一种蜂胶乙醇提取液的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物提取技术领域，更具体地说涉及一种蜂胶乙醇提取液的制备方 法。
【背景技术】
[0002] 蜂胶是一种具有广谱生物学活性和免疫增强作用的天然物质，具有抗感染、抗肿 瘤、增强免疫、抗氧化、抗炎等广泛的药理作用。黄酮类化合物是蜂胶发挥药理作用的主要 物质基础。
[0003]目前，蜂胶提取方法主要分为醇提和水提两类。蜂胶中黄酮类化合物能溶于醇类， 通过醇类的多次浸提把蜂胶中的黄酮类物质提取出来。因此，国内外蜂胶的提取，大部分还 是采用乙醇作提取溶剂，用乙醇提取蜂胶目前仍是一种方便、经济、有效的方法。但乙醇提 取法生产周期长，且提取效率低、不稳定。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的提供一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，该制备方法提取率高，特别 解决目前提取方法中黄酮含量不稳定的问题，同时提取工艺简单，生产成本低。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0006] -种蜂胶乙醇提取液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤： a.将蜂胶置于2~8°C条件下冷冻12~24h，通过高能万用粉碎机粉碎并过40目筛筛分备 用；b.向粉碎后的蜂胶颗粒加入浓度为75~95%的乙醇溶液，按蜂胶与乙醇比例为1:4~ 1:8 (W/V)提取，经冷却、过滤，即得蜂胶乙醇浸出液。
[0007] 进一步地，所述的步骤（2)中的乙醇浓度为95%。
[0008] 进一步地，所述的步骤（2)的蜂胶与乙醇比例为1:4(W/V)。
[0009] 进一步地，所述的步骤（2)中的提取温度为25~60°C，优选25°C。
[0010] 进一步地，所述的步骤（2)中的提取时间为36~72h，优选48h。
[0011] 进一步地，所述的蜂胶乙醇提取液作为佐剂应用于疫苗抗体中。
[0012] 本发明的有益效果在于：该蜂胶乙醇提取液的制备方法提取工艺简单，生产周期 短，成本低，蜂胶提取物中黄酮含量稳定；该蜂胶乙醇提取物可以更好的作为佐剂应用于疫 苗中。
【具体实施方式】
[0013] 下面详细说明本发明的具体实施，有必要在此指出的是，以下实施只是用于本发 明的进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域技术熟练人员根据上述本
【发明内容】
对本发明做出的一些非本质的改进和调整，仍然属于本发明的保护范围。
[0014] 主要原料与试剂：蜂胶由山东临清市清坤蜂蜡巢础加工厂提供，95%乙醇、氢氧化 钠、乙酸乙酯、乙醚丙酮、碳酸氢钠、亚硝酸钠、硝酸铝购自中国药品生物制品检定所。
[0015] 实施例1蜂胶的预处理
[0016] 将蜂胶置入2~8°C条件下冷冻12~24小时变硬变脆后，利用高能万用粉碎机粉 碎冷藏后的蜂胶。取出蜂胶磨碎过40目筛筛分，混合均匀，放入干燥器中至恒重，称5g若 干份备用。
[0017] 实施例2不同极性溶剂对提取蜂胶中总黄酮含量的影响
[0018] 取处理过的蜂胶5g，依次用5%碳酸氢钠、95%乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、水作 溶剂提取，每种溶剂分别浸提12h、24h、48h、72h。过滤取滤液按芦丁标准品法测定其在不同 浸提时间的总黄酮的含量。
[0019] 用不同溶剂浸提蜂胶，其总黄酮含量比较见表1。
[0020] 表1不同溶剂提取液中总黄酮含量
[0021]
[0022] 注：此表中的黄酮，为总黄酮，单位为％。
[0023] 由表1看出，从乙醚到水是按极性由弱到强排列。乙醚、丙酮、乙酸乙酯极性弱能 较多地提取出极性弱的黄酮类物质；正丁醇极性中等，则极性强、弱的黄酮类物质都能较多 浸提出，故浸提效果最好；乙醇由于极性稍强，黄酮类物质中部分弱极性物质提出较少；水 溶液因强极性，蜂胶中脂溶性物质很难浸出故黄酮类含量很低。根据溶剂的价格、使用安全 性及回收率等因素，选择乙醇作为提取蜂胶的溶剂。
[0024] 实施例3不同浓度乙醇对蜂胶黄酮总含量的影响
[0025] 溶剂制备：取无水乙醇，按体积比分别稀释成含乙醇30%、60%、75%、95%的溶 剂。
[0026] 处理：取粉碎过的蜂胶5g，冷处理2h后加入上述浓度的乙醇20ml在室温下 (25°C)浸提48h后过滤取滤夜，测定以不同浓度乙醇提取物的总黄酮含量。
[0027] 4种不同浓度乙醇浸提总黄酮含量的比较见表2。
[0028] 表2不同浓度乙醇浸提总黄酮含量
[0029]
[0030] 注：上表中的黄酮为总黄酮含量，单位为％。
[0031] 在确定提取时间24h，提取温度为25°C不变的条件下，考察不同酒精的浓度对蜂 胶总黄酮提取率的影响，由表2可以看出，随着酒浓度的增加，乙醇提取蜂胶黄酮的提取率 也逐渐增大，浓度为95 %的乙醇提取液中总黄酮含量最高，所以选用95 %的乙醇作为蜂胶 的提取溶剂。
[0032] 实施例4不同提取温度对蜂胶黄酮总含量的影响
[0033] 以蜂胶与95%乙醇按1:4比例（W/V)在2~8°C、室温下（25°C)、37°C及60°C静 置浸提48h，各取提取液测定在不同提取温度下制备的乙醇提取物的总黄酮含量。
[0034] 不同温度下提取蜂胶的总黄酮含量见表3。
[0035] 表3不同温度条件下浸提蜂胶总黄酮含量
[0036]
[0037] 在提取的过程中，提取温度对最终提取物黄酮含量的重要因素。食用酒精浓度固 定为95%的条件下，分别采用不同的固液比对蜂胶进行提取实验，由表3可知，在2~8°C、 室温、37 °C、60 °C范围内，随着温度的升高，蜂胶中黄酮的提取率也随之增加，但影响幅度不 显著，说明温度不是影响总黄酮含量的主要因素。考虑蜂胶中蜂蜡的溶解度和能耗方面的 问题，确定蜂胶的提取温度在室温（25°C)进行。
[0038] 实施例5不同蜂胶与95%乙醇比例（W/V)对蜂胶总黄酮含量的影响
[0039] 设定蜂胶与95%乙醇比例（W/V)分别为1:1、1:2、1:4、1:8，在常温先进行浸提 48h，取提取液测定不同蜂胶与95%乙醇比例中的总黄酮含量。
[0040] 不同蜂胶与95%乙醇比例（W/V)提取蜂胶总黄酮含量见表4。
[0041] 表4不同蜂胶与95%乙醇比例（W/V)提取蜂胶总黄酮含量
[0042]
[0043] 提取的过程中，提取固液比是影响最终提取物黄酮含量的重要因素。由表4可知， 酒精浓度固定为95%的条件下，温度为25°C分别采用不同的固液比对蜂胶进行提取实验， 随着固液比的增大，蜂胶黄酮的提取率也在增大，考虑到成本及工艺的简化问题，我们采取 蜂胶与95%乙醇比例为1:4作为优化条件。
【主权项】
1. 一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤： (1) 将蜂胶置于2~8°C条件下冷冻12~24h，并通过高能万用粉碎机磨碎过筛； (2) 向粉碎后的蜂胶颗粒加入浓度为75~95%的乙醇溶液，按蜂胶与乙醇比例为 1:4~1:8(W/V)提取，经冷却、过滤，即得蜂胶乙醇提取液。2. 根据权利要求1所述的一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，其特征在于，所述的步骤 (2)中的乙醇浓度为95%。3. 根据权利要求1所述的一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，其特征在于，所述的步骤 (2)的蜂胶与乙醇比例为1:4(W/V)。4. 根据权利要求1所述的一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，其特征在于，所述的步骤 (2)中的提取温度为25~60°C，优选25°C。5. 根据权利要求1所述的一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，其特征在于，所述的步骤 (2)中的提取时间为36~72h，优选48h。6. 根据权利要求1所述的一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，其特征在于，所述的蜂胶 乙醇提取液作为佐剂应用于疫苗中。
【专利摘要】本发明提供了一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，属于化合物提取技术领域，其以蜂胶为原料，制备方法包括如下步骤：a.将蜂胶置于2～8℃条件下冷冻12h，并通过高能万用粉碎机磨碎过筛；b.向粉碎后的蜂胶颗粒加入浓度为75～95％的乙醇溶液，按蜂胶与乙醇比例为1:4～1:8(W/V)提取，经冷却、过滤，即得蜂胶乙醇提取液。本发明的蜂胶乙醇提取液的制备方法提取工艺简单，生产成本低，蜂胶提取物中黄酮含量稳定；该蜂胶乙醇提取物可以作为佐剂应用于疫苗中。
【IPC分类】A61K39/39, A61P37/04
【公开号】CN105363030
【申请号】CN201510896833
【发明人】王永明, 李鹏, 王晓丽, 朱万光, 任明明, 马大亮, 李贝, 李士成
【申请人】山东华宏生物工程有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年12月7日