、葡萄茎及葡萄果实中白藜芦醇含量的方法。
技术背景
白薬声醇(resveratrol :trans-3, 5,4' -trihydroxystilbene)是一禾中苗类化合物(stilbenes)。1992年Siemarm与Creasy首先证实葡萄酒中含有天然的反式白藜芦醇， 并且对于人的肝、皮肤、心脏及血液循环、脂代谢有着重要的调理药效。近些年来还发现白藜芦醇在抗炎、心血管保护、雌激素调节及抗肿瘤方面有特殊的功效，其药用价值受到人们的广泛关注。
白藜芦醇存在于一些药用植物和食用植物中，如决明、藜芦、虎杖、葡萄、花生。在白藜芦醇获取途径方面，选择合适的植物材料成为该领域热点问题。目前市售白藜芦醇的来源主要是从蓼科植物虎杖根茎中提取。譬如公开号为CN1321961C、CN101698634A、 CN1566349A、CN1341587A、CN101709024A的中国专利采用了从虎杖中提取白藜芦醇的方法。虎杖是一种较珍贵中药材，由于其资源正在遭受较为严重的破坏，目前市场价格偏高。 我国有大面积的葡萄种植，这使得利用葡萄资源获取白藜芦醇成为可能。譬如公开号为 CN101704729A中国专利采用了从葡萄籽材料中提取白藜芦醇的方法；公开号为CN1351985 的中国专利采用了从葡萄皮材料中提取白藜芦醇的方法；公开号为US2009019U94A1美国专利采用从葡萄茎材料中提取白藜芦醇的方法。李婷等人2009年在“葡萄不同组织部位白藜芦醇含量的比较”(甘肃农业大学学报，2009，44 :64-67) —文中测定了葡萄不同组织中白藜芦醇的含量，发现葡萄不同组织部位白藜芦醇含量由高到低的顺序为果梗、叶片 >果皮〉种籽〉叶柄。Park HJ 等人 2009 年在"Contents of trans-resveratrol in Korean grape cultivars，including “Kyoho””(J. Plant Biol.，2009，52 :319-324) 一文中测定了叶片、种子、果皮等部位白藜芦醇含量，发现叶片白藜芦醇含量最高。这说明葡萄叶片也可以作为白藜芦醇提取原料。
尽管葡萄各部位均发现白藜芦醇的存在。实际操作时往往因为葡萄叶片、果实等材料所含的白藜芦醇水平变化较大，难以保持稳定，影响这些材料作为白藜芦醇提取原料的优先地位。在正常情况下，新生葡萄叶的白藜芦醇含量保持在较低水平。Hart JH在1979、 1981 年发表的"Role of stilbene inresistance of wood to decay" (Phytopathology, 1979, 69 1138-1143)禾口"Role of phytostilbenes in decay and disease resistance” (phytopathology, 1981，19 :437-458)两篇文章以及 Sbaghi 等人 1995 年发 表"Development of methods using phytoalexin(resveratrol)assessmentas a selection criterion to screen grapevine in vitro cultures forresistance to grey mould(Botrytis cinerea) ”(Duphytica，1995,86 :41-47) —文中均提出当葡萄受到生物因素如自然衰老、病原菌侵染，或环境因素如高温、紫外照射、臭氧及二氧化碳等影响时，白藜芦醇含量会有明显增加，且较不稳定。由于这些生物及环境因素不可控，利用这些方法诱导葡萄白藜芦醇积累的方法在田间实现较为困难，难以保障经诱导材料在提取前白藜芦醇含量的稳定，甚至会影响到葡萄的产量及品质。因此选择稳定的诱导剂来升高葡萄叶片及其它组织中白藜芦醇含量成为研究的热点。
在通过各种化学诱导剂诱导葡萄白藜芦醇升高的操作中，诱导材料及处理方式的选择成为诱导的关键。譬如法国Adrian与Jeandet等人于1996年发表“hduction of phytoalexin(resveratrol)synthesis in grapevine leavestreated with Aluminum chloride” (J. Agric. Food Chem. , 1996,44 :1979-1981) —文中采用 7 月龄葡萄茎上距顶 4-15叶为材料，其特征在于对葡萄叶离体扦插入氯化铝水溶液中进行诱导处理，其操作对样本有严格要求，操作起来费时费力，无法实现大规模诱导；公开号为US006080701A美国专利采用氯化铝作为诱导剂主要成分通过在体处理方式使葡萄叶白藜芦醇含量升高的方法，其特征在于使用茎干注射，田间喷洒及叶片涂抹等方式进行诱导，其操作环节中茎干注射并未考虑到大田人工成本，喷洒或涂抹操作未考虑葡萄果实吸收残留铝等问题；亓桂梅与Greasy于2005年发表文章“乙磷铝和紫外线照射对葡萄叶片中芪类化合物的诱导作用”(中外葡萄与葡萄酒，2005，4 :12-16)，其特征在于采用葡萄特殊部位在体及离体叶片进行诱导剂涂抹及光线照射等诱导处理，其诱导所做操作涉及环节及因素较多，难以在田间生产中应用。
在诱导葡萄叶片积累白藜芦醇的操作中，选择合适的诱导剂是进行稳定诱导的关 。feffl Adrian 与 Jeandet 等人于 1996Induction ofphytoalexin (resveratrol) synthesis in grapevine leaves treated withAluminum chloride" (J. Agric. Food Chem. ,1996,44 :1979-1981) —文中采用酸性氯化铝离体处理方式使葡萄叶中白藜芦醇含量升高。其特征在于选择7-90mM浓度酸性氯化铝水溶液进行浸泡处理，处理最小时间为 9小时，诱导组白藜芦醇含量与叶鲜重比最高为300-400 μ g/g，当铝浓度大于90mM时叶片毒害现象严重，并且导致白藜芦醇含量降低；公开号为US006080701A美国专利采用氯化铝作为诱导剂主要成分通过在体处理方式使葡萄叶白藜芦醇含量升高的方法，其特征在于处理剂中含氯化铝质量百分比浓度为0. 3-4%，每公顷使用0. 1-100公斤诱导剂，诱导组白藜芦醇含量与叶鲜重比最高为426. 63 μ g/g ；亓桂梅与Greasy于2005年发表“乙磷铝和紫外线照射对葡萄叶片中芪类化合物的诱导作用”(中外葡萄与葡萄酒，2005，4 12-16) 一文，其特征在于采用可溶的乙磷铝及UV照射对叶片样本进行诱导处理，离体叶片乙磷铝溶液喷洒浓度范围为0-40g/L并用紫外照射10分钟，对在体叶片诱导后白藜芦醇含量从 1.4 μ g/g增加至17 μ g/g，对葡萄叶片作离体诱导时，无明显效果；上述这些诱导剂使用操作过程中可能对操作人员造成一定的毒害；这些文献及专利所使用方法均以升高叶片白藜芦醇含量为目标，但叶片白藜芦醇最大诱导量未超过450 μ g/g;这些诱导剂的使用并未考虑到葡萄果实白藜芦醇含量变化。尤其是通过可溶性铝对在体葡萄叶片实施诱导处理时，铝的溶出可能会导致葡萄减产甚至会引起铝在葡萄果实中的残留；在农业生产上酸性铝的植物毒性已被成为定论，譬如Foy CD等人于1978年(Annu. Rev. Plant Physiol. ,29 511-566)发表“The physiology of metal toxicity in plant”一文及本发明发明人张波等人于2010年所发表“Aluminum uptake and disease resistance in Nicotianarustica 1 eaves"(Ecotoxicology and environmental safety, 2010, 73 :655-663)均发现艮口便是微量的可溶铝(20 μ M)也能对植物产生明显的毒害作用如抑制生长、损伤叶片，并且随着铝溶出浓度的增加而表现出损伤的剂量依赖效应。所以上述白藜芦醇诱导剂采用可溶性铝如酸性氯化铝、乙磷铝的作法难以进行大田推广。
2002年我国葡萄种植面积近600万亩。随着对葡萄相关产品需求的增加葡萄种植面积呈现快速上升趋势，2009仅新疆维吾尔自治区葡萄种植面积就高达150万亩。为了充分利用这一有利条件和资源，针对已有提高葡萄白藜芦醇含量方法的不足，本发明的现实意义在于提供一种增加葡萄品质、提高葡萄营养保健价值及葡萄生产相关副产品综合利用的方法，又可以缓解白藜芦醇需求增加与生产原料虎杖资源日益紧张的矛盾。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效、稳定、低残留、低毒的诱导葡萄果实及葡萄生产相关副产品(叶片、茎干)中白藜芦醇升高的方法。
本发明目的是通过以下技术方案实现
a、诱导剂的制备将40重量份的NaOH溶于1000重量份的水中制得氢氧化钠溶液；将50-100重量份的无水氯化铝或90-250重量份的AlCl3 · 6H20溶于1000重量份的水中制得氯化铝溶液；将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速不小于IOOml/分钟，搅拌速度800-2000转/分，60-70°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时， 滴速减至50-100ml/分钟，测pH值在5. 5-6. 8之间，停止搅拌，静置M小时，待胶体稳定后取胶体铝备用；
b、诱导剂的稀释选择1重量份的胶体铝加入0-100倍重量份的水，搅拌速度 800-2000转/分，60-70°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
C、干粉诱导剂制备将步骤a制得的胶体铝进行干燥，去除水分后，过100目筛网， 得干粉诱导剂；
d、诱导处理将上述步骤b制得的液态诱导剂对葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量500重量份喷洒1-10重量份液态诱导剂进行诱导处理；将上述步骤b 制得的液态诱导剂1-10重量份喷洒到20-200重量份离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；将上述步骤c制得的干粉诱导剂对葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量5000份喷洒0. 1-10重量份干粉诱导剂进行诱导处理；将上述步骤c制得的干粉诱导剂0. 1-10重量份喷洒到200-2000重量份离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；
上述步骤a、b中所述的水可以是pH < 7的自来水、蒸馏水、去离子水任何一种或混合ο
上述步骤c中所述的干燥为喷雾干燥或烘干干燥，干燥过程温度小于100°C。
上述步骤d中所述的诱导处理时间不小于10小时。
本发明的有益效果
选择稳定升高葡萄叶片及其它部位白藜芦醇含量的方法是使用葡萄相关材料替代虎杖等材料分离制备白藜芦醇的关键；本发明的有益效果在于所使用方法能够稳定的诱导在体及离体葡萄叶片、葡萄茎干及果实中白藜芦醇含量升高，诱导效果不会由于白藜芦醇提取前不可避免的光照，虫害，采摘，温度等生物及环境因素变化而发生明显下降，保障了葡萄材料诱导白藜芦醇含量的稳定性；
选择简易方便的诱导操作方法是田间规模化升高葡萄白藜芦醇含量操作的关键; 本发明的有益效果在于所使用诱导方法操作简单，仅涉及一种诱导物，仅涉及喷洒一个操作环节，无论是液态诱导剂还是干粉诱导剂均便于进行喷洒操作，喷洒后不用洗脱，诱导剂操作喷洒过程不会对操作人员造成人身毒害；本发明的有益效果还在于对葡萄种植过程中任何一个阶段的葡萄果实，叶片及茎干均可进行诱导操作，所用方法对原材料的生长阶段不限制，最大可能性的保障了材料的通用性和易用性；
选择合适的诱导剂是进行葡萄白藜芦醇诱导的关键；本发明选择胶体态的铝及胶体铝干燥后的粉末作为诱导剂，这些铝剂由于PH较以往诱导剂高，在植物表面极微解离并存在缓释效应，故不会在操作过程中大量溶出而发生酸性铝的植物毒害作用；由于土壤的化学特性，本发明所用诱导剂在喷洒过程中的滴漏及散落均不会对大田土壤造成影响；由于所使用胶体铝及其干燥粉剂的难溶特性，在诱导葡萄白藜芦醇升高的同时，极难被葡萄吸收、转运、积累，故不会在葡萄果实内部大量吸收残留，不会危害食用者的健康；
选择诱导剂最佳用量是进行葡萄白藜芦醇诱导的关键；本发明的有益效果在于所选择使用的胶体铝及其干粉的用量在保障稳定诱导的同时，具有较高的诱导率；本发明所使用方法在叶片水平诱导白藜芦醇含量最大升高到30倍，白藜芦醇含量与叶鲜重比最高为883μ g/g ；本发明所使用方法对离体叶片也有较明显的诱导作用，离体叶片白藜芦醇含量最大升高到3倍；本发明所使用方法诱导在体果实白藜芦醇含量平均升高到2-5倍，诱导离体果实白藜芦醇含量最大升高到2倍；本发明所使用方法对茎干也具有较稳定的诱导作用，诱导离体茎干白藜芦醇含量升高到3-5倍；
本发明方法不需要精密仪器或自动化设备，能够在葡萄资源丰富的乡镇企业进行大规模应用，既可增加葡萄品质也可增加葡萄种植废弃物的综合利用，由白藜芦醇属于典型的植保素，其含量在实施过程中升高可使葡萄树对病原菌产生一定的抗性，减少病害所引起的损失；
具体实施方式
下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任何一个或类似实例。
实施例1
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将80份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速200ml/分钟，搅拌速度1200转/分，65°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至75ml/分钟，滴加至溶液pH 值6. 8，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入50倍重量份的水，搅拌速度1200转/分，60°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂对田间种植新梢生长期美国红提葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量500份喷洒10份液态诱导剂进行诱导处理；处理时间10小时； HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到10倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达242μ g/g，果实白藜芦醇含量升高到4倍，受试株微抗霜霉病菌。
实施例2
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将60份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速120ml/分钟，搅拌速度800转/分，60°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至50ml/分钟，滴加至溶液pH值 6. 5，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入20倍重量份的水，搅拌速度900转/分，70°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂对田间种植开花期矢富罗莎葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量500份喷洒8份液态诱导剂进行诱导处理；处理时间15小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到8倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达335 μ g/g，果实白藜芦醇含量升高到5倍，受试株中抗霜霉菌。
实施例3
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将50份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速250ml/分钟，搅拌速度1500转/分，70°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至IOOml/分钟，滴加至溶液pH 值6. 0，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入10倍重量份的水，搅拌速度800转/分，65°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂对田间种植浆果生长期无核紫葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量500份喷洒5份液态诱导剂进行诱导处理；处理时间18小时；HPLC 测得叶片白藜芦醇含量升高到30倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达883 μ g/g，果实白藜芦醇含量升高到5倍，受试株中抗白腐病菌。
实施例4
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将90份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速250ml/分钟，搅拌速度2000转/分，70°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至IOOml/分钟，滴加至溶液pH 值5. 5，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入5倍重量份的水，搅拌速度1500转/分，68°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂对田间种植浆果成熟期赤霞珠葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量500份喷洒2份液态诱导剂进行诱导处理；处理时间20小时；HPLC 测得叶片白藜芦醇含量升高到5倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达174yg/g，果实白藜芦醇含量升高到4倍。
实施例5
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将90份的AlCl3 ·6Η20溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速140ml/分钟，搅拌速度1000转/分，65°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至55ml/分钟，滴加至溶液pH 值6. 7，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入2倍重量份的水，搅拌速度1800转/分，66°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂对田间种植落叶期巨峰葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量500份喷洒1份液态诱导剂进行诱导处理；处理时间M小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到2倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达82 μ g/g，果实白藜芦醇含量升高到2倍。
实施例6
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将160份的AlCl3 · 6H20溶于1000份的水中；将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速180ml/分钟，搅拌速度1800转/分，67°C 水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至70ml/分钟，滴加至溶液 PH值5. 7，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入100倍重量份的水，搅拌速度800转/分，60°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂8份喷洒到80份新梢生长期马奶子葡萄离体叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间10小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到3倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达688 μ g/g,茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到2 倍，受试株中抗霜霉菌；
实施例7
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将250份的AlCl3 · 6H20溶于1000份的水中；将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速MOml/分钟，搅拌速度1900转/分，69°C 水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至85ml/分钟，滴加至溶液 PH值5. 5，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入0倍重量份的水，搅拌速度1200转/分，65°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂5份喷洒到100份开花期矢富罗莎离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间M小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到3倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达119 μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到5倍，果实白藜芦醇含量升高到2 倍；
实施例8
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将120份的AlCl3 · 6H20溶于1000份的水中；将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速160ml/分钟，搅拌速度1200转/分，62°C 水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至60ml/分钟，滴加至溶液 PH值5. 9，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入80倍重量份的水，搅拌速度2000转/分，62°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂10份喷洒到60份浆果生长期无核紫离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间12小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到10倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达310 μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到2倍；
实施例9
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将80份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速200ml/分钟，搅拌速度1200转/分，65°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至75ml/分钟，滴加至溶液pH值6. 8，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入50倍重量份的水，搅拌速度1200转/分，60°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂2份喷洒到150份浆果成熟期赤霞珠离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间18小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到3倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达90 μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到 1. 5 倍；
实施例10
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将60份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速120ml/分钟，搅拌速度800转/分，60°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至50ml/分钟，滴加至溶液pH值 6. 5，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入20倍重量份的水，搅拌速度900转/分，70°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂10份喷洒到20份落叶期巨峰离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间20小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到2倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达80 μ g/g,茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到1. 2 倍；
实施例11
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将50份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速250ml/分钟，搅拌速度1500转/分，70°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至IOOml/分钟，滴加至溶液pH 值6. 0，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
取1份的胶体铝加入10倍重量份的水，搅拌速度800转/分，65°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；
将制得的液态诱导剂1份喷洒到200份落叶期无核白离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间22小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到3倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达21 μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到1. 1 倍；
实施例12
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将80份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速200ml/分钟，搅拌速度1200转/分，65°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至75ml/分钟，滴加至溶液pH 值6. 8，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于60°C进行喷雾干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂对田间种植新梢生长期美国红提葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量5000份喷洒1份干粉诱导剂进行诱导处理；处理时间10小时； HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到3倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达75 μ g/g,果实白藜芦醇含量升高到2倍。
9[0072]实施例13
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将60份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速120ml/分钟，搅拌速度800转/分，60°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至50ml/分钟，滴加至溶液pH值 6. 5，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于80°C进行烘干干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂对田间种植开花期矢富罗莎葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量5000份喷洒0. 5份干粉诱导剂进行诱导处理；处理时间15小时；HPLC 测得叶片白藜芦醇含量升高到2倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达85 μ g/g。
实施例14
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将50份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速250ml/分钟，搅拌速度1500转/分，70°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至IOOml/分钟，滴加至溶液pH 值6. 0，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于90°C进行喷雾干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂对田间种植浆果生长期无核紫葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量5000份喷洒0. 2份干粉诱导剂进行诱导处理；处理时间18小时； HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到5倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达161 μ g/g。
实施例15
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将90份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速250ml/分钟，搅拌速度2000转/分，70°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至IOOml/分钟，滴加至溶液pH 值5. 5，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于98°C进行烘干干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂对田间种植浆果成熟期赤霞珠葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量5000份喷洒0. 1份干粉诱导剂进行诱导处理；处理时间20小时； HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到2倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达71 μ g/g，果实白藜芦醇含量升高到2倍。
实施例16
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将90份的AlCl3 ·6Η20溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速140ml/分钟，搅拌速度1000转/分，65°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至55ml/分钟，滴加至溶液pH 值6. 7，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于60°C进行喷雾干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂对田间种植落叶期巨峰葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量5000份喷洒5份干粉诱导剂进行诱导处理；处理时间M小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到1. 5倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达62 μ g/g。
实施例17
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将120份的AlCl3 · 6H20溶于1000份的水中；将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速160ml/分钟，搅拌速度1200转/分，62°C 水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至60ml/分钟，滴加至溶液 PH值5. 9，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于80°C进行烘干干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂对田间种植新梢生长期美国葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量5000份喷洒10份干粉诱导剂进行诱导处理；处理时间10小时；HPLC 测得叶片白藜芦醇含量升高到5倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达139 μ g/g，果实白藜芦醇含量升高到3倍。
实施例18
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将250份的AlCl3 · 6H20溶于1000份的水中；将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速MOml/分钟，搅拌速度1900转/分，69°C 水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至85ml/分钟，滴加至溶液 PH值5. 5，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于98°C进行烘干干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂1份喷洒到800份新梢生长期美国红提离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间10小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到2倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达50 μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到1. 1倍；
实施例19
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将120份的AlCl3 · 6H20溶于1000份的水中；将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速160ml/分钟，搅拌速度1200转/分，62°C 水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至60ml/分钟，滴加至溶液 PH值5. 9，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于60°C进行喷雾干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂0. 5份喷洒到1600份开花期矢富罗莎离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间M小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到1. 5倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达65 μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到1. 3倍；
实施例20
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将80份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速200ml/分钟，搅拌速度1200转/分，65°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至75ml/分钟，滴加至溶液pH 值6. 8，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于80°C进行烘干干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂0. 1份喷洒到2000份浆果生长期无核紫离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间12小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到2倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达阳μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到1. 1倍；
实施例21[0105]将40份的NaOH溶于1000份的水中；将60份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速120ml/分钟，搅拌速度800转/分，60°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至50ml/分钟，滴加至溶液pH值 6. 5，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于90°C进行喷雾干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂2份喷洒到400份浆果成熟期赤霞珠离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间18小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到2倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达68 μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到 2倍；
实施例22
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将50份的无水氯化铝溶于1000份的水中； 将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速250ml/分钟，搅拌速度1500转/分，70°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至IOOml/分钟，滴加至溶液pH 值6. 0，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于98°C进行烘干干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂5份喷洒到400份落叶期巨峰离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间20小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到2倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达80 μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到2倍；
实施例23
将40份的NaOH溶于1000份的水中；将160份的AlCl3 · 6H20溶于1000份的水中；将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速180ml/分钟，搅拌速度1800转/分，67°C 水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至70ml/分钟，滴加至溶液 PH值5. 7，停止搅拌，静置M小时，待胶体形成并稳定后取胶体铝备用；
将胶体铝于90°C进行喷雾干燥，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；
将制得的干粉诱导剂10份喷洒到200份落叶期无核白离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；处理时间22小时；HPLC测得叶片白藜芦醇含量升高到4倍，叶片平均白藜芦醇含量鲜重比达30μ g/g，茎干白藜芦醇含量升高到3倍，果实白藜芦醇含量升高到1. 2 倍。
权利要求
1. 一种升高葡萄白藜芦醇含量的方法，其特征在于采取方法如下 a、诱导剂的制备将40重量份的NaOH溶于1000重量份的水中制得氢氧化钠溶液；将 50-100重量份的无水氯化铝或90-250重量份的AlCl3 · 6H20溶于1000重量份的水中制得氯化铝溶液；将氢氧化钠溶液滴入氯化铝溶液中，初始滴速不小于IOOml/分钟，搅拌速度 800-2000转/分，60-70°C水浴加热，当氢氧化钠溶液用量接近氯化铝体积3/4时，滴速减至 50-100ml/分钟，测pH值在5. 5-6. 8之间，停止搅拌，静置M小时，待胶体稳定后取胶体铝b、诱导剂的稀释选择1重量份的胶体铝加入0-100倍重量份的水，搅拌速度 800-2000转/分，60-70°C水浴加热，待胶体稳定后作为液态诱导剂进行使用；C、干粉诱导剂制备将步骤a制得的胶体铝通过喷雾或烘干方式进行干燥，干燥过程温度小于100°C，去除水分后，过100目筛网，得干粉诱导剂；d、诱导处理将上述步骤b制得的液态诱导剂对葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量500重量份喷洒1-10重量份液态诱导剂进行诱导处理；将上述步骤b制得的液态诱导剂1-10重量份喷洒到20-200重量份离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；将上述步骤c制得的干粉诱导剂对葡萄树进行喷洒，将葡萄树地上部分以每公顷生物量5000份喷洒0. 1-10重量份干粉诱导剂进行诱导处理；将上述步骤c制得的干粉诱导剂 0. 1-10重量份喷洒到200-2000重量份离体葡萄叶、茎干及果实上进行诱导处理；上述诱导处理时间不小于10小时。
2.根据权利要求
1所述的一种升高葡萄白藜芦醇含量的方法，其特征在于所述的诱导剂制备及稀释步骤所用的水是PH < 7的自来水、蒸馏水、去离子水任何一种或混合。
专利摘要
本发明提供了一种从升高葡萄叶、葡萄茎及葡萄果实中白藜芦醇含量的方法，包括胶体铝诱导剂及干粉的制备、稀释及在葡萄材料诱导的相关使用方法。本发明具有高效、稳定、低残留、低毒的诱导葡萄果实及葡萄生产相关副产品(叶片、茎干)中白藜芦醇升高的特点。本发明方法不需要精密仪器或自动化设备，能够在葡萄资源丰富的乡镇企业进行大规模应用，既可增加葡萄品质也可增加葡萄种植废弃物的综合利用，还可使葡萄树对病原菌产生一定的抗性，减少病害所引起的损失。
文档编号A01G17/00GKCN102047827 B发布类型授权 专利申请号CN 201010509046
公开日2012年5月9日 申请日期2010年10月18日
发明者张波, 杨晓燕, 王晓琴, 郑秋生, 黄方爱 申请人:张波导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan