海南眼树莲醇提取物抗炎活性成分及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中医中药技术领域，特别涉及一种海南眼树莲醇提取物抗炎活性成 分，还涉及所述的海南眼树莲醇提取物抗炎活性成分的应用。
【背景技术】
[0002] 眼树莲（学名：Dischidiachinensis)是萝蘑科眼树莲属附生藤本植物，是中国 的特有植物，别名：瓜子金、瓜子藤、滴锡藤等。在我国主要分布于海南、广东、广西等省区， 在海南主要产于乐东、三亚、保亭等地，生长在低海拔至中海拔的山地林谷或旷地。眼树莲 全株入药，有清肺化痰，凉血解毒之效，民间用于治疗肺燥咳痰，咳血，百日咳，小儿疳积，痢 疾，疥疮毒脓，铁打肿痛，毒蛇咬伤。海南黎族地区用其全草煮水熏眼，治疗眼疾。霍丽妮等 从眼树莲全株中分得总酚和总酮成分，经研究显示其具有体外抗氧化活性。目前国内外尚 未见有关眼树莲急性毒性和药理活性的研究报道，对其抗炎活性成分及提取，也很少有相 关的研究。
【发明内容】
[0003] 为了解决以上对眼树莲开发应用方面的不充分的问题，本发明提供了一种眼树莲 醇提取物抗炎活性成分。本文采用二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性增加、 鸡蛋清诱导大鼠足肿胀三种炎症模型考察眼树莲水提取物与乙醇提取物的抗炎效果，为进 一步开发利用该植物的药用资源提供理论依据。本文首次通过系统溶剂法，获得眼树莲醇 提取物不同溶剂萃取部位，通过动物药理实验初步筛选出其抗炎活性部位，为进一步寻找 眼树莲抗炎作用的有效成分提供科学依据。
[0004] 本发明还提供了所述的眼树莲醇提取物抗炎活性成分的应用。
[0005] 本发明是通过以下措施实现的：
[0006] -种海南眼树莲醇提取物抗炎活性成分，是通过以下步骤得到的：
[0007] (1)取干燥的眼树莲，粉碎后过40目筛，以30倍量95 %乙醇浸泡过夜，然后以超 声波提取2h，超声频率为40~50KHz，超声温度为40~50°C，重复上述浸泡超声提取步骤 3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，获得浸膏；将浸膏进行以下步骤：a)将浸膏加水 溶解，经大孔吸附树脂，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；b)用10~50%乙醇溶液洗 脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；c)用60~90 %乙醇溶液洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱 液；d)将c)中获得的洗脱液经脱色树脂柱D941色谱，用95%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压 浓缩，即得乙醇提取物；
[0008] (2)将乙醇提取物加水悬浮，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压浓缩，分 别得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。
[0009] 优选步骤（2)中悬浮液分别用乙酸乙酯和正丁醇体积比1:1的混合溶剂，乙酸乙 酯和正丁醇体积比1:2的混合溶剂，乙酸乙酯、正丁醇和石油醚体积比1:2 :0. 1的混合溶剂 萃取。
[0010] 所述的海南眼树莲醇提取物抗炎活性成分，优选步骤（2)中乙醇提取物和水的重 量比为1:10~20。
[0011] 所述的海南眼树莲醇提取物抗炎活性成分，优选步骤（2)中石油醚、乙酸乙酯、正 丁醇与悬浮液的体积比分别为1:1~3。
[0012] 所述的海南眼树莲醇提取物抗炎活性成分，优选步骤（2)中石油醚、乙酸乙酯、正 丁醇萃取时间分别为5~lOmin。
[0013] 所述的海南眼树莲醇提取物抗炎活性成分，优选步骤（1)中步骤（a)浸膏加水溶 解中浸膏和水的重量比为1:1。
[0014] 所述的海南眼树莲醇提取物抗炎活性成分在制备抗炎药物中的应用。
[0015] 所述的海南眼树莲醇提取物抗炎活性成分与医学上可接受载体制备成片剂、糖衣 片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、 微球剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射 剂、注射乳剂、冻干粉针、缓释或控释制剂。
[0016] 本发明的有益效果：
[0017] 1、本发明简单合理，同时可以得到眼树莲醇提取物的乙酸乙酯萃取物（醇）、正丁 醇萃取物（醇）两个抗炎有效部位，是海南眼树莲这种天然产物在抗炎作用中的新发现；
[0018] 2、小鼠对眼树莲醇提取物最大耐受量为生药量206. 45g/kg，给药后小鼠未出现明 显毒性反应和死亡情况，且该药对小鼠正常生长无明显影响，说明眼树莲醇提取物毒性小， 具有良好的药用价值开发前景；
[0019] 3、本申请的正丁醇萃取物（醇）高、中、低剂量组和乙酸乙酯萃取物（醇）高、中、 低剂量组均对二甲苯引起的耳肿胀、醋酸引起的毛细血管通透性增加、鸡蛋清诱导大鼠足 肿胀均有明显的抑制作用，能够有效缓解炎症发生过程的早期症状；
[0020] 4、为眼树莲在肺燥咳痰，咳血，百日咳，小儿疳积，痢疾，疥疮毒脓，铁打肿痛，毒蛇 咬伤治疗的民间用药方面，提供了一定的实验依据；
[0021] 5、通过聚酰胺树脂法和硅胶快速色谱法技术对正丁醇萃取物（醇）和乙酸乙酯萃 取物（醇）进行分离纯化，发现正丁醇萃取物（醇）和乙酸乙酯萃取物（醇）总黄酮和萜 类总含量大于50%，化学成分的初步确定为以后单体化合物的纯化和开发成抗炎药物奠定 科学基础；
[0022] 6、本发明得到乙酸乙酯萃取物（醇）、正丁醇萃取物（醇）两个抗炎有效部位，可 以在药学上接受载体或赋形剂制备成药物制剂，这些药物制剂可以选自以下剂型：片剂、糖 衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊 剂、微球剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注 射剂、注射乳剂、冻干粉针，还可以根据需要制备成缓释或控释制剂。
【具体实施方式】
[0023] 为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。
[0024] 实施例1 :水提取
[0025] 1 材料
[0026] 1. 1药物和试剂眼树莲采自海南省海口市火山口，经中国热带农业科学院生物研 究所戴好富研究员鉴定萝蘑科（Asexepiadaeeae)眼树莲属（DisehidiaR.B)植物眼树莲(DischidiachinensisChamp.exBenth)全株。阿司匹林肠溶片（江苏平光制药有限责 任公司，批号：140801);伊文思蓝（BS，5g，阿拉丁试剂上海有限公司）；0.9%氯化钠注射液 (药用级，湖南金健药业有限责任公司）；羧甲基纤维素（AR，500g/瓶，国药集团化学试剂 厂）；二甲苯（AR，500mL/瓶，天津大茂制药化学试剂厂）；正丁醇、醋酸乙酯和石油醚均为 分析纯。
[0027] 1. 2动物昆明种小鼠，清洁级，体重质量18~22g，长沙市天勤生物技术有限公 司提供，实验动物使用许可证号：SCXK(湘）2014-0011，合格证号：43006700005502。SD大 鼠，清洁级，体重质量（180±20)g，长沙市天勤生物技术有限公司提供，实验动物使用许可 证号：SCXK(湘）2014-0011，合格证号：43006700005574。根据实验性质和性别分笼喂养，适 应环境1周，自由饮水进食。
[0028] 1. 3仪器AE100型电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；T520电子天 平（湖南长沙湘仪）；722N型可见分光光度计（上海精密科学仪器公司）；800C型台式低 速离心机（上海安亭科学仪器有限公司）；C-YLS-Q4型耳片打孔器（北京哲成科技有限公 司）；大鼠足容积测定装置（自制）。
[0029] 2 方法
[0030] 2. 1供试样品的制备取干燥眼树莲5kg，粉碎后过40目筛，以30倍量水浸泡过 夜，然后以超声波提取2h，超声频率为40~50KHz，温度70-80°C，在超声波提取1. 5小时 后，同时开启煎煮，共煎煮30min，重复上述浸泡、超声、煎煮3次，冷却，过滤，合并滤液，减 压浓缩至浸膏状，即得水提取物229. 5g，回收率为4. 59%。取适量水提取物加5倍水悬浮 得悬浮液，依次用乙酸乙酯、正丁醇、石油醚萃取，乙酸乙酯、正丁醇、石油醚与悬浮液的体 积比分别是1:5,萃取时间分别为5~lOmin，减压浓缩，得乙酸乙酯萃取物（水）、正丁醇萃 取物（水）、石油醚萃取物（水），分别加1 %的羧甲基纤维素水溶液配制成所需浓度，分别 作为供试样品；另外将经各种溶剂萃取后剩余水溶液浓缩，作为水液组。
[0031] 2. 2对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响取昆明种小鼠120只，雄性，随机分为12组： 即空白对照组（1%的羧甲基纤维素水溶液）；阿司匹林组；眼树莲正丁醇萃取物（水）高 (H)、中（M)、低（L)剂量组；乙酸乙酯萃取物（水）高⑶、中（M)、低（L)剂量组；石油醚萃 取物（水）高⑶、中（M)、低（L)剂量组；水液组；每组10只，称重，标记。灌胃给药，各组 小鼠灌胃1次/d，连续5d，给药体积0.lmL/10g，末次给药后lh，将小鼠右耳双面均匀涂抹 二甲苯2yL/只，左耳不涂作为对照，lh后脱颈处死小鼠，用9_打孔器分别在双耳相同位 置打下耳片，置于电子天平上称取耳片重量，以左右耳片重量差值表示肿胀度，采用q检验 比较各组间耳肿胀度，并计算肿胀抑制率。
[0032] 肿胀抑制率（％ ) = [(空白对照组平均耳肿胀度一给药组平均耳肿胀度）/空白 组平均耳肿胀度]X100 (% )
[0033] 结合多次二甲苯致炎预实验结果，确定各个不同提取部位的高、中、低剂量分别 48、24、12mg?KgS阿司匹林给药组给药剂量500mg?KgS空白对照组为1%羧甲基纤维素 水溶液；各实验组给药量均为〇.lmL/10g。实验结果（见表1)表明，与空白对照组比较，对 二甲苯所致小鼠耳廓急性炎性肿胀，正丁醇萃取物（水）高、中剂量组和乙酸乙酯萃取物 (水）高、中剂量组均有明显抑制作用，且与空白对照组比较差异性极其显著（P< 0.01); 这两种萃取物高、中剂量抑制作用与阿司匹林组相比无显著差异（P>〇. 05)，表明这两种萃 取物能对小鼠二甲苯致炎肿胀起一定抑制作用，且这两种萃取物间，有一定的量